ICS 11.120.01 C 23 团体标准 T/CACM 1326.5—2019 高良姜种子超低温保存技术规程 Technical code of practice for cryopreservation of Alpinia officinarum Hance seeds 2019 - 10 - 17发布 2019 - 10 - 17实施 中 华 中 医 药 学 会 发布 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.5—2019 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 4 种子采收及选择 ................................ ................................ .... 1 4.1 种子采收 ................................ ................................ ...... 1 4.2 种子选择 ................................ ................................ ...... 2 5 种子前处理 ................................ ................................ ........ 2 5.1 活力 ................................ ................................ .......... 2 5.2 含水量范围 ................................ ................................ .... 2 6 种子保存量 ................................ ................................ ........ 3 7 种子冷冻方式 ................................ ................................ ...... 3 8 恢复培养 ................................ ................................ .......... 3 8.1 种子解冻处理 ................................ ................................ .. 3 8.2 冻后种子活力检测 ................................ .............................. 3 8.3 萌芽成苗 ................................ ................................ ...... 3 附录A （规范性附录 ） 试剂的配制和保存方法 ................................ ............ 4 参考文献 ................................ ................................ ............. 5 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.5—2019 II 前 言 本标准是药用植物顽拗性种子超低温保存系列标准之一，该系列标准结构和名称如下： ——T/CACM 1326.1 药用植物顽拗性种子超低温保存技术通则； ——T/CACM 1326.2 白木香种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.3 降香种子超低温保存技 术规程； ——T/CACM 1326.4 益智种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.5 高良姜种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.6 朱砂根种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.7 草豆蔻种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.8 化州柚种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.9 樟种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.10 两面针种子超低温保存技术规程； ………………。 本标准按照 GB/T 1.1 －2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由中国医学科学院药用植物研究所海南分所提出。 本标准由中华中医药学会归口。 本标准起草单位：中国医学科学院药用植物研究所海南分所，中国医学科学院药用植物研究所。 本标准主要起草人：曾琳，魏建和，郑希龙，李榕涛，王秋玲，何明军，金钺，顾雅坤，符丽。 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.5—2019 1 高良姜种子超低温保存技术规程 1 范围 本标准规定了高良姜（ Alpinia officinarum Hance）种子超低温保存过程中的术语和定义、种子 的选择、种子前处理、种子保存 量、种子冷冻方式、恢复培养等内容。 本标准适用于高良姜种子的超低温长期贮藏。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 。 GB/T 3543. 6 农作物种子检验规程 水分测定 植物生理学实验指导（第三版）， 2005 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 高良姜 Alpinia officinarum Hance 为姜科（ Zingiberaceae ）山姜属 （Alpinia roxb.）多年生草本植物，根茎供药用，具温中散寒、 止痛消食功能，是“十大南药”之一。为《中华人民共和国药典》（ 2015版）收载的常用药材。 3.2 高良姜果实 Alpinia officinarum Hance fruits 高良姜的果实为球形，直径约 1 cm，熟时红色。 3.3 高良姜种子 Alpinia officinarum Hance seeds 高良姜的繁殖材料为完整种子，贮藏习性判断为顽拗性种子。种子不规则扁圆形，表面灰褐色， 略有钝棱。 3.4 种子超低温保存 seed of cryopreservation 将经过前处理的高良姜种子置于液氮（ -196 ℃）中保存。 4 种子采收及选择 4.1 种子采收 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.5—2019 2 7 月～9 月，当果皮转为红褐色时，挑选无病虫害、无破损、粒大、成熟的果实采收，去除果皮 和附属体，取出种子并反复清洗。 4.2 种子选择 挑选饱满、均匀、健康的种子，置于 4 ℃ 冰箱中保存备用（存放时间不超过 3 个月）。 5 种子前处理 5.1 活力 5.1.1 检测 高良姜种子活力以种子生活力为判别标准。按照《植物生理学实验指导》中的溴麝香草酚蓝（ BTB） 法测定高良姜种子生活力。待测种子在 30 ℃～35 ℃ 温水中浸种 2 h，随后取吸胀种子 20 粒，整 齐地埋于备好的 1.5％ BTB 琼脂凝胶 中，注意要将胚埋入凝胶中。将培养皿置于 35 ℃ 温箱中 12 h 后观察结果。 BTB 的配制和保存方法见附 录 A 的 A.1。 5.1.2 鉴定及要求 在光下用放大镜对染色结果进行观察鉴定。凡种胚周围出现黄色晕圈的种子为有活力的种子，否 则为无活力的种子。 待保存的高良姜种子生活力应 ≥70%。 5.1.3 计算 生活力按照公式（ 1）进行计算： ） （1 % 100                =xyA 式中： A——生活力； y——有活力的种子数； x——总的种子数。 5.2 含水量范围 用尼龙网袋包裹高良姜种子，置于盛有变色硅胶的干燥器内，硅胶与种子的体积比为 60：1，室 温条件下干燥处理 40 h～50