ICS 11.120.01 C 23 团体标准 T/CACM 1326.8 —2019 化州柚种子超低温保存技术规程 Techn ical code of practice f or cryopreservation of Citrus maxima (Burm.) Merr. cv. Tomentosa y seeds 2019 - 10 - 17发布 2019 - 10 - 17实施 中 华 中 医 药 学 会 发布 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.8—2019 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 4 种子采收及选择 ................................ ................................ .... 2 4.1 种子采收 ........................................................................ 2 4.2 种子选择 ........................................................................ 2 5 种子前处理 ................................ ................................ ........ 2 5.1 活力 ................................ ................................ .......... 2 5.2 含水量范围 ...................................................................... 2 6 种子保存量 ................................ ................................ ........ 2 7 种子冷冻方式 ................................ ................................ ...... 2 8 恢复培养 ................................ ................................ .......... 2 8.1 种子解冻处理 .................................................................... 3 8.2 冻后种子生活力检测 .............................................................. 3 8.3 萌芽成苗 ....................................... ................................. 3 附录A（规范性附录） 试剂的配置和保存方法 ................................ ............. 4 参考文献 ................................ ................................ ............. 5 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.8—2019 II 前 言 本标准是 药用植物顽拗性种子超低温保存系列标准之一，该系列标准结构和名称如下： ——T/CACM 1326.1 药用植物顽拗性种子超低温保存技术通则； ——T/CACM 1326.2 白木香种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.3 降香种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.4 益智种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.5 高良姜种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.6 朱砂根种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.7 草豆蔻种 子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.8 化州柚种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.9 樟种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.10 两面针种子超低温保存技术规程； ……………… 。 本标准按照 GB/T 1.1 -2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由中国医学科学院药用植物研究所海南分所提出。 本标准由中华中医药学会归口。 本标准起草单位：中国医学科学院药用植物研究所海南分所、中国医学科学院药用植物研究所。 本标准主要起草人：曾琳、魏建和、金钺、顾雅坤、符丽、郑希龙、李榕涛、王秋玲、何明军 。 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.8—2019 1 化州柚种子超低温保存技术规程 1 范围 本标准规定了 化州柚 [Citrus maxima (Burm.) Merr. cv.‘Tomentosay’ ] 种子超低温保存过程 中的术语和定义、种子 采收及选择、种子 前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养 等内容。 本标准适用于化州柚种子的超低温长期贮藏 。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543. 6 农作物种子检验规程 水分测定 GB/T 3543. 7 农作物种子检验规程 其他项目检验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 化州柚 Citrus maxima (Burm.) Merr. cv.‘Tomentosay’ 为芸香科（ Rutaceae ）柑橘属（ Citrus L.）柑橘品种， 广东省化州市特产， 2006年被列入中国国 家地理标注产品保护。小乔木，通体具香气， 以未成熟或近成熟的干燥外果皮入药，中药名为 “化橘 红”，有“南方人参 ”之美誉，主要用于治疗咳嗽痰多、食积伤酒、呕恶痞闷，尤对寒咳、久咳非常有 效，也可用来煲汤和茶饮等食疗。 收载于《中华人民共和国药典》 （ 2015版） 。 3.2 化州柚果实 Citrus maxima (Burm.) Merr. cv.‘Tomentosay’ fruits 柑果，圆形或略扁，顶端内凹，长 10 cm～15 cm，宽 11 cm～13 cm，柠檬黄色，幼果外被柔毛； 果皮海绵质，厚约 2 cm；瓢囊数个，果肉浅黄色，酸中略苦。种子 80 粒以上。 3.3 化州柚种子 Citrus maxima (Burm.) Merr. cv.‘Tomentosa’ seeds 化州柚的播种材料为去皮后的完整种子，贮藏特性判断为中间性种子。种子黄白色， 形状不规则， 通常形似长方形，上部质薄且常截平，下部饱满，有明显纵肋棱，单胚。 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.8—2019 2 3.4 种子超低温保存 seed of cryopreservation 将经过前处理的化州柚种子置于液氮（ -196 ℃）中保存。 4 种子采收及选择 4.1 种子采收 10 月～11 月 果实成熟，采收成熟果实，剥开瓢囊，去除果皮和果肉，取出种子。 4.2 种子选择 挑选发育饱满、均匀、健康的种子为保存材料，置于 4 ℃冰箱中保存备用（存放时间不超过 1 周）。 5 种子前处理 5.1 活力 5.1.1 检测 化州柚种子活力以种子生活力为判别标准。按照 GB/T 3543.7 中的 2、3、5-三苯基氯化四氮唑 (TTC)法检测种子生活力。随机抽取 30 粒种子，剥去外层种皮，沿种脊小心将种子分成 2 瓣后放培 养皿内，内侧面向下，滴入 TTC 溶液浸没种子，室温 (25℃)避光放置 4 h 后，观察染色结果。 TTC 溶液的配制和保存方法见附录 A 的 A.1 和 A.2。 5.1.2