鳞球茎茎线虫检疫鉴定方法 Methods for quarantine and identification of Ditylenchus dipsaci (Kuhn) Filipjev SN/T 1141—2002 前言 本标准的附录B和附录C为规范性附录，附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、南京农业大学。本标准主要起草 人：宋绍祚、戚龙君、林茂松。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 1范围 本标准规定了对鳞球茎茎线虫检疫和鉴定方法。 本标准适用于花卉和蔬菜的块茎、鳞茎、球茎等根茎部分和其他寄主植物种子、花、茎、叶 及残体中鳞球茎茎线虫的检疫和鉴定。 2原理 鳞球茎茎线虫Stem andbulbnematode，学名：Ditylenchusdipsaci(Kuhn，1857) FiIipjeV，属于线虫门（Nemata）、侧尾腺纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、粒线虫科 (Anguinldae）、茎线虫属（Dityenchus)。是一种迁移性内寄生线虫，被侵染的球茎发生腐烂，切 成片时有褐色环纹。受侵染的植株常矮化、肿胀、畸形，甚至最终死亡。在植物的种子、花、花 序、芽、茎、匍匐茎、根状茎及土内可发现此虫。 该线虫是一种危害450多种植物（参见附录A)的寄生性线虫，又称作起绒草茎线虫，它的地理 分布、寄主范围、传播途径、生物学和形态学特征是该检疫鉴定方法的依据。 3仪器、用具 信息服务平台 3.1生物显微镜（100倍一1000倍，具有目镜测微尺或者绘图仪、监视器等）。 3.2体视显徽镜（10倍～90倍，具透射光源）。 3.3冰箱。 3.4加热板（80℃以下）。 3.5打孔器。 3.6载玻片。 3.7盖玻片。 3.8分样筛（100目、500目）。 3.9烧杯(500mL、1000mL)。 3.10漏斗。 3.11漏斗架。 3.12乳胶管。 3.13止水夹。 3.14凹玻片。 3.15指形管。 3.16剪刀。 3.17挑针。 3.18浅盘（上盘、下盘）。 3.19线虫滤纸。 3.20酒精灯。 3.21培养皿。 3.22试管。 3.23纱布。 3.24干燥器。 行业标准信息 3.25记号笔。 3.26玻璃纤维丝（3mm~ 4药品 4.1 指甲油。 4.2TAF固定液（40%甲醛7mL、三乙醇胺2mL和蒸馏水91mL混合而成）。 4.3乳酚油（苯酚20mL、乳酸20mL、甘油40mL和蒸馏水20mL混合而成）。 4.4石蜡。 5现场检疫 5.1抽样 5.1.1抽样方法 棋盘式、五点式或随机抽样。 5.1.2抽样数量 5.1.2.1块茎、鳞茎、球茎 按总件数的5%～20%抽样，最低抽检10件且不少于1000粒，取样的数量为：500粒以下取 一份；501粒～2000粒取二份；2001粒5000粒取三份；5001粒～10000粒取四份；10001 粒以上每增加10000粒增取一份样品，不足10000粒的余量计取一份样品。每份样品为20粒。 5.1.2.2整株植物或者插枝 按总件数的5%～20%抽样，最低抽检10件且不少于500株。取样的数量为：50株以下抽取 五株；51株～200株抽取10株；201株～1000株抽取15株；1001株～5000株抽取20株；5001株 以上每增加5000株增取五株，不足5000株的余量计取五株样品。 5.1.2.3种子 按总件数的5%～20%抽样，最低抽检10件，小包装（指最小单位包装不大于0.5kg的），只 扦取室内检验样品。取样数量为：10kg以下取一份；11kg～100kg取二份；101kg～500kg取 001kg～10000kg取七份；10001kg100000kg，每增加5000kg增取一份样品，不足5 000kg的余量，计取一份样品；100001kg以上每增加50000kg增取一份样品，不足50000kg 的余量，计取一份样品。每份样品的重量为1kg～2kg。 5.2外观症状的检查 对花卉和蔬菜的块茎、鳞茎、球茎等根茎部分和其他寄主植物种子及花、茎、叶进行检查， 注意检查有无矮化、肿胀、畸形和腐烂等症状，收集上述可疑植物材料及所夹带的土壤等，一并 带回实验室检验。 6实验室检验 对于抽取的样品，可用浅盘分离法或漏斗法分离线虫（见附录B）。分离获得的水样在体视显 微镜下检查，然后挑取线虫若干条制成临时玻片（制作方法见附录C)在显微镜下镜检，观察线虫 标准信息服 的形态结构。 7形态鉴定特征 7.1茎线虫属形态鉴定特征 雌虫一般不肥大，不弯成螺旋形，长0.6mm～1.5mm，有的可达2mm；表皮有很细的环纹， 侧区有四条至六条刻线；口针细小，多数长度为7um～11um；中食道球有或无瓣，偶尔无明显的 中食道球，峡部与后食道腺之间无缢缩，后食道腺短或长，不覆盖、短覆盖或长覆盖肠；雌虫单 生殖腺、前伸，卵巢短或长，有时伸达食道区或转折，卵母细胞一行至二行排列，子宫柱状部有 四排细胞（每排四个细胞），后阴子宫囊有或无。雄虫精巢不转折，精细胞大（通常直径3μm～5μ m），交合伞不伸到尾端，延伸至尾长的四分之一至四分之三处。交合刺窄细，基部宽大，其上具 特殊的突起。两性尾形相似，呈长圆锥形到近柱形，偶尔丝状，多数c’（尾长一肛门或泄殖腔处 体宽）为4～7。寄主不形成虫瘘。 7.2鳞球茎茎线虫形态鉴定特征 7.2.1测计值 表1 鳞球茎茎线虫测计值 数据来源 L / mm b c V a T n/条 雌虫 1. 0~1.3 36~40 6.5~7. 1 14~18 80 Thorne 雄虫 1.0~1.3 37~41 6.5~7. 3 12~15 65~72 雌虫 1. 3 62~5.6 15~1.4 14+2. 1 80+1.5 48 Blake 雄虫 14~2. 1 72 1. 3 63~11.3 15±1.7 23 1. 97 17.5 58. 2 9 82 雌虫 (1. 73~ (15. 8~ 22 (50~64) (7~12) (76~84) 2. 23) 20. 0) Goodey 1.77 16.9 67 7 雄虫 (1. 51~ (14. 6~ 23 (58~74) (6~8) 1. 93) 19. 1) 注：n=样本数； L=体长； a=体长最大体宽； b=体长一白头顶至食道与肠连接处的长度； c=体长一尾长； V=头顶至阴门处长度×100一体长 T=精巢长度×100一体长。 7.2.2形态描述（见图1) 7.2.2.1雌虫，热杀死时虫体近直线形，角质层有明显环纹，环距约1um；侧区有四条侧线，占 虫体的六分之一到八分之一，唇区低平，无环纹，几乎不缢缩；头架中等发达，口针长约10um ～12um，有明显的基部球；食道前体部圆桶状，食道峡部窄，后食道腺与肠平截或略有覆盖； 排泄孔正对后食道腺体基部，尾锥形，尾长是肛门处体宽的四倍至五倍，末端锐尖；阴门清晰 前卵巢向前延伸，卵母细胞单列，偶尔双列；后阴子宫囊向肛门处伸展，约是阴肛距的一半。 7.2.2.2雄虫虫体前部与雌虫相似；热力杀死时虫体直线形；尾部与雌虫相似，末端锐尖；交 合伞开始于交合刺的前部末端部位，交合伞长度约是尾长的四分之三；交合刺向腹部弯曲，并向 息服务平台 前延伸，引带短，简单。