ICS 65.020.99 CCS B 20 团 体 标 准 T/CSTM 00873—2022/T/CAIA/SH 016—2022（IDT） 工业大麻 大麻二酚、大麻二酚酸含量测定 高效液相色谱法 Industrial hemp - determination of cannabidiol and cannabinolic acid - high performance liquid chromatography 2022-02-24发布 2022-05-24 实施 中关村材料试验技术联盟 中国分析测试协会 发布 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 I 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ................................................................................. 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语与定义 ........................................................................ 1 4 原理 ............................................................................... 1 5 试剂和材料 ........................................................................... 1 6 仪器和设备 ......................................................................... 2 7 分析步骤 ........................................................................... 2 8 结果计算与表示 ....................................................................... 3 9 精密度 ............................................................................. 3 10 附录A（资料性） 大麻酚类物质标准溶液 色谱图 .......................................... 4 11 附录B（资料性）起草单位和主要起草人 ................................................ 5 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00873 —2022/T/CAIA/SH 016 —2022 II 前 言 本文件参照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规 则起草。 请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 T/CSTM XXX —2022 与T/CAIA-2022一致程度为等同（ IDT）。 本文件由中国材料与试验团体标准委员会综合标准领域委员会（ CSTM/FC99 ）和中国分析测试协会 标准化委员会 共同提出。 本文件由中国材料与试验团体标准委员会综合标准领域委员会（ CSTM/FC99 ）和中国分析测试协会 标准化委员会共同归口。 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00873 —2022/T/CAIA/SH 016 —2022 1 工业大麻 大麻二酚、大麻二酚酸含量测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了采用高效液相色谱法测定工业大麻中大麻二酚、大麻二酚酸分析方法的原理、仪器 与试剂材料、分析步骤、仪器测定条件、分析结果表述、数据精密度和最低检出限。 本文件适用于工业大麻中大麻二酚、大麻二酚酸含量的测定， 定量测定范围为 0.4 mg/g ～100 mg/g。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 —2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 工业大麻 Industrial hemp 植株群体花期顶部叶片及花穗干物质中的四氢大麻酚（ THC）含量不大于 0.3%，不能直接作为毒 品利用的大麻作物品种类型。 4 原理 工业大麻样品烘干、粉碎、研磨、过筛后，经 95% 乙醇溶液提取，微孔滤膜过滤，用反相色谱分 离，紫外检测器 检测，采用外标法定量。 5 试剂和材料 5.1 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水应符合 GB/T6682-2008中一级水的要求。 5.2 甲醇（ CH 4O）：色谱纯。 5.3 乙腈（ C2H3N）：色谱纯。 5.4 乙醇（ C2H6O）：色谱纯。 5.5 磷酸（ H3PO4）：分析纯（纯度≥ 85%）。 5.6 大麻二酚（ CBD）标准品（ C21H30O2）： CAS：13956- 29-1，纯度 ≥ 98%。 5.7 大麻二酚酸（ CBDA）标准品（ C22H30O4）： CAS：1244- 58-2，纯度 ≥ 98%。 5.8 95%乙醇溶液：准确移取 950 mL无水乙醇（5. 4）于 1 L容量瓶（ 6.9）中，以水定容至刻度线，混 匀。 5.9 流动相 A（0.1%磷酸水溶液）： 准确移取 1 mL磷酸（5.5）于 1 L容量瓶（ 6.9）中用水定容， 使 用前经水相滤膜（6.7）抽滤。 5.10 流动相 B（0.1%磷酸乙腈溶液）： 准确移取 1 mL磷酸（5.5）于 1 L容量瓶（ 6.9）用乙腈定容， 使用前经 有机微孔滤膜（6.8）抽滤，超声 波清洗器 （6.2）脱气。 CSTMhQÆSÑ^Ou( 全国团体标准信息平台 T/CSTM 00873 —2022/T/CAIA/SH 016 —2022 2 5.11大麻酚混合标准 储备溶液（40 μg/mL）：准确移取 1 mg/mL CBD标准品（ 5.5）、 1 mg/mL CBDA 标准品（ 5.6）各1 mL置于 25 mL容量瓶（ 6.9）中，用 甲醇（5.2）溶解并定容 ，标准储备溶液避光保 存于 4 ℃ 冰箱备用，有效期 3个月。 6 仪器和设备 6.1 涡旋振荡器。 6.2 超声波清洗器 ，功率不低于 250 W，或相当的设备。 6.3 离心机，不低于 4000 rpm，或相当的设备。 6.4 鼓风干燥箱，能够控制温度在 (70℃±1℃) 范围。 6.5 高效液相色谱 ，配有自动进样器、四元泵、柱温箱、二极管阵列检测器等部分。 6.6 电子天平 ，感量 0.0001 g。 6.7 水相滤膜：孔径 0.22 μm。 6.8 有机微孔 滤膜：孔径 0.22 μm。 6.9 容量瓶： 1000m L，100 mL，50 mL，25 mL，10 mL。 7 分析步骤 注意：本章尽可能避免阳光直射或在强光下操作。 7.1 样品提取 取适量阴干的工业大麻样品置于鼓风干燥箱（ 6.4） 70 ℃± 1 ℃ 干燥 4 h，全部研细混匀，过 50 目 筛；称取 0.2 g 样品于试管中，记录称量 质量 mi。 加入 95% 乙醇溶液（ 5.8）10 mL，用涡旋振荡器（ 6.1）涡旋 20 s，用超声波清洗器（ 6.2）超声 15 min 后，在离心机（ 6.3）上以 3500 r/min 离心 3 min，将清液转移至 100 mL容量瓶（6.9），重复上 述步骤 3 次，合并上清液，并用 95% 乙醇溶液（ 5.8）定容至 100 mL。过 0.22 µm 有机微孔滤膜 （6.8）后待测。 7.2 校准曲线的配制 分别准确移取适量大麻酚混合标准储备溶液（ 5.11），用甲醇（5.2）稀释并定容至刻度线，摇 匀，得到大麻酚系列校准曲线 工作溶液（质量浓度分别为 0.8 μg/mL、1.6 μg/mL、4 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 、180 μg/mL ，190 μg /mL，200 μg/mL ）。 7.3 样品测定 7.3.1 高效液相色谱参考条件 a) 色谱柱： C18，150 mm× 4.6 mm ，粒径 5