ICS 65.020.99 CCS B 41 6501 乌鲁木齐市 地方 标准 DB 6501/T 072—2025 奶牛场结核病 样品采集 技术规范 TTechnical specification for sample collection of cow tuberculosis 2025 - 03 - 05发布 2025 - 03 - 10实施 乌鲁木齐市市场监督管理局 发布 DB 6501/T 072 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站、 新疆农业职业技术大学、 新疆苏东农牧科技有限公司提出。 本文件由乌鲁木齐市农业农村局（乌鲁木齐市乡村振兴局）归口并组织实施。 本文件起草单位： 乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站、新疆农业职业技术大学、新疆苏东农牧科技有限 公司、乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心、乌鲁木齐市乡村振兴指导服务中心、新疆维吾尔自治区动 物疫病预防控制中心、乌鲁木齐市农业综合行政执法支队、乌鲁木齐市米东区古牧地镇农业发展中心、 乌鲁木齐市米东区柏杨河乡农业发展服务中心、塔城地区动物疾病控制与诊断中心。 本文件主要起草人：彭华刚、许建国、季珉珉、李泽宇、范玉娟、陈英、李威、施远翔、陈懿、宋 显明、张广义、彭叶龙、王学顺、段桂萍、王涛、帕提玛·努合曼、赵军、艾克拜尔·阿不都热合曼、 田路路、王 云峰。 本文件实施应用中的疑问，请咨询乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站、新疆农业职业技术大学、新疆苏 东农牧科技有限公司。 新疆苏东农牧科技有限公司（乌鲁木齐市米东区稻香中路 459号） 联系电话： 0991-7765438；邮 编：831400 新疆农业职业技术大学（昌吉市文化东路 29号） 联系电话： 0994-2351672；邮编： 831100 乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站（乌鲁木齐市米东区稻香中路 459号） 联系电话： 0991-7879298； 邮编：831400 乌鲁木齐市农业农村局（乌鲁木齐市乡村振兴局）（乌鲁 木齐市水磨沟区准噶尔街 299号） 联系 电话：0991-4629396；邮编： 830028 乌鲁木齐市市场监督管理局（乌鲁木齐市天山区中山路 33号） 联系电话： 0991-2815191；邮编： 830004DB 6501/T 072 —2025 1 奶牛场结核病样品采集技术规范 1 范围 本文件规定了奶牛结核病样品采集技术的术语和定义、采样原则、采样前准备、样品采集、样品包 装、采样后无害化处理等要求。 本文件适用于奶牛结核病样品的采集 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 561 动物炭疽诊断技术 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 奶牛结核病 cow tuberculosis 由牛型结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病。 世界动物卫生组织 (WOAH)将其列为必须报告的动物疫 病，我国将其列为二类动物疫病 。 3.2 样品 sample 取自动物或环境、拟通过检验检测反映动物个 体、群体或环境有关状况的材料或物品 。 3.3 采集 collection 通过一定的方法，按照特定的程序和要求，对样品进行收集、处理及整理的过程 。 3.4 采样人员 sampling personnel 指从事动物疫病监测采样工作的人员，包括执业兽医、官方兽医、村级动物防疫员等 。 4 采样原则 先排除炭疽再采样 4.1 凡发现奶牛突然死亡、天然孔流出黑红色的煤焦油状血液、尸僵不全等疑似炭疽症状，不应剖检。 应先按NY/T 561 规定采集血液，进行血液镜检，确定不是炭疽后方可解剖采样。 无菌操作 4.2 DB 6501/T 072 —2025 2 采样过程应无菌操作，采样器具应先灭菌，非一次性器具应采用高压蒸汽灭菌法。剖检前需采集样 品的，应先采样后剖检，防止外源污染和交叉污染。 安全防护 4.3 采样人员应使用合格的防护用品，正确穿戴一次性防护服、防护帽、 N95口罩、护目镜、一次性乳 胶手套、胶鞋或一次性防水鞋套等，做好个人防护，防止被病原微生物感染或被牛伤害。 动物福利 4.4 活体采样时，避免对奶牛的过度刺激和伤害。 5 采样前准备 采样人员 5.1 5.1.1 采样人员应经过生物安全培训，使用合格的医用防护用品，严格做好个人防护，避免感染结核 病和污染环境，造成公共卫生危害。 5.1.2 采样人员应经过专业技术培训，熟知动物疫病防控相关的法律法规及专业知识，清楚采集样品 种类、部位、数量、采集顺序，熟知采集不同样品的操作、保存方法及注意事项。 5.1.3 保定人员应熟悉奶牛脾气、秉性等生物学特性，掌握正确的保定方法。 5.1.4 采样人员应熟练掌握消毒药品的配制，规范进行废弃物无害化处理及场地消毒等。 器材 5.2 5.2.1 采样用具 解剖刀、剪刀、有齿镊子、解剖斧头、酒精灯、 75%酒精棉球、碘酒棉球、一次性注射器、无菌棉 签、试管架、剪毛剪、消毒药、消毒喷雾器、记号笔、碳素笔、采样单等。 5.2.2 样品容器 一次性采血器（ 7号针头、 5mL）、EDTA或枸橼酸钠抗凝管、不抗凝真空采血管、离心管、自封袋、 采样箱、保温箱。 保存液 5.3 常用的样品保存液有磷酸盐缓冲液（ PBS）、30%或50%甘油磷酸盐缓冲液、生理盐水等。需要长期 保存的选择 30%或50%甘油磷酸盐缓冲液， 12h内可以送入兽医实验室开展检测的可选择生理盐水或磷酸 盐缓冲液等。 6 样品采集 血液样品 6.1 对采血部位的皮肤剪毛、 消毒， 用一次性注射器或真空采血管在尾静脉或颈静脉处采血， 用含有 EDTA 抗凝管采血后应缓慢摇匀。 乳汁样品 6.2 DB 6501/T 072 —2025 3 对乳头进行清洗、消毒、擦拭，将最初所挤的 3把～4把乳汁弃掉，将乳汁挤入无菌离心管中。 组织样品 6.3 以无菌操作的方式采集奶牛乳腺、肺及肺门等部位淋巴结及肝、脾、生殖器等病变组织器官。每块 组织块应大于 10 g，并放在独立的自封袋内，标明组织块的名称。 鼻腔分泌物 6.4 取无菌棉拭子贴奶牛鼻孔进入，轻轻擦拭并缓慢旋转 2圈～3圈，沾取鼻腔分泌物，立即将拭子浸入 灭菌的30%或50%甘油磷酸盐保存液的离心管中，将拭子尾部弃去，盖紧管盖。 7 样品编号 样品采集后宜按照“动物畜别 -样品类型 -样品序号”方式进行编号。为方便基层实际操作，样品编 号也可根据需要或采样单位要求编写，但需保证编号的唯一性。 8 样品存储 样品采集后应尽快送往实验室，在常温下保存，防止温度过低，不能冷冻或冷藏。 9 样品包装 样品的包装应严密，做到防污染、防渗漏，每个样品都要单独包装。包装外注明动物种类、样品种 类、编号、采样时间、采样地点、采样人姓名及联系方式等信息。 10 采样后无害化处理 采样结束后， 对一次性器具、 动物尸体及废弃物交由乌鲁木齐市固体废物处置中心进行无害化处理， 非一次性器具先用水清 洗再用高压蒸汽灭菌法进行消毒，并对采样环境进行彻底消毒，防止传播疫病。 11 采样记录 采样人员应做好样品信息记录，填写奶牛结核病采样登记表，确保样品及相关信息可追溯。 11.1 奶牛结核病采样登记表参见附录 A，应准确记录采样时间、地点、畜主姓名、联系方式、样品种 11.2 类、数量、编号、采样奶牛信息及免疫状况等。奶牛信息包括品种、年龄、性别及耳标号；免疫状况包 括免疫时间、疫苗种类、疫苗生产厂家及批号。 奶牛结核病采样登记表用钢笔或签字笔填写，采样人和被采样单位签章，一式三份，采样单位一11.3 份、被采样单位一份、随样一份 。 DB 6501/T 072 —2025 4 A A 附录 A （资料性） 奶牛结核病采样登记表 奶牛结核病采样登记表见表 A.1。 表A.1 奶牛结核病采样登记表 采样地点 区（县） 乡（镇） 村（大队） 地理坐标 东经 北纬 被采样单位名 称 联系人 联系电话 奶牛品种（数 量） 采样奶牛来源 □自繁自养 □外购（外购时间： 外购地点： ） 外购奶牛进场 前是否进行结 核病检疫 □所有牲畜检疫合格后进场口抽样检疫合格后进场 □抽样检疫合格后进场 □不检疫直接进场 □不检疫，隔离观察后进场 同群奶牛养殖 方式 □种畜（禽）场 □规模场 □散养户 □屠宰场 □活畜交易市场 同群健康状况 （数量） 群体总数（ ）无症状（ ） 疑似结核病（ ）死亡（ ） 采（抽