SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1135.2—2016 代替SN/T1135.2—2003 马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Potato yellow dwarf virus 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1135.2—2016 前言 SN/T1135系列标准共分为13部分： 第1部分：马铃薯癌肿病检疫鉴定方法； 第2部分：马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法； 第3部分：马铃薯帚顶病毒检疫鉴定方法； 一第4部分：马铃薯黑粉病菌检疫鉴定方法； 第5部分：马铃薯环腐病菌检疫鉴定方法； 第6部分：马铃薯排腐病菌检疫鉴定方法； 第7部分：马铃薯A病毒检疫鉴定方法； 第8部分：马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法； 第9部分：马铃薯青枯病菌检疫鉴定方法； 第10部分：马铃薯V病毒检疫鉴定方法； 第11部分：马铃薯皮斑病菌检疫鉴定方法； 第12部分：马铃薯M病毒检疫鉴定方法； 第13部分：马铃薯Y病毒检疫鉴定方法。 本部分为SN/T1135的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分代替SN/T1135.2一2003《马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法》。 本部分与SN/T1135.2一2003相比，主要技术性差异如下： 删除了“术语和定义”一章； 增加了“马铃薯黄化矮缩病毒基本信息”一章； 删除了“现场检疫与抽样”一节； 增加了“检测方法”一节； 增加了RT-PCR检测方法 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布结构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院。 息服务平台 本部分主要起草人：李明福、张永江、丁小兰、刘忠梅、赵竹、王秀芬、李桂芬、陈燕芳、曾庆才、 刘善斌。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -SN/T1135.2—2003。 1 SN/T1135.2—2016 马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法 1范围 SN/T1135的本部分规定了马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定的基本原则和方法。 本部分适用于所有进境种薯、商品用薯、组培苗和脱毒苗等马铃薯种质中马铃薯黄化矮缩病毒的检 疫鉴定以及马铃薯黄化矮缩病毒引起病害的田间调查。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3 马铃薯黄化矮缩病毒基本信息 中文名：马铃薯黄化矮缩病毒 学名：Potato yellowdwarf virus 缩写：PYDV 分类地位：弹状病毒科（Rhabdoviridae），细胞核弹状病毒属（Nucleorhabdouirus）。 马铃薯黄化矮缩病毒的其他信息参见附录A。 4方法原理 马铃薯黄化矮缩病毒的血清学特性、分子生物学特性和生物学特性是检疫鉴定的主要依据。 5 仪器设备、用具及试剂 5.11 仪器设备 电子分析天平（0.0001g）、小型离心机、台式冷冻离心机、恒温水浴锅、酶标仪、普通PCR仪、电泳 系统、pH计、凝胶成像系统、4℃冰箱、超净工作台、一80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、涡旋振荡 器、微波炉、电子透射显微镜等。 5.2用具 可调式微量移液器（2.5μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL、5000μL）及相应的无RNase 吸头、无RNase离心管、PCR管、研钵、样品袋、标签等。 5.3试剂 有特殊说明除外，所有实验用试剂均为分析纯。 1 SN/T 1135.2—2016 双抗体酶联免疫吸附测定、RT-PCR检测试剂分别见附录B和附录C。 6样品制备 抽样按照SN/T2122的规定进行。 将马铃薯块茎种植在隔离温室中，于25℃生长并进行症状观察。待长出3片～4片叶后将表现症 状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。采集的叶片进行双抗体酶联免疫吸附测 定、RT-PCR、电镜检测或生物学测定。 7检测方法 7.1 双抗体酶联免疫吸附测定 见附录B。 7.2 RT-PCR检测 见附录 C。 7.3 免疫电镜检测 按照SN/T1840中的方法进行电镜观察，参照附录A病毒粒体形态判定免疫电镜检测结果。 7.4 生物学测定 见附录D。 8结果判定 7.1、7.2、7.3和7.4中的两种检测结果为阳性，即可判定检出马铃薯黄化矮缩病毒 9样品保存与记录结果 9.1样品保存 经检验确定携带马铃薯黄化矮缩病毒的样品应在合适的条件下保存，马铃薯病薯块及叶片样品在 一20℃或一80℃冰箱中保存，试管苗保存于组培室中，做好标记和登记工作。保存期满后，需经灭活 处理。 9.2 结果记录与资料保存 完整的实验记录要包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人 和实验人员的签字。双抗体酶联免疫吸附测定检测应有酶联板反应的原始数据，RT-PCR检测应有电 泳结果图片，电镜检测应有病毒粒体照片，生物学测定应有鉴别寄主的症状照片。