ICS 65.020.20 CCS B 30/39 2310 牡丹江市 地方标准 DB 2310/T 121—2024 食用菌种质资源维护管理技术规程 2024 - 01 - 31发布 2024 - 03 - 02实施 牡丹江市市场监督管理局 发布 DB 2310/T 121 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省农业科学院牡丹江分院和黑龙江华腾生物科技有限公司提出。 本文件起草单位：黑龙江省农业科学院牡丹江分院、黑龙江华腾生物科技有限公司 、牡丹江医科大 学、东北农业大学 。 本文件主要起草人：王延锋、盛春鸽、张秀丰、 时新瑞、 王金贺、史磊、刘姿彤、张鹏、于海洋、 赵静、王菲、闫水华、王远杭、陈文东、张勇、 时新瑞、 傅迎军。 DB 2310/T 121 —2024 1 食用菌种质资源维护管理技术规程 1 范围 本文件规定了食用菌种质资源 维护的术语与定义、 菌种 质量评价、 提纯复壮、 菌种保藏和管理方法。 本文件适用于食用菌种质资源包括栽培 品种资源、 野生菌株资源和育种中间材料等 材料的维护管理 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 组织分离 组织分离是一种用子实体的某一部分来分离菌种的方法 。 3.2 菌种活力 菌种活力包括萌发能力、定植能力和吃料能力。 3.3 待检菌种 指由委托方提供的需要 检测的菌种。 3.4 标准菌种 指由法定菌种保藏机构进行科学保藏的、菌种来源明确且种性稳定、活力正常的菌种，包括标准母 种（一级菌种）、标准原种（二级菌种）和标准栽培种（三级菌种）。 3.5 菌种退化 DB 2310/T 121 —2024 2 菌种在生长和栽培过程中，由于 自发突变 导致优良性状下降 的现象。 3.6 菌种提纯 使菌种得到进一步纯化，并保持菌种优良性状的技术措施。 3.7 菌种复壮 提高菌种活力的 技术措施。 3.8 杂菌污染 菌种受到细菌、放线菌或其他真菌污染的现象。 3.9 病毒侵染 菌丝体因病毒感染而导致代谢生长不正常的现象。 3.10 种质资源 具有特定 性状或基因，可用于育种栽培或其他生物学研究的各类 菌株及品种，包括野生种、地方品 种、品系、特殊遗传材料等。 3.11 育种中间材料 育种过程中产生的 单孢菌株、原生质体单核化菌株、杂交菌株、诱变菌株等。 4 菌种质量评价 4.1 培养基制备 根据母种特性，按 NY/T 528 的要求，配制相应的母种培养基。 4.2 接种及培养 取适宜大小的待 检母种菌丝块，接种到平板培养基中央部位 ，每个菌株 3次以上重复。于恒温培养 箱中适温培养 7 d～10 d。 4.3 菌种定性评价 观察接种块长出的菌落 形态及菌丝体长势，并按下列方法 进行菌种质量评价： DB 2310/T 121 —2024 3 a) 优质母种：菌落呈规则圆形、菌丝粗壮、长势良好，符合本品种母种应有的特征，可用于生 产； b) 老化、退化母种：部分菌落菌丝生长不规则或分泌色素较多，可用于提纯复壮； c) 淘汰母种 ：具备下列特征之一的均应淘汰： ——接种块菌丝体停止生长或死亡； ——部分菌落出现黑褐色、青灰色、黄褐色或红色等颜色的孢子堆，或与母种菌丝体之间存在拮抗 反应； ——菌丝生长缓慢、散发出难闻的酸臭气味。 4.4 菌种活力评价 4.4.1 菌丝萌发能力 按无菌操作要求，挑取待检菌种，转接到 适宜的培养基上，置于 适宜的温度下 黑暗培养，观察其萌 发出新菌丝的能力。 4.4.2 菌丝生长速度 将活化好的菌 种接种到适宜培养基上。 3 次重复。最适温度 下培养至直径为 1.0 cm～1.5 cm后，每 隔24 h测量菌落 大小，连测3 d～5 d，计算菌丝平均生长速度。 4.5 菌种纯度评价 4.5.1 肉眼观察 在适宜光线条件下，肉眼观察装有菌种的容器中是否混有细菌、霉菌、螨虫、线虫等其它生物。 4.5.2 显微检测 用接种针挑取少许待检菌种的菌丝于载玻片上水滴中，盖上盖玻片，用 10倍或40倍物镜观察 50个视 野，检查是否有 其它生物。 4.6 生物学特性检验 4.6.1 温度 将待检菌种与标准菌种接种到 平板培养基上 ，在10 ℃～37 ℃每隔3 ℃设1梯度进行 培养，测量生 长速度。 4.6.2 pH 将待检菌种接种到不同酸碱度的平板培养基上，置于适宜的温度下培养。 在pH 4～11范围内每隔 1 个pH设1梯度进行培养，测量菌丝生长速度， 获得菌丝生长范围和最适 pH。 4.7 农艺性状检测 4.7.1菌种萌发定植能力检测 将待检菌 种转接到母种、原种和栽培种培养基 (料)中，适宜温度培养，肉眼观察菌丝的萌发定植 情况。 4.7.2 产量和生物学效率 DB 2310/T 121 —2024 4 待检菌种和标准菌种进行栽培试验，采用随机区组试验设计，统计产量，计算生物学效率，比较待 检菌种和标准菌种的差异。 4.7.3 子实体形态观察 栽培过程中，观察记录子实体形态。 4.7.4 结菇转潮能力 栽培过程中 ，记录出菇时间、采收时间和转潮时间。 5 菌种提纯复壮 方法 5.1 子实体组织分离法 无菌条件下，对子实体进行组织分离。选取形态具有该品种典型特征 ，六、七分成熟 ，无病斑、无 虫蛀、无污损的子实体，用解剖刀在菌盖和菌柄中部纵切，挑取交接处的小块菌肉，适宜条件下，供制 备一级菌种用。 5.2 菌丝尖端分离法 无菌操作条件下，在双目放大镜下挑取菌落上菌丝尖端约 5 mm 长度的单根菌丝，转至 适宜培养基 中培养，供制备一级菌种。 6 菌种保藏 6.1 保藏形式 以纯培养的菌丝体为保藏形式，即以母种形式保藏，母种制备应符合 NY/T 528和NY/T 1742规定的 要求。 6.2 保藏方法 6.2.1 短期保藏 采用斜面保藏法 ， 保藏温度为 2 ℃～4 ℃， 一些高温种类， 如草菇、 竹荪、 毛木耳等保藏温度 13 ℃～ 16 ℃。2～6个月转接一次。 6.2.2 中期保藏 6.2.2.1 天然培养基保藏法 天然培养基保藏法是以木屑培养基、粪草培养基或谷粒培养基保藏菌种的方法。木屑培养基和粪草 培养基可分别保藏木腐类食用菌和草腐类食用菌，谷粒培养基几乎可以保存所有种类食用菌。 保藏温度 为2 ℃～4 ℃，一般可保藏 1～2年。 6.2.2.2 矿物油保藏法 矿物油保藏法是用矿物油覆盖斜面培养物 ，降低细胞的生长代谢活动 的保藏方法。保藏温度为 15 ℃～25 ℃，一般可保藏 3～5年。 DB 2310/T 121 —2024 5 6.2.2.3 无菌水保藏法 无菌水保藏法是用蒸馏水、缓冲液或其他不含有机营养物质的盐类溶液保存 菌种的方法。保藏温度 为2 ℃～4 ℃，一般可保藏 1～2年。 6.2.3 长期保藏 液氮保藏法是将菌种在液氮罐中长期保存的保藏方法。 保藏温度 为-196 ℃，一般 可保藏5～10年。 7 菌种管理 7.1管理制度 7.1.1 专人负责制 由专人负责种质资源管理工作，包括种质保存、信息记录、资料整理归档、档案审查等。 7.1.2 信息管理 种质资源保存信息要及时更新 、收集、记录、分析和整理 ，装订成册，归档保存 ，建立系统的技术 档案。 7.1.3 档案资料 所有档案资料应同时保存纸质文档和电子文档，纸质文档内容应清晰明确，电子文档应有备份。 7.2 建立保种目录 在电脑中创建命名为“食用菌种质资源保种目录”的 Excel文件，用表格记录保藏菌株的各项背景 信息，并定期备份。具体信息包括： a) 编号：对每个保藏菌株进行系统编号；编号前面英文字母表示种类的拉丁文缩写：后面 4位阿 拉伯数字表示保藏菌株序号 ； b) 原编号：在保种目录中记录菌株提供方提供的原始菌名菌号 ； c) 来源：记录菌株提供方的单位名称或个人姓名及其所在地。若提供方能提供该菌株的来源地 或获得方式，在本目录中作为二级来源记录在括号内 ； d) 短期库编码：各菌株在短期库中都有一个编码，由 5个数字组成，标明保藏的位置、第 1、2个 数字表明冷藏柜的编号；第 3个数字表示柜内有机玻璃保种架编号；第 4个数字表示架上从左 到右第几列；第 5个数字表示列中从前到后第几行 ； e) 中期库编码：与短期库编码意义相同 ； f) 长期库编码： 13个数字组成，标明冻藏的时间和保藏位置。第（ 1～4）个数字表明冻藏的年