ICS65.020 CCSB05 团 体 标 准T/ZJZY T/ZJZYC03-2021 铁皮石斛种苗生产技术规程 TechnicalregulationsforplantletsreproductionofDendrobiumofficinale 2021-11-18发布 2021-12-18实施 浙江省中药材产业协会发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/ZJZYC03-2021 前言 本标准按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规 则起草。 本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由浙江省中药材产业协会提出并归口。 本标准起草单位：浙江大学、浙江省中药材产业协会、浙江省农业技术推广中心 本标准主要起草人：毛碧增、张亚惠、钱亦纯、何伯伟、王松琳、叶梓 本文件适用于浙江省中药材产业协会内所有会员单位。 本文件由浙江省中药材产业协会负责解释。联系人：毛碧增。联系电话：0571-88982678。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/ZJZYC03-2021 铁皮石斛种苗生产技术规程 1范围 本文件规定了铁皮石斛种苗的术语和定义、种苗生产、质量要求、包装、标志、运输与 贮存、田间管理等要求。 本文件适用于铁皮石斛种苗生产。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T191包装储运图示标志 DB33/T635-2015铁皮石斛生产技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蒴果 一种由合生心皮的复雌蕊发育而成的果实，铁皮石斛蒴果含有大量的淡黄色种子。 3.2 实生苗 通过种子在无菌或自然环境下萌发生长得到的种苗。 3.3 原球茎 由铁皮石斛的茎、芽等组织器官脱分化形成的具有发育潜能的细胞团。 3.4 不定芽 离体培养时原球茎再分化的芽或者直接从茎节长出的芽。 4种苗生产 4.1留种 原植物应符合《中国高等植物图谱》收载的兰科植物铁皮石斛(又名黑节草Dendrobium officinaleKimuraetMigo)的植物特征，经过鉴定确认或品种审定。选用适合当地栽培环境的 优质、高产、抗病、抗逆性好的种源。留种地应具有良好的物理隔离措施或方圆1000m内 无其它种类石斛。留种株应该选择品种特性纯正、生长健壮的植株。 4.2实生苗培育 4.2.1制种 盛花期，取同一株系内生活力最强的花药和柱头，进行授粉。母本在授粉后立即摘除唇 瓣，及时挂牌标志。授粉后，蒴果开始转黄时，采收饱满、成熟的果实。 全国团体标准信息平台 T/ZJZYC03-2021 4.2.2蒴果播种 将采收的蒴果经无菌水清洗后置于超净工作台，75%乙醇浸泡1min后，无菌水冲洗表 面3次～5次。然后用浓度为1.0%～1.5%的NaClO浸泡20min，并不停摇晃，用无菌水冲 洗5次～6次，使无异味，无菌滤纸吸干水后，用无菌剪刀在蒴果顶部剪一缺口，轻轻抖动， 将蒴果内的种子均匀撒在种子萌发培养基上MS+椰子汁100ml/L～200ml/L+蔗糖30g/L+ 琼脂8g/L，pH5.6～5.8。 4.2.3继代培养 待幼苗长到1mm～3mm时，转接到继代培养基MS+6-BA0.5mg/L～1.5mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8，进行继代培养。 4.2.4生根培养 待幼苗长至1.0cm～1.5cm高时，转接到生根培养基1/2MS+香蕉100g/L+蔗糖30g/L+ 琼脂8g/L，pH5.6～5.8，进行生根培养。 4.3无性系培育 4.3.1外植体消毒 切取带芽的长1.0cm～2.0cm的茎段，无菌水清洗后置于超净工作台，用75%乙醇浸泡1 min，无菌水冲洗表面3次～5次，然后用浓度为1.0%～1.5%的NaClO浸泡，加1～2滴Tween-20， 并不断摇动，8min～10min后用无菌水冲洗5次～8次，用无菌滤纸吸干水分。 4.3.2不定芽诱导和增殖 切取带芽的长0.5cm～1.0cm的茎段，接种到不定芽诱导培养基MS+椰汁150ml/L+蔗 糖30g/L+琼脂8g/L，pH5.6。待长出不定芽后，接种到不定芽增殖培养基MS+6-BA1.0 mg/L～1.5mg/L+NAA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8。 不定芽继代控制在6代～8代。 4.3.3原球茎诱导、增殖和分化 剥取5mm左右带分生组织的茎尖，接种到原球茎诱导培养基上MS+6-BA1.5mg/L～2.5 mg/L+NAA0.2mg/L+土豆100g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8。 将原球茎接种到原球茎增殖培养基上MS+6-BA0.5mg/L+NAA1.5mg/L+土豆50 g/L+蔗糖30g/L，pH5.6～5.8。 将原球茎接种到原球茎分化培养基上MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8。 原球茎继代控制在6代～8代。 4.3.4生根培养 待幼苗长至1.0cm～1.5cm高时，转接到生根培养基1/2MS+香蕉100g/L+蔗糖30g/L+ 琼脂8g/L，pH5.6～5.8，进行生根培养。 4.4培养条件 光照强度30μmol·m-2·s-1～60μmol·m-2·s-1，白天温度25℃±2℃，晚上温度22℃±2℃（黑 暗培养）。每天照光12h～14h。 全国团体标准信息平台 T/ZJZYC03-2021 5质量要求 组培瓶苗的质量等级指标、检验方法、检验规则参见附录A。 6包装、标志、运输与贮存 6.1包装标志 组培瓶苗宜用塑料箱或纸板箱包装。包装箱内附种苗出厂（圃）合格证，外面应注明实 生苗或原球茎诱导苗、数量、出苗日期、批号、标准号、生产单位的地址和联系电话，和其 他按GB/T191的规定执行。 6.2运输 运输过程中应控温，温度以22℃～25℃为宜。 6.3贮存 组培瓶苗常温弱光照条件下可以贮存7d～10d。 7田间管理 田间管理按照DB33/T635-2015执行。 全国团体标准信息平台 T/ZJZYC03-2021 1AA 附录A （规范性附录） 组培瓶苗的质量要求、检验方法、检验规则 A.1质量要求 A.1.1组培瓶苗质量等级指标 组培瓶苗质量等级指标见表A.1。 表A.1组培瓶苗质量等级指标 项目指 标 优质苗 合格苗 株高，cm 5.0～8.0 3.0～5.0 茎粗，mm ≥3.0 1.0～3.0 根数，条 5～8 3～5 叶片，片 ≥5 3～5 外观要求 生长健壮、根系发达、无污染、无病斑、无畸形 A.2检验方法 株高用分度值1mm的直尺测量，茎粗用游标卡尺测量。 A.3检验规则 A.3.1组批规则 同一时间，同一地点，取得同一品种不同单株的外植体经过组织培养培育的种苗为同一 检验批次。 A.3.2抽样 组培瓶苗抽样按SN/T2122-2015进出境植物及植物产品检疫抽样方法5.2规定执行。 A.3.2.1出厂检验 由厂家执行检验组培瓶苗和脱毒种苗的株高和茎粗。并附有铁皮石斛种苗出厂合格证。 A.4判定原则 检验结果全部符合本标准的，则判定该批次为合格种苗或优质苗。否则，则判定该批次 种苗为不合格。 全国团体标准信息平台 T/ZJZYC03-2021 附录B （资料性附录） 铁皮石斛瓶苗出厂合格证 B.1铁皮石斛瓶苗出厂合格证 铁皮石斛瓶苗出厂合格证样式见表B.1。 表B.1铁皮石斛瓶苗出厂合格证 编号： 品种名称 种源采集地 实生苗或无性系 等级 繁殖代数（代） 种苗数量（瓶） 购苗单位 生产单位 质检员 出厂日期 全国团体标准信息平台