ICS11.020 CCSC50 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T230—2024 代替WS/T230—2002 实时荧光聚合酶链反应 临床实验室应用指南 Guidelinesforimplementationofreal-timefluorescentpolymerasechainreactionin clinicallaboratories. 2024-05-09发布 2024-11-01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会  发布WS/T230—2024 I目次 前言..................................................................................II 1范围.................................................................................1 2规范性引用文件.......................................................................1 3术语和定义...........................................................................1 4缩略语...............................................................................3 5样本采集和处理.......................................................................3 6方法.................................................................................7 7污染预防和控制.......................................................................8 8质量管理............................................................................10 9结果判读和报告......................................................................15 10实验室生物安全.....................................................................16 11临床适用范围.......................................................................16 附录A（资料性附录）常用实时荧光PCR技术方法........................................17 附录B（资料性附录）实时荧光PCR技术临床适用范围....................................18 参考文献..............................................................................21WS/T230—2024 II前言 本标准为推荐性标准。 本标准代替WS/T230—2002《临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用》，与WS/T230—2002 相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： ——更改了“范围”部分（见第1章，2002年版的第1章），较WS/T230—2002将所述技术范畴由“PCR” 缩小为“实时荧光PCR”； ——增加了“规范性引用文件”部分（见第2章）； ——更改了“术语和定义”部分（见第3章，2002年版的第2章）； ——增加了“缩略语”部分（见第4章）； ——将“标本的收集、运输、处理和存放”部分更改为“样本采集和处理”，对2002年版相关内容 进行细化补充后纳入（见第5章，2002年版的第5章）； ——在“方法”中增加了针对实时荧光PCR技术的扩增体系、扩增反应内容，删除了该技术以外的 其他PCR产物分析方法（见第6章，2002年版的第4章）； ——在“污染预防和控制”中增加了污染的处理与控制要求内容（见第7章，2002年版的第6章）； ——将“质量控制”部分更改为“质量管理”，增加了人员及实验室、设备管理要求、方法性能验 证、室内质控、实验室间比对要求内容（见第8章，2002年版的第7章）； ——将“结果的判读、报告和解释”部分更改为“结果判读和报告”，增加检测方法局限性、结果 报告要素、检测结果解释内容（见第9章，2002年版的第8章）； ——增加了“实验室生物安全”部分（见第10章）； ——将“用途”部分更改为“临床适用范围”，删除了过筛实验、诊断实验、验证实验内容（见第 11章，2002年版的第3章）； ——删除了2002年版“附录”内容（见2002年版的附录A“定量PCR技术”、附录B“对生产厂商的 要求和建议”）； ——增加了资料性附录A“常用实时荧光PCR技术方法”（见附录A）； ——增加了资料性附录B“实时荧光PCR技术临床适用范围”（见附录B）。 本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责技术审查和技术咨询,由国家卫生 健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查,由国家卫生健康委员会医政司负责业务管理、法 规司负责统筹管理。 本标准主要起草单位：复旦大学附属中山医院、昆明医科大学第一附属医院、中国科学技术大学附 属第一医院、复旦大学附属华山医院、北京大学人民医院、浙江省人民医院、中国疾病预防控制中心性 病艾滋病预防控制中心。 本标准主要起草人：潘柏申、郭玮、段勇、沈佐君、关明、赵晓涛、童向民、邱茂锋、王蓓丽。 本标准于2002年首次发布，本次为第一次修订。WS/T230—2024 1实时荧光聚合酶链反应临床实验室应用指南 1范围 本标准规定了实时荧光聚合酶链反应在临床实验室应用中的样本采集和处理、方法、污染预防和控 制、质量管理、结果判读和报告、实验室生物安全、临床适用范围等要求。 本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及医学检验实验室开展核酸扩增基因定性及定量检测。 本标准不适用于基于核酸杂交、核酸恒温扩增、基因测序等技术所开展的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 标准。 GB/T37874核酸提取纯化方法评价通则 GB/T40974核酸样本质量评价方法 JJF1874（自动）核酸提取仪校准规范 JJF1527聚合酶链反应分析仪校准规范 WS233病原微生物实验室生物安全通用准则 WS/T348尿液标本的采集与处理 WS/T414室间质量评价不合格原因分析 WS/T640临床微生物学检验标本的采集和转运 WS/T661静脉血液标本采集指南 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 聚合酶链反应polymerasechainreaction;PCR 一种利用人工合成的寡核苷酸作为引物介导的DNA目标序列特异性酶促扩增技术。当存在模板、底 物、引物和耐热DNA聚合酶时，通过调节反应温度引导多次“变性-退火-延伸”反应循环，可令痕量DNA 模板扩增数百万倍。 实时荧光聚合酶链反应real-timefluorescencepolymerasechainreaction;real-timePCR 在PCR反应体系中引入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，通过连续监测绘制 反应动力曲线，从而对样本中被扩增模板DNA的初始含量进行计算。该技术包含定性和定量检测，常以 qPCR（quantitativepolymerasechainreaction）代表定量检测。 反转录reversetranscription;RT 以RNA单链为模板，在反转录酶催化下合成互补DNA（即cDNA）的过程。 模板template 复制或转录、反转录过程中用来产生互补链的DNA或RNA核苷酸序列。 WS/T230—2024 2目标序列targetsequence 拟通过PCR技术进行定性或定量检测的特定核酸序列区域。 引物primer 具有特定序列的人工合成寡核苷酸片段，可与目标序列区域上下游互补，从而形成稳定的氢键连接， 促进DNA聚合酶的结合和DNA链的延伸。 荧光探针fluorescentprobe 根据特定基因序列设计的标记有荧光基团和淬灭基团的人工合成寡核苷酸片段，与互补序列退火杂 交后，通过PCR扩增酶促反应释放荧光信号，用于检测样本中是否含有特定基因序列。 变性denaturation PCR反应体系中，利用高温条件破坏核酸二级结构中的氢键，使DNA与RNA均从复杂高级结构转变为 线性单链核苷酸的过程。 退火annealing PCR反应体系中，需通过降低反应体系温度，使两条线性单链核苷酸通过互补碱基间的氢键形成局 部双链的过程。 延伸extension PCR反应体系中，引物与模板发生退火后，在耐热DNA聚合酶作用下，根据模板DNA的碱基顺序，以 单个核苷酸为原料，自引物5’端向3’端逐个添加核苷酸合成两条互补链的过程。 DNA聚合酶DN