SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1059.6—2016 代替SN/T1059.6—2008 出口食品中沙门氏菌属检测方法 第6部分：垂直膜过滤法 Detection of Salmonellae in food for export- Part 6:Vertical membrane filting method 行业标准信息服务平台 2016-03-09发布 2016-10-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1059.6—2016 前言 SN/T1059共分为7个部分： SN/T 1059.1 进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法； SN/T 1059.2 进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数滤膜/MUG法； SN/T 1059.3 进出口食品平板菌落计数滤膜法； SN/T1059.4 进出口食品中大肠杆菌检验方法谷氨酸脱羧酶法； SN/T 1059.5 食品和动物饲料大肠杆菌0157的检测方法免疫磁珠法； -SN/T 1059.6 出口食品中沙门氏菌属检测方法第6部分：垂直膜过滤法； SN/T 1059.7 进出口食品中沙门氏菌检测方法实时荧光PCR法。 本部分为SN/T1059的第6部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本部分代替SN/T1059.6—2008《进出口食品中沙门氏菌属检验方法 垂直膜过滤法》。 本部分与SN/T1059.6—2008相比，主要技术变化如下： 修改了标准的中英文名称； 修改了标准的范围（见第1章，2008年版第1章）； 修改了规范性引用文件（见第2章，2008年版第2章）； 修改了样品制备和增菌培养（见7.1）； 修改了培养基（见附录A，2008年版附录A）。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：吴斌、刘淑艳、蔡晓萍、于畅、张雪。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T 1059.62008 业标准信息服务平台 1 SN/T1059.6—2016 出口食品中沙门氏菌属检测方法 第6部分：垂直膜过滤法 1范围 本部分适用于出口食品中沙门氏菌属的检验。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 3原理 本方法是基于垂直过滤的方式使测试样品通过包被有特别沙门氏菌抗体的膜，样品中的沙门氏菌 抗原与膜上抗体结合，通过酶偶合物将抗原抗体结合物显色。若是阳性样品，试剂中央出现蓝色的圆 点，反之为无色的圆点。 4设备与材料 4.1 滤器：备有预滤器。 4.2 真空泵。 4.3 滤膜：有机相或水相，孔径0.45μm。 4.4 培养箱：36℃±1℃,42℃±1℃ 4.5 4.6 吸管：1mL、10mL，具刻度。 4.7 锥形瓶：容量250mL、500mL。 4.8 试管：17mmX170mm。 4.9 玻璃珠：5mm。 4.10 平皿：直径90mm。 4.11 天平：感量0.1g。 4.12 均质器。 5培养基和试剂 5.1 缓冲蛋白陈增菌液（BPW）：见附录A中A1。 5.2RVS肉汤：见A.2。 5.3 MKTTn肉汤：见A.3。 1 SN/T 1059.6—2016 5.4木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂：见A.4。 5.5亚硫酸铋(BS)琼脂：见A.5。 5.6HE琼脂：见A.6。 5.7四乙酸二氨基乙烷（EDTA）：0.2mol/L。 5.8沙门氏菌检测膜。 5.9 检测膜配套溶液：见A.7。 6检验程序 检验程序见图1。 检样 25g(mL）样品+225mLBPW，均质 36℃±1℃ 18h±2h 0.1mL+RVS10mL，41.5℃±1C,24h±3h (或0.1mL+MKTTn10mL,36℃±1℃,24h±3h) BS XLD(或HE) 36℃±1℃,40h~48h 36℃±1℃18h~24h 挑取5个典型菌落+250μLPBS，混勺匀，垂直膜过滤鉴定 报告 你准信息服 图1沙门氏菌属垂直过滤法检验程序 7操作步骤 7.1样品制备和增菌培养 7.1.1如为冷冻样品，应在45℃以下不超过15min，或在2℃～5℃不超过18h解冻。若不能及时检 验，应置于一15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。V 7.1.2称取25g（mL）样品放人盛有225mLBPW的灭菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均 质1min～2min，或置于盛有225mLBPW的灭菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若 接进行培养，于36℃水浴培养18h土2h，进行前增菌。 7.1.3轻轻摇动培养过的样品混合物，移取0.1mL转种于盛有10mLRVS肉汤的无菌试管中，混合 均匀，于41.5℃土1℃培养24h士3h；或移取1mL，转种于10mLMKTTn肉汤的无菌试管中，混合均 匀，于36℃±1℃培养24h士3h，进行选择性增菌。 2