ICS 65.020 CCS B 05DB 63 青 海 省 地 方 标 准 DB 63/T 2359—2024 脱毒马铃薯制种及生产技术规程 2024 - 12 - 11发布 2025 - 01 - 10实施 青海省市场监督管理局  发 布DB 63/T 2359—2024 I前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由青海省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：青海大学农林科学院（青海省农林科学院）、海东市乐都区农业技术推广中心、 湟中区农业技术推广中心、互助县农业技术推广中心。 本文件主要起草人：纳添仓、蒲秀琴、董宇、张纲、徐淑华、叶广继、刘世安、王生财、祁玉梅、 陈贤龄、祁生兰、贺双成、王毅、何春玉、青山、张建华、马长凤、祁惠莲、李淑贞。 本文件由青海省农业农村厅监督实施。DB 63/T 2359—2024 1脱毒马铃薯制种及生产技术规程 1　范围 本文件规定了脱毒马铃薯制种及生产的术语与定义、环境条件、脱毒组培苗的快繁、原原种生产、 原种生产、一级种、二级种的生产、质量检验、产地检疫、定级标准、生产档案和标签等技术。 本文件适用于脱毒马铃薯制种及生产。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 7331 马铃薯种薯产地检疫规程 GB/T 8321 农药合理使用准则 (所有部分) GB 15618 土壤环境质量 农用地土壤污染风险管控标准(试行 ) GB 18133 马铃薯种薯 GB 20464 农作物种子标签通则 NY/T 401 脱毒马铃薯种薯（苗)病毒检测技术规程 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 农药安全使用规范总则 NY/T 1606 马铃薯种薯生产技术操作规程 NY/T 1962 马铃薯纺锤块茎类病毒检测 NY/T 2678 马铃薯6种病毒的检测法 RT-PCR NY/T 2744 马铃薯纺锤块茎类病毒检测 核酸斑点杂交法 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1　 脱毒组培苗 简称脱毒苗，是应用茎尖组织培养技术获得的、经检测确认不带PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS 等病毒和PSTVd的再生试管苗。 3.2　 脱毒种薯DB 63/T 2359—2024 2用脱毒苗经逐代繁殖种薯生产体系生产出来的各级种薯。脱毒种薯分为原原种、原种、一级种薯、 二级种薯。 3.3　 原原种 用脱毒组培苗在防虫网、温室等隔离条件下生产，经检测符合GB 18133要求的，用于原种生产的微 型种薯。 3.4　 原种 用原原种做种薯，在良好隔离条件下生产的，经检测符合GB 18133要求的，用于生产一级种薯的种 薯。 3.5　 一级种 用原种做种薯，在相对隔离条件下生产的，经检测符合GB 18133要求的，用于生产二级种的种薯。 3.6　 二级种 用一级种做种薯， 在相对隔离条件下生产的， 经检测符合GB 18133要求的， 用于生产商品薯的种薯。 4　缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PVX：马铃薯X病毒（Potato virus X、马铃薯普通花叶病毒） PVY：马铃薯Y病毒（Potato virus Y、马铃薯重花叶病毒） PVS：马铃薯S病毒（Potato virus S、马铃薯潜隐花叶病毒） PVM：马铃薯M病毒（Potato virus M、马铃薯副皱缩花叶病毒） PVA：马铃薯A病毒（Potato virus A、马铃薯轻花叶病毒） PLRV：马铃薯卷叶病毒（Potato leafroll virus） PYDV：马铃薯黄矮病毒（Potato yellow dwarf virus） PMTV：马铃薯帚顶病毒（Potato mop-top virus） PSTVd：马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid） 5　环境条件 制种基地环境空气质量符合GB 3095要求，农业灌溉水质符合GB 5084要求，土壤环境质量符合GB 15618要求。 6　脱毒组培苗快繁DB 63/T 2359—2024 36.1　脱毒组培苗的培育 6.1.1　材料选择 选用生产上主栽的优良品种块茎的休眠芽、 刚出土幼苗的茎尖或田间成株上的叶芽作茎尖剥离材料。 6.1.2　培养基制备 在每1000 ml MS培养基中加GA 0.2 mg～0.3 mg、6-BA 0.1 mg～0.2 mg、NAA 0.0l mg～0.05 mg、 泛酸钙1.5 mg～2.5 mg，PH值调至5.8～6.0之间，分装入管(瓶)。 6.1.3　灭菌 121 ℃压力下高温灭菌20 min，冷却备用。 6.1.4　茎尖剥离接种 将入选材料放入纱布袋，用自来水冲洗1 h后，在无菌条件下，放入70 %～75 %酒精中浸20 s～30 s， 再用0.1 %升汞液消毒8 min～10 min(或用3 %次氯酸钠液加2滴～4滴吐温振荡消毒15 min～20 min)， 取出用无菌水充分冲洗3次～5次，用灭菌滤纸吸干材料表面水分，在体视解剖镜下用手术刀等工具快速 地剥去幼叶，切取带1个～2个叶原基(0.1 mm～0.4 mm)的生长点，迅速接入装有茎尖分化培养基的试管 或培养瓶中，每管(瓶) 放1个生长点。注明品种、茎尖号、接种期。 6.1.5　培养条件 日温20 ℃，夜温15 ℃，光照时数12 h/d～14 h/d，光照强度2000 1x～3000 1x条件下培养。 6.2　病毒检测 6.2.1　检测方法 PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS等病毒，用酶联免疫吸附(ELISA) 法检测，无阳性反应再用指示 植物鉴定。PSTVd用往复双向聚丙胺凝胶电泳法(R-PAGE)或聚合酶链反应(PCR)检测，鉴定筛选出不带 PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM、PVS和PSTVd的脱毒苗。 6.2.2　脱毒苗复检 继代扩繁中选留的脱毒苗，每年至少做一次病毒复检。 6.3　脱毒苗组培快繁 6.3.1　脱毒组培苗来源 经6.2.1检测合格的脱毒苗。 6.3.2　培养基 MS培养基。121 ℃压力下高温灭菌20 min，冷却备用。 6.3.3　快繁 将脱毒苗剪切成1.0 cm～2.0 cm，带一叶一芽的茎段接种于继代培养基上,每瓶培养基接种10个～ 15 个茎段待茎段长成高10.0 cm左右小苗（培养15 d～30 d），进行切段转接，反复继代培养繁殖。DB 63/T 2359—2024 46.3.4　培养条件 日温25 ℃，夜温15 ℃，光照时数12 h/d～14 h/d，光照强度2 000 1x～3 000 1x条件下培养。 7　原原种生产 7.1　隔离网室建立 7.1.1　环境条件 在防虫网室、温室等隔离条件下栽培。 7.1.2　建设要求 隔离网室高3.0 m～3.5 m，宽 6.0 m～10.0 m。防止网室内地表积水和网室外水流入。用孔径60 目～80 目的隔离网纱。网室周围10.0 m范围内不能有其它可能成为马铃薯病虫害侵染源或蚜虫寄主的 植物。 7.2　移栽前准备 7.2.1　炼苗 将苗龄30 d左右，长到7片～8片叶的组培苗打开瓶盖，炼苗2 d～3 d。 7.2.2　苗床基质 蛭石、草炭、珍珠岩或细砂均可作基质。生产原原种以蛭石或蛭石、珍珠岩混合基质为好，混合比 例2: 1，铺设厚度20.0 cm～25.0 cm。 7.2.3　消毒 隔离网室和工具每次使用前应用75 %酒精消毒。 工作人员进出网室须更换鞋和工作服， 并做好消毒。 7.3　管理 7.3.1　移栽 将炼苗后的脱毒苗按每平米300株移栽到苗床，脱毒苗移栽后，轻细均匀喷水，使基质相对湿度保 持在90 %～95 %。 7.3.2　施肥 小苗生根成活后(移栽后7 d～10 d) ， 根据苗情喷施0.2 %～0.3 % N:P:K=2:1:3的营养液4次～6次， 每7 d～10 d喷一次。 7.3.3　浇水 基质相对湿度保持在50 %～60 %，收前7 d～10 d停止浇水。 7.3.4　病虫害防治 发现病株连同薯块拔除，带出网室外销毁。防治方法按照GB/T 8321、NY/T 496、NY/T 1276执行。 7.4　收获、包装、贮存DB 63/T 2359—2024 57.4.1　收获 定植后早熟品种60 d～65 d，中早熟品种65 d～70 d，晚熟种75 d～80 d实时收获。收获时避免机 械损伤和品种混杂。收后摊晾4 d～7 d，剔除烂薯、病薯、伤薯及杂物。 7.4.2　分级 按种薯个体重量大小依次分为5.0 g 以上、3.0 g～5.0 g、1.0 g～2.9 g三个分级。 7.4.3　包装 包装采用尼龙网袋包装，每袋2000粒，按等级和收获期分品种装袋，作好标记，双标签，袋内袋外 各挂标签。 7.4.4　贮存 将种薯平摊或上架，置于1 ℃～3 ℃，相对湿度70 %～80 %，通风避光贮存。装袋不超过网袋体积 的三分之二，平堆厚度为30.0 cm左右。 8　原种生产 8.1　种薯准备 播种前15 d～20 d，将贮存的原原种取出，剔除病薯，烂薯后，置于20 ℃～30 ℃，有散射光的室 内，