ICS 67.040 CCS X 64 团 体 标 准 T/CSTM 00745—2022/T/CAIA/SH 018—2022（IDT） 植物油 苯并 (a)芘测定 超临界流体色谱 在线净化 -反相高效液相色谱法 Vegetable oils —Determination of benzo(a)pyrene —Reverse phase high performance liquid chromatography method with on -line supercritical fluid chromatography clean up 2022-02-21发布 2022-05-21 实施 中关村材料试验技术联盟 中国分析测试协会 发布 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 CSTMhQÆSÑ^Ou(全国团体标准信息平台 T/CSTM 00745— 2022/T/CAIA/SH 018 —2022 1 前 言 本文件参照 GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》 ， GB/T 20001. 4-2015《标准编写规则 第4部分：试验方法标准》的规定起草。 T/CSTM 00745 —2022与T/CAIA/SH 018-2022一致程度为等同（ IDT）。 本文件由中国材料与试验团体标准委员会综合 标准领域委员会（ CSTM/FC 99）和中国分析测试协 会共同提出。 本文件由中国材料与试验团体标准委员会科学试验领域委员会（ CSTM/FC 98）和中国分析测试协 会共同归口。 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00745— 2022/T/CAIA/SH 018 —2022 2 引 言 本文的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到 1条与 6.1超临界流体色谱 —反相液相 色谱联用系统（ SFC-RPLC）相关的专利的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。 该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联 系方式获得： 专利持有人姓名：岛津企业管理（中国）有限公司 地址：中国上海市上海自由贸易试验区富特西一路 381 号汤臣园区 A1 楼第 6 层B部位 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的 责任。 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00745— 2022/T/CAIA/SH 018 —2022 3 植物油 苯并(a)芘测定 超临界流体色谱在线净化 -反相高效液相色谱法 重要提示： 使用本文件 的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全 问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本文件规定了使用超临界流体色谱在线净化- 反相高效液相色谱法测定植物油中苯并 (a)芘的方法。 本文件适用于植物油中质量分数为 0.5 μg/kg~50 μg/kg的苯并( a)芘的测定。 注：本文件规定的范围是经过实验室间共同试验验证过的，通过改变试料量可能能够扩大测定范围。一旦扩展了测 定范围，实验室应采用实验手段加以确认。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 5524 动植物油脂扦样 GB/T 6682—2008分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 超临界流体 supercritical fluid SCF 处于临界温度和临界压力以上的流体。 3.2 超临界流体色谱法 supercritical fluid chromatography SFC 以超临界流体作为流动相的一种色谱方法。 4 原理 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00745— 2022/T/CAIA/SH 018 —2022 4 试料经正己烷溶解后，使用超临界流体色谱（ SFC）-反相液相色谱（ RPLC）二维系统对该溶液进 行在线超临界流体色谱分离净化后，用中心切割的方式将苯并 (a)芘导入到第二维的反相高效液相色谱 系统进行分离，荧光检测器检测，外标法定量。 5 试剂或材料 5.1 除非另有说明，在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和 GB/T 6682 -2008规定的一级水。 5.2 正己烷。 5.3 异丙醇。 5.4 甲醇。 5.5 乙腈。 5.6 甲苯。 5.7 液体二氧化碳 纯度≥ 99.99 %（质量分数）。 警示： 苯并 (a)芘是一种已知致癌物质， 所有相关工作均应在通风橱中进行， 佩戴手套以减少暴露。 5.8 苯并(a)芘标准储备液 ，100μg/mL 称取 1.0 mg苯并 (a)芘标准品（纯度不低于 99.0 %（质量分数） ），精确到 0.01 mg。置于 10 mL 容量瓶中，用甲苯 （见5.6）溶解，定容。避光保存在 0 ℃~5 ℃冰箱中，保存期 1年。 5.9 苯并(a)芘标准中间液， 1.0 μg/mL 移取0.1 mL苯并(a)芘标准储备液 （见 5.8） ， 用乙腈 （见5.5）定容到10 mL。 避光保存在 0 ℃~5 ℃ 冰箱中，保存期 1个月。 5.10 苯并(a)芘标准工作液 将苯并(a)芘标准中间液 （见 5.9） 用异丙醇 （见5.3）稀释， 得到浓度分别为 0.05ng/mL、0.2ng/mL、 0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的校准曲线溶液，用时现配。 6 仪器设备 6.1 超临界流体色谱 —反相液相色谱联用系统（ SFC-RPLC） 配有高压两位六通阀和荧光检测器，或性能相当者。超临界流体色谱在线净化系统配置图和工作原 理参见附录A中图A.1和图A.2。 6.2 涡旋振荡器 转速不低于 1000rpm。 6.3 分析天平 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00745— 2022/T/CAIA/SH 018 —2022 5 感量为 0.01 mg和1 mg。 6.4 玻璃具塞刻度试管 10 mL。 6.5 玻璃样品瓶 约1mL，配有可密封的盖子。 7 样品 按照 GB/T 5524的规定扦样。在采样过程中，注意防止样品污染。 8 试验步骤 8.1 试液制备 称取1.00 g 样品，精确到 0.001 g。 将试料置于10 mL 玻璃具塞刻度试管（见 6.4）中，加入正己烷（见 5.2）定容。用涡旋振荡器（见 6.2）振荡 1 min，混匀，转移 至1 mL玻璃样品瓶（见 6.5），待测。 8.2 推荐的仪器条件 推荐的仪器条件如下： a)SFC色谱净化柱：二醇基柱， 柱长 250 mm，内径4.6 mm，粒径5 µ m，或性能相当者； b)预处理柱： C18柱，柱长 50 mm，内径4.6 mm ，粒径 5 µm，或性能相当者； c)分析色谱柱： C18柱，柱长 150 mm，内径2.1 mm，粒径 5 µm，或性能相当者； d)柱温： 40°C； e)SFC流动相组成、梯度洗脱、阀切换参考条件见附录 A； f)分析流动相组成：乙腈水 混合溶液（体积比： 9:1）； g)分析流动相流速： 1 mL/min ； h)洗针液：异丙醇； i)进样量： 20L； j)荧光检测器：激发波长 384nm，发射波长 406nm； k)室温：控制在 18° C ~30° C 范围内。 8.3 校准曲线的绘制 将苯并(a) 芘标准工作液 （见 5.10）分别注入系统，测定相应色谱峰。 以标准系列工作液的浓度为横 坐标，以峰面积为纵坐标，得到 校准曲线回归方程， 苯并 (a)芘标准溶液的液相色谱图 ，见附录 B。 8.4 试样溶液的测定 将待测试液（见8.1）进样测定，得到苯并 (a)芘色谱峰面积。根据校准曲线回归方程，计算试液中 苯并 (a)芘的浓度。 9 试验数据处理 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00745— 2022/T/CAIA/SH 018 —2022 6 试样中苯并 (a)芘的含量 按式（ 1）计算： .............................(1