ICS65.020.20 CCSB61 2301 黑龙江省哈尔滨市地方标准 DB2301/T212—2024 越桔组织培养技术规程 2024-12-30发布 2025-02-05实施 哈尔滨市市场监督管理局  发布DB2301/T212—2024 I目次 前言..................................................................................II 1范围.................................................................................1 2规范性引用文件.......................................................................1 3术语和定义...........................................................................1 4外植体的采集与消毒...................................................................1 4.1外植体采集.......................................................................1 4.2外植体的消毒.....................................................................1 5培养基制备...........................................................................1 5.1培养基配比.......................................................................1 5.2培养基灭菌.......................................................................2 5.3培养基保存.......................................................................2 6培养程序.............................................................................2 6.1初代培养.........................................................................2 6.2继代培养.........................................................................2 6.3生根培养.........................................................................2 7炼苗与移栽...........................................................................3 7.1炼苗.............................................................................3 7.2移栽.............................................................................3 8出圃.................................................................................3 9生产档案.............................................................................3DB2301/T212—2024 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件主要起草人：赵文博、段亚东、孙嫒丽、李靖彤、张鹍、宋鹏慧、周春薇、周双、毛俊莹、 刘争、侯帅、温智钧、梁海婷、许志伟、肖珩、吕德宝、郝淑荣、张甜甜请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由哈尔滨市农业农村局提出并 ¹é口。 本文件起草单位：黑龙江省农业科学院乡村振兴科技研究所、中国科学院东北地理与农业生态研究 所、哈尔滨市农业技术推广总站、黑龙江省林业科学院、双鸭山市宝清县龙头镇农业乡村振兴服务发展 中心、双鸭山市宝清县朝阳镇农业乡村振兴服务发展中心、伊春市农业综合服务中心。 。DB2301/T212—2024 1越桔组织培养技术规程 1范围 本文件规定了越桔（Vacciniumvitis-idaeaL.）组织培养育苗技术的外植体的采集与消毒、培养 基制备、培养程序、炼苗与移栽、出圃和生产档案等。 本文件适用于越桔的组织培养育苗。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则 LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程 NY/T1276农药安全使用规范总则 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4外植体的采集与消毒 4.1外植体采集 4月～7月份的晴天剪取叶片表面无露水、生长健壮且无病虫害的当年生嫩枝，去掉叶片并留1mm～ 2mm叶柄作为外植体。 4.2外植体的消毒 4.2.1将剪成带1个芽的外植体茎段用流水冲洗10min～20min。 4.2.2用75%酒精对双手及手腕消毒，将外植体置于已灭菌的烧杯中，先用75%酒精浸泡30s，无菌 水清洗3次，每次30s。 4.2.3再用10%次氯酸钠溶液灭菌10min，无菌水清洗3次，每次30s。 4.2.4用无菌滤纸吸干外植体表面的水分备用。 4.2.5药剂应符合GB/T8321和NY/T1276的规定。 5培养基制备 5.1培养基配比 5.1.1基础培养基 基础培养基为WPM，基础培养基配制方法按LY/T1882中4.2.1规定执行。DB2301/T212—2024 25.1.2初代培养基 初代培养基按WPM1L+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋琼脂7g进行配置，pH值5.2～5.4。 5.1.3继代培养基 继代培养基按WPM1L+IBA0.1mg～0.2mg+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋琼脂7g进行配置， pH值5.2～5.4。 5.1.4生根培养基 生根培养基按WPM1L+IBA3.0mg～4.0mg＋NAA0.4mg+蔗糖60g＋琼脂14g进行配置，pH值 5.2～5.4。 5.2培养基灭菌 培养基在压力0.105MPa、温度121℃的条件下灭菌20min。灭菌物应不超过灭菌锅容积的3/4。 5.3培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，应避免阳光直射，在18℃～22℃条件下存放不宜超过7d。 6培养程序 6.1初代培养 6.1.1接种 在超净工作台上将已消毒的外植体茎段垂直插入初代培养基，每个培养瓶接种3个～5个茎段，均 匀分布，接种后将培养瓶瓶口在酒精灯火焰上灼烧1s～2s，迅速盖好瓶盖，放入培养室培养。 6.1.2培养条件 白天25℃±2℃，夜间不低于15℃。黑暗培养7d后，转入光照培养。相对空气湿度70%～80%， 光照强度为2000Lux～3000Lux，光照时间为12h/d～16h/d。待嫩芽长出后，进行继代培养。 6.2继代培养 6.2.1接种 将初代培养后长出的嫩茎剪成1cm左右的茎段，插入新鲜的增殖培养基中进行继代培养。 6.2.2培养条件 白天25℃±2℃，夜间不低于15℃。相对空气湿度70%～80%，光照强度为2000Lux～3000Lux， 光照时间为12h/d～16h/d。 6.3生根培养 6.3.1接种 选取由继代培养获得的生长健壮、高度大于2cm的无菌不定芽接入生根培养基上进行生根培养。 6.3.2培养条件DB2301/T212—2024 3继续按6.2.2的要求培养。待生根后2周～3周，选取根长1.5cm～2.5cm、须根不少于3条的瓶苗， 将其放置温室进行炼苗。 7炼苗与移栽 7.1炼苗 先将培养瓶置于温度在20℃～30℃的温室进行闭瓶炼苗3d，再打开培养瓶盖炼苗2d，炼苗期间 避免强光直射和高温灼伤瓶苗。 7.2移栽 7.2.1基质配置 以草炭土、蛭石配比为1:1混合作为移栽基质，可加入多菌灵消毒基质，备用。药剂应符合GB/T8321 和NY/T1276的规定。 7.2.2移栽方法 7.2.2.1将组培苗从瓶中取出，用流水冲洗掉粘附于根部的培养基，将瓶苗移入准备好的穴盘或营养 钵中，扶正，使根系尽量舒展，用基质将根埋好并压紧。 7.2.2.2移栽后，在遮荫且通风条件下栽培，每天向叶面喷水，1周后，撤掉遮荫，并注意通风。 8出圃 苗龄达2年后，苗高20cm以上，有3个～5个分枝，叶浓绿，具有完整而发达的根系，无检疫性 病虫害即可出圃。 9生产