DB32/T 4644.4—2025 2025 ‑02‑21发布 2025 ‑03‑21实施 江苏省市场监督管理局 中 国 标 准 出 版 社　发　 布　 　出　 版　ICS 03.080 CCS C 00 从业人员健康检查　第 4部分： 伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱 弧菌、志贺氏菌和痢疾阿米巴检验方法 Health examination of employees — Part 4:Detection methods of Salmonella typhimurium ，Salmonella paratyphi ，Vibrio cholerae ，Shigella and Entamoeba histolytica江 苏 省 地 方 标 准 Ⅰ目　　次 前言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ 引言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅳ 1　范围………………………………………………………………………………………………………… 1 2　规范性引用文件 …………………………………………………………………………………………… 1 3　术语和定义 ………………………………………………………………………………………………… 1 4　缩略语 ……………………………………………………………………………………………………… 1 5　方法原理 …………………………………………………………………………………………………… 2 6　设备与材料 ………………………………………………………………………………………………… 2 7　培养基和试剂 ……………………………………………………………………………………………… 3 8　检验程序 …………………………………………………………………………………………………… 4 9　操作步骤 …………………………………………………………………………………………………… 4 10　生物安全 …………………………………………………………………………………………………… 8 附录 A（资料性）　培养基和试剂 ……………………………………………………………………………… 9 附录 B（规范性）　实时荧光 PCR检测反应体系及注意事项 ……………………………………………… 19DB32/T 4644.4—2025前　　言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 本文件是 DB32/T 4644《从业人员健康检查 》的第 4 部分。DB32/T 4644已经发布了以下部分 ： ——第1部分：检查机构管理规范 ； ——第2部分：健康检查技术规范 ； ——第3部分：质量控制规范 ； ——第4部分：伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱弧菌 、志贺氏菌和痢疾阿米巴检验方法 ； ——第5部分：信息系统基本数据集 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江苏省卫生健康委员会提出并组织实施 。 本文件由江苏省卫生健康标准化技术委员会归口 。 本文件起草单位 ：江苏省疾病预防控制中心 、南京市疾病预防控制中心 、徐州市疾病预防控制中心 、 深圳市职业病防治院 、赤峰众康生物科技有限公司 。 本文件主要起草人 ：霍翔、乔昕、王燕梅、马恺、朱宝立、王雨潇、李晔、徐光、韩磊、李亚波、郭宝福、 苗升浩。 ⅢDB32/T 4644.4—2025引　　言 从业人员健康检查是根据 《中华人民共和国传染病防治法 》 《中华人民共和国食品安全法 》 《中华人民 共和国药品管理法 》 《公共场所卫生管理条例 》 《生活饮用水卫生监督管理办法 》 《化妆品卫生管理条例 》等 法律法规所进行的从业前 、从业期间的健康检查 。 DB32/T 4644《从业人员健康检查 》分为以下 5个部分： ——第1部分：检查机构管理规范 ； ——第2部分：健康检查技术规范 ； ——第3部分：质量控制规范 ； ——第4部分：伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱弧菌 、志贺氏菌和痢疾阿米巴检验方法 ； ——第5部分：信息系统基本数据集 。 DB32/T 4644的制定是对从业人员健康检查工作相关国家标准 、行业标准的有力补充 ，对贯彻落实 《 “健康中国 2030”规划纲要 》 、推进健康中国建设 、提高人民健康水平 、保障公众健康和公共卫生安全具 有重要意义 。 ⅣDB32/T 4644.4—20251DB32/T 4644.4—2025 从业人员健康检查　第 4部分： 伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱 弧菌、志贺氏菌和痢疾阿米巴检验方法 1　范围 本文件描述了从业人员健康检查粪便标本 （肛拭子）中伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱弧菌 、志 贺氏菌和痢疾阿米巴的检验方法 。 本文件适用于公共场所从业人员 、食品生产和加工人员 、食品流通和餐饮服务人员 、饮用水生产 、经 营人员健康检查项目中粪便标本 （肛拭子）的伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱弧菌 、志贺氏菌和痢疾 阿米巴的检验 ，医疗卫生用品 、化妆品等相关行业从业人员的健康检查可参照执行 。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB 4789 .4　食品安全国家标准　食品微生物学检验　沙门氏菌检验 GB 19489　实验室　生物安全通用要求 WS 280　伤寒和副伤寒诊断标准 WS 287　细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准 WS 289　霍乱诊断标准 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 实时荧光 PCR　real‑time PCR 实时荧光聚合酶链式反应 。 3.2 Ct值　 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数 。 4　缩略语 BS：亚硫酸铋琼脂 （Bismuth Sulfite Agar ） CY5：磺酸基 ‑CY 5羧酸（Cyanine 5） DNA：脱氧核糖核酸 （Deoxyribonucleic Acid ） FAM：6‑羧基荧光素 （6‑carboxyfluorescein ）2DB32/T 4644.4—2025 LDC：赖氨酸脱羧酶 （Lysine Decarboxylase ） MAC：麦康凯琼脂 （MacConkey Agar ） NB：营养肉汤 （Nutrient Broth ） NP‑40：乙基苯基聚乙二醇 （Nonidet P‑ 40） Taq 酶：Taq DNA 聚合酶（Taq DNA polymerase ） TCBS：硫代硫酸盐 ‑柠檬酸盐 ‑胆盐 ‑蔗糖琼脂 （TCBS Agar ） TSI：三糖铁琼脂 （Triple Sugar Iron Agar ） UNG 酶：尿嘧啶 DNA糖基酶（Uracil DNA glycosylase ） VIC：琥珀酰亚胺酯 （Fluorescein Amidite ） XLD：木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 （Xylose‑Lysine Desoxycholate Agar ） 5　方法原理 5.1　筛查试验 5.1.1　依据核酸体外扩增基本原理 ，针对伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱弧菌 、志贺氏菌和痢疾阿 米巴特异靶基因序列设计引物和荧光标记探针 ，在实时荧光 PCR反应过程中 ，当荧光信号达到并超过所 设定的阈值时 ，利用荧光信号强度与 PCR产物量的正相关关系 ，即可对实时荧光 PCR结果进行分析和 判定。 5.1.2　对标本的模板 DNA进行实时荧光 PCR扩增，根据其 Ct值及扩增曲线进行标本结果报告 ，当实时荧光 PCR结果呈 阴性时直接报告阴性结果 ；当实时荧光 PCR结果呈阳性时 ，进一步对阳性标本做确证试验 。从而实现对 从业人员健康检查粪便标本 （肛拭子）中的伤寒沙门氏菌 、副伤寒沙门氏菌 、霍乱弧菌 、志贺氏菌和痢疾阿 米巴的快速筛查 。 5.2　确证试验 通过增菌 、分离、生化和血清学鉴定等方法 ，从实时荧光 PCR阳性标本中分离得到目标病原体 。结 果为阳性时报告阳性 （检出） ，结果为阴性时报告阴性 （未检出） 。 6　设备与材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外 ，包括但不限于以下设备和材料 。 6.1　Ⅱ级生物安全柜 。 6.2　冰箱：2 ℃~ 8 ℃和-20 ℃。 6.3　恒温培养箱 ：36 ℃± 1 ℃、37 ℃± 1 ℃、42 ℃± 1 ℃。 6.4　电子天平 ：分度值为 0.1 g 和0.01 g。 6.5　离心机 ：离心力 ≥12 000×g。 6.6　pH计或 pH比色管或精密 pH试纸。 6.7　涡旋混匀器 。 6.8　恒温金属浴 /水浴锅：25 ℃~ 100 ℃。 6.9　实时荧光 PCR仪。3DB32/T 4644.4—2025 6.10　全自动微生物生化鉴定系统 。 6.11　微生物飞行质谱鉴定系统 。 6.12　无菌锥形瓶 ：容量 500 mL、250 mL。 6.13　无菌试管 ：10 mm× 75 mm、15 mm× 150 mm或其他合适规格 。 6.14　无菌小玻管 ：3 mm× 50 mm。 6.15　无菌培养皿 ：直径 90 mm。 6.16　无菌吸管 ：1 mL（具0.01 mL刻度） 、10 mL