江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 5062—2025 2025 ‑02‑21发布 2025 ‑03‑21实施 江苏省市场监督管理局 中 国 标 准 出 版 社　发　 布　 　出　 版　ICS 07.080 CCS C 50 人类肠道菌群样本制备和保藏技术规范 Technical specification for human intestinal flora sample preparation and preservation 目　　次 前言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ 1　范围………………………………………………………………………………………………………… 1 2　规范性引用文件 …………………………………………………………………………………………… 1 3　术语和定义 ………………………………………………………………………………………………… 1 4　基本要求 …………………………………………………………………………………………………… 2 5　制备………………………………………………………………………………………………………… 2 5.1　方案制定 ……………………………………………………………………………………………… 2 5.2　知情同意 ……………………………………………………………………………………………… 2 5.3　粪便样本 ……………………………………………………………………………………………… 3 5.4　肠道菌群样本 ………………………………………………………………………………………… 4 6　保藏………………………………………………………………………………………………………… 5 7　数据管理 …………………………………………………………………………………………………… 5 附录 A（资料性）　布里斯托大便分类法 ……………………………………………………………………… 6 附录 B（资料性）　数据记录明细 ……………………………………………………………………………… 7 参考文献 ………………………………………………………………………………………………………… 8 ⅠDB32/T 5062—2025前　　言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江苏省卫生健康委员会提出并组织实施 。 本文件由江苏省卫生健康标准化技术委员会归口 。 本文件起草单位 ：苏州市疾病预防控制中心 、南京医科大学 、徐州市贾汪区疾病预防控制中心 、苏州 善佰生物技术有限公司 。 本文件主要起草人 ：戴宁彬、张钧、吴云侠、刘芳、杨海兵、穆延召、姜来、杨文浩、詹亚惠、朱晓燕。 ⅢDB32/T 5062—20251DB32/T 5062—2025 人类肠道菌群样本制备和保藏技术规范 1　范围 本文件规定了人类肠道菌群样本制备和保藏的基本要求 、制备流程 、保藏要求和数据管理等技术 内容。 本文件适用于人类肠道菌群样本制备和保藏 。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB 19489　实验室　生物安全通用要求 GB/T 37864　生物样本库质量和能力通用要求 GB/T 39725　信息安全技术　健康医疗数据安全指南 GB/T 41908　人类粪便样本采集与处理 GB/T 41910　洗涤粪菌质量控制和粪菌样本分级 WS 233　病原微生物实验室生物安全通用准则 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 肠道菌群　 intestinal flora 寄居在肠道内的正常菌群 、条件致病菌和致病菌等微生物群系 。 3.2 生物样本库　 biobank 开展生物样本获得和储存过程的合法实体或其部分 ，获得和储存过程包括生物样本及相关数据的收 集、制备、保存、测试、分析和分发 。 3.3 布里斯托大便分类法　 Bristol stool scale 依据粪便不同形态和质地进行分类的一种方法 ，从1型最硬粪块到 7型水样便共分 7种类型，常以图 片展示和文字描述的视觉性图表形式呈现 。 注：又称 Bristol评分。 3.4 批次　 lot 在规定限度内具有同一性质和质量 ，并在同一连续生产周期中生产出来的一定数量的生物样本为一 批次。2DB32/T 5062—2025 3.5 香农 -威纳指数　 Shannon Wiener index 从物种种类数和均匀性 （各物种的相对比例 ）两方面来衡量群落物种多样性的一项指标 ，该指数越大 代表群落的物种多样性越高 。 3.6 保存液　 tabilizer 能保存粪便微生物固相和核酸物质的化学试剂 。 注：保存液的主要作用为 ： a）　固定微生物 ，使微生物不能继续生长变化 ，相关蛋白酶等失去活性 ； b）　保护脱氧核糖核酸 （DNA） ，稳定 DNA使其不易发生降解和变异 。 4　基本要求 4.1　从事人类肠道菌群样本制备和保藏活动的生物样本库应符合 GB 19489、GB/T 37864和WS 233的 规定，相关设备 、环境和消毒隔离应满足普通型 BSL‑ 2实验室要求 ，所有肠道菌群样本制备用设备 、耗材 和所在环境应保证无菌 。 4.2　实施人类肠道菌群样本制备和保藏的人员应符合 GB/T 41908和GB/T 41910的规定。 4.3　应建立质量管理体系规范人类粪便样本采集和质量控制 ，以及人类肠道菌群样本制备 、质量控制和 保藏的全过程 。 4.4　人类肠道菌群样本制备和保藏过程中产生的各类数据应及时 、准确和清晰地记录 、保存和备份 。 4.5　应对样本捐赠人提供足够的隐私保护 ，样本捐赠人信息管理应符合 GB/T 39725的规定。 5　制备 5.1　方案制定 在生物样本采集前 ，应明确生物样本采集目的 、种类、数量、时间和周期 ，明确样本捐赠人的纳入排除 标准，制定详细的生物样本采集 、处理、质量控制和保藏方案 。 5.2　知情同意 生物样本采集和保藏项目应通过伦理审查 ，招募人员应接受规范化培训 ，应使用样本捐赠人能够理 解的简明语言传达信息 ，使他们了解采集样本的风险 、获益和可能产生的后果 ，使其知情并征得其同意 ， 信息应包括但不限于 ： ——捐赠人纳入排除标准 ； ——捐赠人准备说明 ； ——捐赠人知情同意要求 ； ——捐赠人的权利 、义务、风险和可能产生的后果 ； ——生物样本采集种类 、数量、采集容器类型和采集方法等采集内容 ； ——粪便样本接收标准 ； ——保护捐赠人个人信息的政策 ； ——特殊处理要求等其他需要沟通的内容 。3DB32/T 5062—2025 5.3　粪便样本 5.3.1　采集 粪便采集地点宜邻近样本质量控制和制备的实验室 。捐赠人解大便前应先进行手部清洁并排尽尿 液，宜使用洁净的蹲式便器 ，在其内放置一个内径不低于 10 cm，体积不低于 500 mL，无菌，具有易于开启 且密封性良好盖子的采集容器 ，打开采集容器盖子 ，将粪便排入采集容器 。采集完成后即时密闭采集容 器，将粪便样本 、样本相关信息和知情同意书交实验人员 。 5.3.2　质量控制 5.3.2.1　称量并记录粪便样本重量 ，每份样本不低于 100 g为合格。 5.3.2.2　观测粪便样本性状 ，不应混合污染物 ，如尿液、污水和消毒剂等异物 。 5.3.2.3　采用布里斯托大便分类法 （见附录 A）评估粪便样本 ，3型~5型为合格 ，用于制备肠道菌群 样本。 5.3.2.4　每批次粪便样本应留样 ，用于质量控制和溯源 。 5.3.2.5　每批次粪便样本应随机抽样 1份，按表 1进行质量控制检测 ；长期捐赠人的粪便样本应每 2个 月另行随机抽样 1份留样，按表 2进行质量控制检测 。 表1　每批次粪便样本质量合格项目指标 质量控制项目 寄生虫 虫卵 夏科莱登结晶 孢子 菌丝 隐血 霍乱弧菌 副溶血弧菌 沙门氏菌 志贺氏菌 大肠埃希菌 O157 轮状病毒抗原结果 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性检测方法 镜检法 镜检法 镜检法 镜检法 镜检法 免疫法 培养法 培养法 培养法 培养法 培养法 免疫法 表2　长期捐献粪便样本捐赠人每 2个月粪便样本质量合格项目指标 质量控制项目 菌群多样性 幽门螺杆菌 艰难梭菌 弯曲菌结果 菌群种类数 ≥200种 香农 -威纳指数 >4.0 阴性 阴性 阴性检测方法 测序法 测序法 测序法 测序法4DB32/T 5062—2025 5.3.2.6　所有项目均合格者为合格粪便样本 。标识不合格粪便样本 ，标识由不合格粪便样本制备的肠 道菌群样本为不合格肠道菌群样本 。 5.3.2.7　不合格粪便和肠道菌群样本应单独存放在不合格区 ，执行销毁并记录 。 5.4　肠道菌群样本 5.4.1　制备 5.4.1.1　新鲜粪便样本应在采集后 30 min内开始制备肠道菌群样本 ，从粪便排出体外至菌液制作完成 应保证在 2 h以内。 5.4.1.2　肠道菌群样本制备应按照以下程序操作 。 a）稀释：每次取不少于 50 g粪便置于一个无菌容器 ，加入 3倍~5倍质量的无菌生理盐水 。 b）搅拌：使用无菌电动搅拌器以