ICS65.020.30 B43 团体标准 T/SDAA0049－2021 2021－11－30发布 2021－12－31实施 山东省畜牧协会发布饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、 呕吐毒素快速测定上转发光法 RapiddeterminationofaflatoxinB1,zearalenone,anddeoxynivalenolinfeeds -upconversionluminescence(UPT)method 全国团体标准信息平台 IT/SDAA0049－2021 全国团体标准信息平台 IIT/SDAA0049－2021 前言 本文件按照GB/T1.1—2020的规定起草。 本文件由山东省畜牧协会提出并归口。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件起草单位：青岛农业大学、山东农业大学、山东省农业科学院家禽研究所、山东省动物疫病 预防与控制中心、北京热景生物技术股份有限公司。 本文件主要起草人：朱风华、朱连勤、陈甫、宋敏训、宋志刚、石天红、陈静、孙京新、张贝贝、 余洋、王兰辉。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 3T/SDAA0049－2021 全国团体标准信息平台 4T/SDAA0049－2021 饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素快速测定 上转发光法 1范围 本文件规定了饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素含量的上转发光测定方 法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料和植物源性饲料原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯 酮和呕吐毒素含量的快速测定。 本文件黄曲霉毒素B1的检测限为1μg/kg，定量限为2μg/kg；玉米赤霉烯酮的检测限为 20μg/kg，定量限为50μg/kg；呕吐毒素的检测限为50μg/kg，定量限为200μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 将样品提取物滴入检测卡加样处，提取物中的霉菌毒素在反应区（T线）竞争性地与霉 菌毒素单克隆抗体-UCP反应，在反应区（T线）形成固相抗原-标记抗体-UCP（Up-Converting Phosphor，上转发光材料）颗粒复合物。反应区（T线）和质控区（C线）UCP颗粒在激发光 下发出可见光信号，上转发光免疫分析仪获得反应区对应的T值与质控区对应的C值。T/C比 值与试样中的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素含量成反比。 4试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水：GB/T6682，一级。 4.2黄曲霉毒素B1检测卡。 全国团体标准信息平台 5T/SDAA0049－2021 4.3玉米赤霉烯酮检测卡。 4.4呕吐毒素检测卡。 4.5黄曲霉毒素B1样品稀释液。 4.6玉米赤霉烯酮样品稀释液。 4.7呕吐毒素样品稀释液。 4.8甲醇提取液：无水甲醇+水=700+300。 4.9校准卡 4.9.1黄曲霉毒素B1校准卡 表1黄曲霉毒素B1校准卡 校准卡编号 适用样本 校准卡1豆粕、棉粕、花生粕、菜籽粕、配合饲料、浓缩饲料、玉米、膨化玉 米、玉米胚芽粕、谷物、麸皮、面粉、次粉 校准卡2 玉米蛋白粉、DDGS、喷浆玉米胚芽粕、喷浆玉米皮、发酵饲料 4.9.2玉米赤霉烯酮校准卡 表2玉米赤霉烯酮校准卡 校准卡编号 适用样本 校准卡1玉米、膨化玉米、小麦、谷物、面粉、麸皮、豆粕、棉粕、花生粕、 菜籽粕、浓缩饲料、配合饲料 校准卡2酱油糟、胚芽粕、胚芽饼、DDGS、喷浆玉米皮、玉米蛋白粉等玉米副 产物、发酵饲料 4.9.3呕吐毒素校准卡 表3呕吐毒素校准卡 校准卡编号 适用样本 校准卡1配合饲料、浓缩饲料、玉米及其副产物、膨化玉米、玉米胚芽粕、发 酵饲料 校准卡2 小麦、大麦、麸皮、次粉、面粉 全国团体标准信息平台 6T/SDAA0049－2021 5仪器设备 5.1分析天平：感量0.01g。 5.2离心机：转速不低于6000r/min。 5.3上转发光免疫分析仪：型号UPT-1800S。 6样品 按照GB/T20195制备样品，过0.80mm分析筛，装入样品袋内或瓶中，2℃~8℃下保 存，24h内检测完毕。 7试验步骤 7.1样品提取 7.1.1黄曲霉毒素B1的提取 7.1.1.1平行做两份试验。称取试样5g（精确至0.01g），加入25mL样品提取液，用摇床 或者振荡器充分震荡5min，之后静置5min，用快速定量滤纸过滤提取物，或者用离心机 离心代替（6000r/min离心30S），移取滤液或上清液备用。 7.1.1.2准确移取600μL样品稀释液，加入200μL过滤后的滤液或者离心后的上清液，用 涡旋仪涡旋30S，混匀备用（若混合后液体呈浑浊状态，再次6000r/min离心30S后，取上 清液进行检测）。 7.1.2玉米赤霉烯酮的提取 7.1.2.1同7.1.1.1。 7.1.2.2同7.1.1.2。 7.1.3呕吐毒素的提取 全国团体标准信息平台 7T/SDAA0049－2021 7.1.3.1平行做两份试验。称取试样3g（精确至0.01g），加入30mL去离子水，用振荡器 充分震荡5min，之后静置5min，用快速定量滤纸过滤提取物，或者用离心机离心代替（6000 r/min离心30S），移取滤液或上清液备用。 7.1.3.2准确移取700μL样本稀释液，加入100μL滤液或者离心后的上清液，用涡旋仪涡旋 30S，混匀备用（若混合后液体呈浑浊状态，再次6000r/min离心30S后，取上清液进行检测）。 7.2测定 7.2.1环境温度控制在16℃⁓30℃。 7.2.2上转发光免疫分析仪开机预热15min，根据样品类型，插入本批次产品对应的且与 样品类型一致的校准卡进行校准。 7.2.3用移液器吸取100μL经过前处理的待测样品加入水平放置的检测卡的加样孔中，开 始计时15min。 7.2.415min后，按照仪器操作说明扫描测试卡底部条形码，扫描成功后将测试卡插入上 转发光免疫分析仪进行测量，获得被测试样中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮或呕吐毒素的含 量。 8试验数据处理 试样中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮或呕吐毒素的含量以质量分数计，单位为微克每 千克（μg/kg），按式（1）计算： 1 12 2() 20iXVVVXVm （1） 式中： Xi—试样中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮或呕吐毒素的含量，单位为微克每千克 （μg/kg）； X1—仪器显示试样中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮或呕吐毒素的含量，单位为微克每 千克（μg/kg）； V—提取试样溶剂体积，单位为毫升（ml）； V1—样本稀释液体积，单位为微升（μl）； V2—滤液或者离心后的上清液体积，单位为微升（μl）； m—试样质量，单位为克（g）； 全国团体标准信息平台 8T/SDAA0049－2021 20—仪器内置稀释倍数； 平行测定结果用算数平均数表示，结果保留至小数点后两位。 9准确度与精密度 9.1本方法在2μg/kg~50μg/kg黄曲霉毒素B1添加浓度水平上的回收率（n≥10）为 85⁓120%，变异系数（n≥10）≤12%。 9.2本方法在50μg/kg~1000μg/kg玉米赤霉烯酮添加浓度水平上的回收率（n≥10）为 83⁓120%，变异系数（n≥10）≤10%。 9.3本方法在200μg/kg~4500μg/kg呕吐毒素添加浓度水平上的回收率（n≥10）为 80⁓120%，变异系数（n≥10）≤10%。 全国团体标准信息平台