SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1071—2014 代替SN/T1071—2002 出口食品中厌氧亚硫酸盐 还原梭状芽孢杆菌检测方法 Method for the determination of anaerobic sulfite-reducing clostridia in food for export 行业标准信息服务平台 2014-01-13发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1071—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1071一2002《进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽胞杆菌检验方法》。 本标准与SN/T1071一2002相比，主要技术变化如下： 将原标准名称《进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽胞杆菌检验方法》修改为《出口食品中 厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌检测方法》； 增加了规范性引用文件； 修改和规范了“设备和材料”； 增加了“非冷冻而易腐蚀的样品”的采集、贮存和运输，及样品制备的方法； 增加了平板计数法中的“分别吸取1mL空白稀释液加人两个无菌平Ⅲ内做空白对照”； 增加了平板计数法中结果计算的举例； 将平板计数法中的数值单位"/g(mL)"修改为CFU/g（mL)”； 将最近似值（MPN）法中的数值单位"/g（mL）”修改为MPN/g（mL）”； 附录A中增加了2%无菌琼脂的成分和制法。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：曹际娟、王金玲、张莹、徐君怡、李俊环。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1071—2002。 行业标准信息服务平台 I SN/T 1071—2014 出口食品中厌氧亚硫酸盐 还原梭状芽抱杆菌检测方法 1范围 本标准规定了出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌检测方法。 本标适用于出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽抱杆菌检测。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌 anaerobic sulfite-reducing clostridia -群厌氧、过氧化氢酶阴性、能将亚硫酸盐还原为硫化物的革兰氏阳性梭状芽孢杆菌。是食品、水、 食品加工设备、食品生产环境等卫生状况的评估指标菌之一。 3设备和材料 3.1冰箱：2℃~5℃。 行业标 3.2恒温水浴箱：50℃±1℃ 3.3 3恒温培养箱：36℃±1℃。 3.4天平：感量0.1g。 3.5均质器及均质杯或均质袋。 3.6厌氧条件及相关设备：选择合适大小的厌氧罐、密封效果好的密封盒中，或其他保持厌氧条件的设 备中放人厌氧袋，也可在厌氧恒温工作站中进行培养。 服务平台 3.7无菌吸管：1mL（具0.01刻度）、10mL（具0.1刻度）或微量移液器及吸头。 3.8无菌培养皿：直径90mm。 3.9无菌试管：15mmX150mm。 3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。 4 培养基和试剂 4.1氯化钠胰蛋白陈稀释液：见附录A中A.1。 4.2亚硫酸铁琼脂：见A.2。 4.3厄肉培养基：见A.3。 4.43%过氧化氢溶液：使用前配制。 4.5 缓冲甘油-氯化钠溶液：见A.4。 4.62%无菌琼脂：见A.5。 1 SN/T 1071—2014 5样品的贮存和运输 5.1冷冻样品，如不能立即进行检验，应置于一18℃保存。 5.2非冷冻而易腐蚀的样品，无菌操作称取25g（mL）样品加人25mL无菌缓冲甘油-氯化钠溶液（液 体食品应加双料），并尽快放人2℃～5℃冰箱保存。 5.3运送样品时，应采取措施，防止样品中微生物数量和性质发生变化 6样品制备 将冷冻样品在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻后进行检验。以无菌操作 称取25g样品，放人装有225mL氯化钠胰蛋白陈稀释液的灭菌均质杯或无菌均质袋内（如为5.2中样 品，加人200mL氯化钠胰蛋白陈稀释液），于8000r/min~10000r/min均质1min～2min或用拍击 式均质器拍击1min，制成1：10样品匀液。如为液体样品，则无菌操作移样25mL，加入装有225mL 氯化钠胰蛋白陈稀释液的火菌玻璃瓶中（如为5.2中样品，加入200mL氯化钠胰蛋白陈稀释液），充分 混匀后，制成1：10样品匀液。根据样品污染情况做进一步的系列10倍递增稀释。若检测厌氧亚硫酸 盐还原梭状芽孢杆菌的芽孢，可对1：10样品匀液进行75℃20min或煮沸保持10min热处理，之后 7检验步骤与计算 7.1平板计数法 7.1.1适用于检验未经加工处理的生鲜食品及厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌>10CFU/g（mL）的 食品。 7.1.2选适宜的三个连续稀释度，从每个稀释度分别吸取1mL稀释样液于无菌培养皿内，每个稀释度 做两个平血。同时，分别吸取1mL空白稀释液加人两个无菌平皿内做空白对照。 倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。从制备最初稀释液结束到倾注培养基于最后一个平血，所用的时 间不应超过15min。 7.1.4待混合物凝固后，再倾注10mL2%无菌琼脂于已凝固的培养基上作为隔层。 7.1.5待该隔层凝固后，将制备好的平板于36℃士1℃厌氧培养24h～48h。若对培养温度有特殊要 求（如46℃），可根据情况进行培养。 7.1.6厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌在亚硫酸铁琼脂上呈黑色菌落。 7.1.7从计数的平板（具20个～200个菌落）中任取10个典型菌落，分别取培养物按9.1和9.2进行证 实试验。对阳性结果进行计数。 数即为样品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的计数，报告为厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌CFU/ 和4个为厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌，那么每克或每毫升食品的厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌 数为（85×8/10+80×4/10)/2×10=500。 7.2最近似值（MPN）法 7.2.1适用于检验含有受损伤的厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的加工食品及厌氧亚硫酸盐还原梭 2