书 书 书犐犆犛 ６７ ． ０５０ 犆犆犛犡 ０４ 团 　　　 体 　　　 标 　　　 准 犜 ／ 犆犐犉犛犜 ００７ — ２０２２ 食品中 ２ ′ 岩藻糖基乳糖的测定离子色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳 ２ ′犳狌犮狅狊狔犾犾犪犮狋狅狊犲犻狀犳狅狅犱狊 — 犐狅狀犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿犲狋犺狅犱 ２０２２  ０２  ０７ 发布 ２０２２  ０２  ０７ 实施 中国食品科学技术学会 发布 全国团体标准信息平台 书 书 书前 　　 言 　　 本文件按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２０２０ 《 标准化工作导则 　 第 １ 部分 ： 标准化文件的结构和起草规则 》 的规定起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中国食品科学技术学会提出并归口 。 本文件起草单位 ： 南开大学 、 国家预包装食品质量检验检测中心 （ 浙江 ）、 雅培贸易 （ 上海 ） 有限公司 、 北京三元食品股份有限公司 、 丹尼斯克 （ 中国 ） 有限公司 、 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 、 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 。 本文件主要起草人 ： 王硕 、 王津 、 陈洪波 、 张水锋 、 赵艳荣 、 田芳 、 陈历俊 、 乔为仓 、 文焱 、 彭荣 、 王洪丽 、 段国霞 、 韩丽 、 沈辰婷 、 刘爽 。 Ⅰ 犜 ／ 犆犐犉犛犜 ００７ — ２０２２ 全国团体标准信息平台 食品中 ２ ′ 岩藻糖基乳糖的测定离子色谱法 １ 　 范围 本文件规定了食品中 ２′ 岩藻糖基乳糖的离子色谱测定方法 。 本文件适用于婴幼儿配方食品 、 乳粉和特殊医学用途配方食品中 ２′ 岩藻糖基乳糖含量的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。 其中 ， 注日期的引用文件 ， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ； 不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ３ 　 原理 试样经淀粉转葡糖苷酶和 β  半乳糖苷酶酶解 ， 过滤后 ， 采用离子色谱法分离 ， 脉冲安培检测器检测 ， 外标法定量 。 ４ 　 试剂与材料 注 ： 除非另有规定 ， 本方法所用试剂均为分析纯 ， 实验用水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 试剂 ４ ． １ ． １ 　 ５０％ 氢氧化钠溶液 （ ＮａＯＨ ）。 ４ ． １ ． ２ 　 无水乙酸钠 （ ＣＨ ３ ＣＯＯＮａ ）： 纯度 ≥ ９９．０％ 。 ４ ． １ ． ３ 　 氮气 （ Ｎ ２ ）： 纯度 ≥ ９９．９％ 。 ４ ． １ ． ４ 　 淀粉转葡糖苷酶 ： 来源于黑曲霉 （ 犃狊狆犲狉犵犻犾犾狌狊狀犻犵犲狉 ）， 酶活力 ≥ ７０Ｕ ／ ｍｇ ， 或其他等效淀粉转葡糖苷酶 。 ４ ． １ ． ５ 　 β  半乳糖苷酶溶液 ： 来源于黑曲霉 （ 犃狊狆犲狉犵犻犾犾狌狊狀犻犵犲狉 ） 或乳酸克鲁维酵母 （ 犓犾狌狔狏犲狉狅犿狔犮犲狊犾犪犮狋犻狊 ）， 酶活力 ≥ ４０００Ｕ ／ ｍＬ ， 或其他等效 β  半乳糖苷酶 。 ４ ． １ ． ６ 　 冰乙酸 （ ＣＨ ３ ＣＯＯＨ ）。 ４ ． ２ 　 试剂配制 ４ ． ２ ． １ 　 氢氧化钠溶液 （ ０．５ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 ５０％ 氢氧化钠溶液 （ ４．１．１ ） ８０ｇ （ 精确至 ０．０１ｇ ）， 用水稀释至 ２Ｌ ， 混匀 。 通入氮气保护 ， 密封保存 。 室温下可放置 １ 个月 。 ４ ． ２ ． ２ 　 乙酸钠溶液 （ ０．３ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取无水乙酸钠 （ ４．１．２ ） ４９．２５ｇ （ 精确至 ０．０１ｇ ）， 用水溶解并稀释至 ２Ｌ ， 混匀 。 通入氮气保护 ， 密封保存 。 室温下可放置 １ 个月 。 ４ ． ２ ． ３ 　 氢氧化钠溶液 （ ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 ５０％ 氢氧化钠溶液 （ ４．１．１ ） ４ｇ （ 精确至 ０．０１ｇ ）， 用水稀释至 １ 犜 ／ 犆犐犉犛犜 ００７ — ２０２２ 全国团体标准信息平台 ０．５Ｌ ， 混匀 。 临用前配制 ， 室温放置 。 ４ ． ２ ． ４ 　 乙酸钠缓冲液 （ ｐＨ４．５ ）： 称取冰乙酸 （ ４．１．６ ） ６ｇ （ 精确至 ０．０１ｇ ）， 用水稀释至 ０．４Ｌ ， 混匀 。 用 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠溶液 （ ４．２．３ ） 调节溶液 ｐＨ 至 ４．５±０．１ 。 ２℃ ～ ８℃ 可放置 １ 个月 。 ４ ． ２ ． ５ 　 淀粉转葡糖苷酶溶液 （ ７０Ｕ ／ ｍＬ ）： 称取适量淀粉转葡糖苷酶 （ ４．１．４ ） 溶解于乙酸钠缓冲液 （ ４．２．４ ）， 淀粉转葡糖苷酶溶液的浓度为 ７０Ｕ ／ ｍＬ ， 混匀 。 临用前配制 ， ２℃ ～ ８℃ 放置 。 ４ ． ２ ． ６ 　 酶混合溶液 ： 将淀粉转葡糖苷酶溶液 （ ４．２．５ ） 和 β  半乳糖苷酶溶液 （ ４．１．５ ） 按体积比 ４∶１ 的比例混匀 （ 每 ０．２ｇ 试样至少需要淀粉转葡糖苷酶 ２．８Ｕ 和 β  半乳糖苷酶 ４０Ｕ ）。 临用前配制 ， ２℃ ～ ８℃ 放置 。 ４ ． ３ 　 标准品 ２′ 岩藻糖基乳糖 （ Ｃ １８ Ｈ ３２ Ｏ １５ ）： ＣＡＳ 号 ４１２６３９４９ ， 纯度 ≥ ９０％ ， 水分 ≤ ９％ 。 ４ ． ４ 　 标准溶液配制 ４ ． ４ ． １ 　 ２′ 岩藻糖基乳糖贮备溶液 （ ５０００ｍｇ ／ Ｌ ）： 准确称取 １００ｍｇ （ 精确至 ０．１ｍｇ ） ２′ 岩藻糖基乳糖标 准品于称量纸上 ， 转移至烧杯 ， 加水溶解 ， 润洗转移至 ２０ｍＬ 容量瓶中 ， 加水定容 ， 混匀 。 分装后的贮备溶液于 －８０℃ 可放置 ８ 个月 ， 于 －１８℃ 可放置 ３ 个月 。（ 贮备溶液质量浓度的计算需折算标准品的纯度及水分 ， 开封后的标准品在使用前需使用微量水分测定仪重新测定水分 。） ４ ． ４ ． ２ 　 ２′ 岩藻糖基乳糖中间溶液 （ ５００ｍｇ ／ Ｌ ）： 准确吸取 ２′ 岩藻糖基乳糖贮备溶液 （ ４．４．１ ） ５．００ｍＬ 于 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 加水定容 ， 混匀 。 临用前配制 ， 室温放置 。 ４ ． ４ ． ３ 　 ２′ 岩藻糖基乳糖标准系列工作溶液 ： 分别准确吸取 ２′ 岩藻糖基乳糖中间溶液 （ ４．４．２ ） ０．１０ｍＬ 、 ０．５０ｍＬ 、 １．００ｍＬ 、 ２．５０ｍＬ 、 ５．００ｍＬ 、 １０．００ｍＬ 、 １２．００ｍＬ 于 ７ 个 ５０ｍＬ 容量瓶 ， 加水定容 ， 混匀 ， 得到 ２′ 岩藻糖基乳糖质量浓度为 １ｍｇ ／ Ｌ 、 ５ｍｇ ／ Ｌ 、 １０ｍｇ ／ Ｌ 、 ２５ｍｇ ／ Ｌ 、 ５０ｍｇ ／ Ｌ 、 １００ｍｇ ／ Ｌ 、 １２０ｍｇ ／ Ｌ 的标准系列工作溶液 。 分装后的标准系列工作溶液于 －１８℃ 可放置 ３ 个月 ， 于 ２℃ ～ ８℃ 可放置 ５ｄ 。 ４ ． ５ 　 材料 ４ ． ５ ． １ 　 微孔滤膜 ： 尼龙 ， ０．２２ μ ｍ 。 ４ ． ５ ． ２ 　 烧杯 ： １０ｍＬ 、 ５００ｍＬ 、 ２Ｌ 。 ４ ． ５ ． ３ 　 离心管 ： １５ｍＬ 。 ４ ． ５ ． ４ 　 容量瓶 ： ５ｍＬ 、 １０ｍＬ 、 ２０ｍＬ 、 ５０ｍＬ 、 ５００ｍＬ 和 ２Ｌ 。 ５ 　 仪器和设备 ５ ． １ 　 离子色谱 ： 配有三元及以上梯度泵 ， 脉冲安培检测器 。 ５ ． ２ 　 预柱 ： ＣａｒｂｏＰａｃ ＴＭ ＰＡ１ＧｕａｒｄＣｏｌｕｍｎ 或等效柱 。 ５ ． ３ 　 分离柱 ： ＣａｒｂｏＰａｃ ＴＭ ＰＡ１ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｏｌｕｍｎ 或等效柱 。 ５ ． ４ 　 分析天平 ： 感量为 ０．１ｍｇ 和 ０．０１ｇ 。 ５ ． ５ 　 恒温水浴锅 ： ６０℃±２℃ 。 ５ ． ６ 　 ｐＨ 计 ： 精度为 ±０．０１ 。 ５ ． ７ 　 磁力搅拌器 。 ５ ． ８ 　 涡旋混合器 。 ５ ． ９ 　 氮吹仪 。 ５ ． １０ 　 超纯水仪 。 ２ 犜 ／ 犆犐犉犛犜 ００７ — ２０２２ 全国团体标准信息平台 ６ 　 分析步骤 ６ ． １ 　 试样制备 ６ ． １ ． １ 　 ２ ′ 岩藻糖基乳糖含量 ≤ １８０ 犿犵 ／ １００ 犵 的固态试样或 ２ ′ 岩藻糖基乳糖含量 ≤ ２０ 犿犵 ／ １００ 犵 的液 态试样 ６ ． １ ． １ ． １ 　 固态试样 ： 准确称取试样 ２５ｇ （ 犿 １ ， 精确至 ０．００１ｇ ）， 加水 ２００ｇ （ 犿 ２ ， 精确至 ０．００１ｇ ）， 磁力搅 拌 １５ｍｉｎ 。 准确称取 ０．５ｇ （ 犿 ３ ， 精确至 ０．００１ｇ ） 上述液体于 ５ｍＬ （ 犞 ） 容量瓶中 ， 加入 １２５ μ Ｌ 酶混合溶 液 （ ４．２．６ ）， 加水定容 。 混匀并转移至 １５ｍＬ 离心管中 ， 加盖 ， 放置于恒温水浴锅中 ６０℃ 酶解 ２ｈ ， 酶解后取出并静置至室温 ， 微孔滤膜过滤后进样分析 。 ６ ． １ ． １ ． ２ 　 液态试样 ： 准确称取试样 ０．５ｇ （ 犿 ３ ， 精确至 ０．００１ｇ ） 于 ５ｍＬ （ 犞 ） 容量瓶中 ， 加入 １２５ μ Ｌ 酶混合 溶液 （ ４．２．６ ）， 加水定容 。 混匀并转移至 １５ｍＬ 离心管中 ， 加盖 ， 放置于恒温水