SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4783—2017 出口食品中低聚三果糖、低聚四果糖、 低聚五果糖的测定高效液相色谱法 Determination of kestose,nistose and fructofuranosylnystose in export food- High performance liquid chromatography method 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4783—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、国际检验检疫标准与技术法规研究中 心、中华人民共和国天津出人境检验检疫局、华南农业大学 本标准主要起草人：韦晓群、郑璇、宋志刚、娄婷婷、杜斯航、吴志航、张玉文、黄维龙、陈文锐、刘青、 易蓉、王志元、梁瑞婷、卢珍珠。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4783—2017 出口食品中低聚三果糖、低聚四果糖、 低聚五果糖的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了婴幼儿配方米粉、米乳粉以及奶粉中低聚蔗果三糖、四糖、五糖等3种低聚果糖的测 定方法。 本标准适用于婴幼儿配方米粉、米乳粉以及奶粉中低聚煎果三糖、四糖、五糖的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 应用既定PH的乙酸水和甲醇溶液沉淀去除蛋白和淀粉后，样品中的低聚果糖再用β-半乳糖酶处 理去除半乳糖和乳糖，过膜上机测试，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水采用GB/T6682规定的二级水。 4.1甲醇(CH,O)，分析纯。 乙酸（CH,O），分析纯 4.3 乙腈（C,H.N），色谱纯。 4.4 磷酸氢二钠（NazHPO,），分析纯。 4.5林 柠檬酸（CH.O,），分析纯。 4.6低聚果糖标准品：蔗果三糖（CisH32O16，CASNo.：470-69-9），蔗果四糖（C2H2O21，CASNo.： 13133-07-8），蔗果五糖（C3oHs2O26，CASNo.：59432-60-9)3种标准品，纯度≥99%。 4.7蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖混合标准储备液溶液：分别称取蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的标 准品2.5g，一起用水溶解并定容于50mL容量瓶，配成浓度分别为50000mg/mL的蔗果三糖、蔗果四 糖、蔗果五糖混合标准溶液，2℃～4℃保存，有效期为3个月。 5.0mL，用水定容到25mL，配成浓度分别为10000mg/mL的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖混合标准 溶液。 4.9蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖标准混合工作溶液：分别移取10000mg/mL蔗果三糖、四糖、五糖 标准中间溶液（4.8）5mL、2.5mL、1mL、0.5mL、0.1mL，用纯水定容至10mL配成5000mg/mL、 2500mg/mL、1000mg/mL、500mg/mL、100mg/mL的标准工作溶液，4℃保存，可使用3个月。 4.10pH为5.0的1mol/L磷酸氢二钠缓冲液：先称取1.92g柠檬酸溶解于10mL纯水中，制得 1 SN/T 4783—2017 1mol/L的柠檬酸溶液10mL；称取0.71g磷酸氢二钠溶解与48mL纯水中，然后应用1mol/L的柠檬 酸溶液调节磷酸氢二钠溶液pH至5.0，最后定容至50mL。 4.1120U/mLβ-半乳糖苷酶溶液：称取103U/mg的β-半乳糖苷酶固体2mg，溶解在10.3mL的缓 冲溶液（4.10）中，2℃～4℃保存，可使用1个月。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪，配蒸发光散射检测器和柱恒温系统。 5.2流动相真空抽滤脱气装置及0.2μm或0.45μm微孔膜。 5.3色谱柱：改性酰胺柱或者氨基柱，5μm，250mm×4.6mm（内径）或性能类似的分析柱 5.4分析天平：感量为0.01mg和0.001g各一台。 5.5离心机：转速>10000r/min。 5.6涡旋混合器。 5.7旋转蒸发器。 5.8恒温振荡水槽。 6测定步骤 6.1提取 6.1.1纯奶粉样品 称取0.25g样品于50mL离心管中，加入4.73mL水，加入0.07mL醋酸溶液调节pH至4~5之 间，溶解振荡5min，10000r/min离心5min，用定量滤纸过滤，加人0.2mL半乳糖苷酶，于45℃下 （是在恒温振荡水槽中）酶解3h，酶解后取1mL过0.22μm滤膜于进样瓶中，供上机分析。 6.1.2纯淀粉食品 称取0.25g样品于50mL离心管中，加入4.73mL水，加入0.07mL醋酸溶液调节pH至4~5之 间，然后加人20mL甲醇振荡5min静置5min，用定量滤纸过滤，旋干滤液后，用水定容至4.8mL，加 入0.2mL半乳糖苷酶，于45℃下（是在恒温振荡水槽中）酶解3h，酶解后取1ml过0.22μm滤膜于 进样瓶中，供上机分析。 6.1.3含奶粉和淀粉食品 称取0.25g样品于50mL离心管中，加人4.93mL水加人0.07mL醋酸溶液调节pH至4~5之 间，然后加入20mL甲醇，振荡5min后10000r/min，用定量滤纸过滤，滤液旋蒸至于，用水定容至 4.8mL,加人0.2mL半乳糖苷酶，于45℃下（是在恒温振荡水槽中）酶解3h,酶解后取1mL过0.22μm 滤膜于进样瓶中，供上机分析。 6.2测定 6.2.1 液相色谱参考条件 由于测试结果取决于所用仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数己被证明对 测试是合适的： a）色谱柱：酰胺柱或者氨基柱，5μm,250mm×4.6mm（内径)或性能类似的分析柱。 b)林 柱温：30℃。 2