! 7 ,     江苏省市场监督管理局 发　布 中 国 标 准 出 版 社 出　版彩色马蹄莲组培快繁技术规程 Technical code of practice for rapid propagation of colored calla lily by tissue culture 　CCS B 62 DB32/T 4922—2024ICS 65.020.20　 2024 -12-16发布 2025 -01-16实施DB32/T 4922—2024 前言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ 1 范围………………………………………………………………………………………………………… 1 2 规范性引用文件 …………………………………………………………………………………………… 1 3 术语和定义 ………………………………………………………………………………………………… 1 4 缩略语……………………………………………………………………………………………………… 1 5 无菌系的建立 ……………………………………………………………………………………………… 1 5.1 外植体获取 …………………………………………………………………………………………… 1 5.2 外植体的消毒 ………………………………………………………………………………………… 2 5.3 不定芽的诱导 ………………………………………………………………………………………… 2 6 培养………………………………………………………………………………………………………… 2 6.1 初代培养 ……………………………………………………………………………………………… 2 6.2 继代培养 ……………………………………………………………………………………………… 2 6.3 无菌仔球的培养 ……………………………………………………………………………………… 2 6.4 生根培养 ……………………………………………………………………………………………… 2 7 炼苗及移栽 ………………………………………………………………………………………………… 2 7.1 环境条件 ……………………………………………………………………………………………… 2 7.2 炼苗…………………………………………………………………………………………………… 2 7.3 移栽基质 ……………………………………………………………………………………………… 3 7.4 移栽…………………………………………………………………………………………………… 3 8 移栽后管理 ………………………………………………………………………………………………… 3 8.1 水分…………………………………………………………………………………………………… 3 8.2 光照…………………………………………………………………………………………………… 3 8.3 温度…………………………………………………………………………………………………… 3 8.4 湿度…………………………………………………………………………………………………… 3 8.5 施肥…………………………………………………………………………………………………… 3 8.6 病害防治 ……………………………………………………………………………………………… 3 9 一年生仔球的培养 ………………………………………………………………………………………… 3 9.1 生产…………………………………………………………………………………………………… 3 9.2 采收…………………………………………………………………………………………………… 3 9.3 储藏…………………………………………………………………………………………………… 4 附录 A（规范性） 不同培养阶段培养基配方及培养条件 …………………………………………………… 5 附录 B（资料性） 基质消毒方法 ……………………………………………………………………………… 6 附录 C（资料性） 常用细菌杀菌剂 …………………………………………………………………………… 7目　　次 ⅠDB32/T 4922—2024 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江苏省园艺标准化技术委员会提出 、归口并组织实施 。 本文件起草单位 ：江苏省中国科学院植物研究所 。 本文件主要起草人 ：郑玉红、逯岩、韩福贵、芦治国、李骏豪、马玉磊、付娇娇。 ⅢDB32/T 4922—2024 彩色马蹄莲组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了彩色马蹄莲组培快繁的无菌系的建立 、培养、炼苗及移栽 、移栽后管理和一年生仔球的 培养等。 本文件适用于采用组织培养的方式进行彩色马蹄莲的繁殖 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB 5084　农田灌溉水质标准 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 无菌系 aseptic line 在无菌条件下 ，对外植体消毒灭菌后 ，形成的无菌群体 。 3.2 无菌仔球 aseptic tuberlets 通过组织培养的方法获得无菌小块茎 。 3.3 一年生仔球 one⁃year⁃old tubers 组培苗移栽后 ，经过一个生长季的培养发育形成的块茎 。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 IBA：吲哚丁酸 （3⁃Indole butyric acid ） MS：一种组织培养常用的基本培养基 [Murashigeand Skoog （1962）] NAA：α⁃萘乙酸（α⁃Naphthyleneacetic acid ） 6⁃BA：6⁃苄基腺嘌呤 （6⁃Benzylaminopurine ） 5 无菌系的建立 5.1 外植体获取 选取直径 2.5 cm~ 4.0 cm的健康的彩色马蹄莲块茎 ，用800倍~1 000倍广谱性杀菌剂水溶液浸泡 1DB32/T 4922—2024 15 min后，浅埋于经高压灭菌的湿润细沙中 ，在光照度 3 000 lx、光照时间 12 h/d、 （25±1)℃的条件下预 培养 7 d~10 d后，选取芽长约 1 cm的块茎，作为外植体 。 5.2 外植体的消毒 用软毛刷将块茎刷洗干净 ，避免损伤顶芽 ，将其切成长宽均约为 1.5 cm的带芽小块 ，放入含 1%液 体洗涤剂的溶液中振荡洗涤 20 min~ 30 min，之后流水冲洗 40 min~ 60 min，转入超净工作台 ，75%酒精 消毒 30 s~45 s后，无菌水冲洗 2次~3次，再用有效氯含量 2%~ 3%的次氯酸钠溶液消毒 25 min~ 35 min，无菌水冲洗 4次~5次，无菌吸水纸吸干表面的水分 。 5.3 不定芽的诱导 将消毒好的彩色马蹄莲外植体切成大小约 l cm3的带芽小块 ，接种到不定芽诱导培养基上 ，培养基配 方和培养条件按附录 A执行，直至外植体萌发出不定芽 。 6 培养 6.1 初代培养 将生长至 4.0 cm~ 6.0 cm的不定芽连同部分块茎一起切下 ，转接到不定芽增殖培养基中进行增殖培 养，培养基配方和培养条件按附录 A执行，直至诱导出块状丛生芽 。 6.2 继代培养 将块状丛生芽切成约 1.0 cm2小块，接种到壮芽培养基上 ，进行壮芽培养 ，培养基配方和培养条件按 附录 A执行，培养周期 60 d~80 d，直至丛生芽长成可以分切成单株的小苗 。其中，在第 30~35天，采用 同样的配方进行继代培养 。在第 60 d~65 d，将分切成单株的小苗接种到壮苗培养基中进行壮苗培养 ， 培养基配方和培养条件按附录 A执行，直至长成块茎直径约 0.5 cm小苗。 6.3 无菌仔球的培养 将块茎约 0.5 cm小苗保留 1.0 cm~ 2 cm叶柄，进行瓶内结球培养 ，培养基配方和培养条件按附录 A 执行，培养周期 30 d~40 d，直至每株小苗均膨大出直径约 0.8 cm的仔球。 6.4 生根培养 将无菌仔球保留 1.0 cm~ 1.5 cm叶柄，进行生根培养 ，培养基配方和培养条件按附录 A执行，直至 每株苗均长成高度 2.0 cm~ 3.0 cm、不定根 3~5条组培苗 。 7 炼苗及移栽 7.1 环境条件 炼苗和移栽均宜在春季 3月—4月或秋季 9月—10月进行。若其他季节进行 ，需在温度 18 ℃~ 25 ℃，相对湿度 60%~ 80%的温室中进行 。 7.2 炼苗 在组织培养的缓冲间将组培瓶盖拧松 ，放置 2 d~3 d；之后打开瓶盖 ，再放置 2 d~3 d。 2DB32/T 4922—2024 7.3 移栽基质 采用泥炭土 ：珍珠岩＝ 2∶1时，可适量加入蛭石 。第一次使用的基质无需消毒 ，重复使用基质应消毒 后使用，基质消毒可采用物理消毒法或化学消毒法 。具体的操作方法见附录 B。 7.4 移栽 用镊子将完成炼苗的组培苗从瓶中取出 ，洗净根部的培养基 ，用800倍~1 000倍多菌灵浸泡 8 min~ 10 min，移栽到 50孔、孔径 4.5 c