ICS 11.120.01 C 23 团体标准 T/CACM 1326.45—2019 神秘果种子超低温保存技术规程 Technical code of practice for cryopreservation of Synsepalum dulcificum Daniell seeds 2019 - 10 - 17发布 2019 - 10 - 17实施 中 华 中 医 药 学 会 发布 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.45—2019 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 4 种子采收及选择 ................................ ................................ .... 2 4.1 种子采收 ................................ ................................ ...... 2 4.2 种子选择 ................................ ................................ ...... 2 5 种子前处理 ................................ ................................ ........ 2 5.1 活力 ................................ ................................ .......... 2 5.2 含水量范围 ................................ ................................ .... 2 6 种子保存量 ................................ ................................ ........ 3 7 种子冷冻方式 ................................ ................................ ...... 3 8 恢复培养 ................................ ................................ .......... 3 8.1 种子解冻处理 ................................ ................................ .. 3 8.2 冻后种子活力检测 ................................ .............................. 3 8.3 萌芽成苗 ................................ ................................ ...... 3 附录A （规范性附录） 试剂的配制和保存方法 ................................ ............ 4 参考文献 ................................ ................................ ............. 5 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.45—2019 II 前 言 本标准是药用植物顽拗性种子超低温保存系列标准之一，该系列标准结构和名称如下： ——T/CACM 1326.1 药用植物顽拗性种子超低温保存技术通则； ——T/CACM 1326.2 白木香种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.3 降香种子超 低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.4 益智种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.5 高良姜种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.6 朱砂根种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.7 草豆蔻种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.8 化州柚种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.9 樟种子超低温保存技术规程； ——T/CACM 1326.10 两面针种子超低温保存技术规程； ………………。 本标准按照 GB/T 1.1－2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由中国医学科学院药用植物研究所海南分所提出。 本标准由中华中医药学会归口。 本标准起草单位：中国医学科学院药用植物研究所海南分所，中国医学科学院药用植物研究所。 本标准主要起草人：曾琳，魏建和，郑希龙，李榕涛，王秋玲，何明军，金钺，顾雅坤，符丽。 T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.45—2019 1 神秘果种子超低温保存技术规程 1 范围 本标准规定了神秘果（ Synsepalum dulcificum Daniell）种子超低温保存过程中的术语和定义、 种子的选择、种 子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等内容。 本标准适用于神秘果种子的超低温长期贮藏。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 。 GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定 GB/T 3543.7 农作物种子检验规程 其他项目检验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 神秘果 Synsepalum dulcificum Daniell 为山榄科（ Sapotaceae ）神秘果属（ Synsepalum ）常绿灌木植物。果肉中含有称为神秘果素 （Miraculin ）的糖蛋白，能催化苹果酸、柠檬酸类物质转化为果糖，改变人的味觉，使酸的食物变甜。 在加纳、刚果等西非热带地区常用来调节食物味道。 20 世纪 60 年代，周恩来总理到西非访问时，加 纳共和国把神秘果作为国礼送给周总理；此后，神秘果开始在我国栽培。神秘果是一种集趣味性、观 赏性和食用性于一体的珍贵植物。收载于《世界药用植物速查辞典（ 2015）》。 3.2 神秘果果实 Synsepalum du lcificum Daniell frui ts 果实为浆果，椭圆形，长 1.5 cm～2 cm，果肉近果皮处有厚壁组织而成薄革质至骨质外皮。果皮 成熟前绿色，成熟后鲜红色，果肉较薄。 3.3 神秘果种子 Synsepalum dulcificum Daniell seeds 神秘果的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。种子种皮褐色，具 1 至数枚，通常 具油质胚乳或没有，硬而光亮，富含单宁，有各种各样的疤痕，子叶薄或厚，有时叶状。 3.4 种子超低温保存 seed of cryopreservati on T/CACM T/CACM 全国团体标准信息平台 T/CACM 1326.45—2019 2 将经过前处理的神秘果种子置于液氮（ -196 ℃）中保存。 4 种子采收及选择 4.1 种子采收 6 月～7 月以及 11 月～12 月，当果皮变为鲜红色，果肉变软后，即可采收，去除果皮和果肉， 取出种子。 4.2 种子选择 挑选发育饱满、结实、健康的种子，置于 4 ℃ 冰箱中保存备用（存放时间不超过 1 个月）。 5 种子前处理 5.1 活力 5.1.1 检测 神秘果种子活力以种子生活力为判别标准。按照 GB/T 3543.7 中的 2，3，5-三苯基氯化四氮唑 (TTC)法检测种子生活力。 随机抽取 30 粒种子，沿种脊小心将种子分成 2 爿后放培养皿内，内侧面 向下，滴入 TTC 溶液浸没种子，室温 (25 ℃)避光放置 4 h 后观察染色结果。 TTC 溶液的配制和保存方法见附录 A 的 A.1 和 A.2。 5.1.2 鉴定及要求 直接用肉眼对染色结果进行观察鉴定。凡胚及胚乳全部染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的， 为有活力的种子，否