ICS 65.020.30 CCS B 40 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 4046—2025 利用葡萄糖钳夹技术检测围产期母羊 胰岛素敏感性的操作规程 The code of practice on detecting insulin sensitivity in perinatal ewes using glucose clamp technology 2025-06-06发布 2025-07-06实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 4046 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、鄂尔多斯市农畜产品质量安全中心、乌兰察布市凉 城县永兴镇人民政府、鄂尔多斯市农牧业科学研究院。 本文件主要起草人：孙海洲、金鹿、张春华、李胜利、张崇志、付乐、李文婷、陈攀亮、赵亚星、 杨鼎、宝华、义拉勒特、孙余卓、魏晓玲、娜美日嘎。 DB15/T 4046 —2025 1 利用葡萄糖钳夹技术检测围产期母羊 胰岛素敏感性的操作 规程 1 范围 本文件规定了检测围产期母羊胰岛素敏感性方法使用的试剂、仪器、设备和测定步骤。 本文件适用于围产期母羊胰岛素敏感性的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 YY/T 1200 葡萄糖测定试剂盒 (酶法) YY/T 1250 胰岛素定量标记免疫分析试剂盒 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 胰岛素敏感性 insulin sensitivity 脂肪细胞、肌肉 细胞和肝细胞对正常浓度的胰岛素产生反应不足的现象，亦即这些细胞需要更高的 胰岛素浓度才能对胰岛素产生反应。 胰岛素-血糖钳夹技术 hyperinsulinemic euglycemic clamp test 一种检测胰岛素敏感性的方法，即给予动物一定量的胰岛素后，将葡萄糖用某种速率滴注入血液， 部分葡萄糖能被利用，但血糖水平可维持稳态。 4 试剂 试剂 4.1.1 牛源胰岛素（纯度≥ 27%）。 4.1.2 牛血清白蛋白（ BSA，纯度≥ 98%）。 4.1.3 生理盐水：称取 0.9 g氯化钠，溶解在少量蒸馏水中， 稀释溶解后定容 到100 mL。 4.1.4 10%葡萄糖溶液：称取 10.0 g葡萄糖，溶解在少量蒸馏水中，稀释溶解后定容到 100 mL。 4.1.5 50%葡萄糖溶液：称取 50.0 g葡萄糖，溶解在少量蒸馏水中，稀释溶解后定容到 100 mL。 DB15/T 4046 —2025 2 滴注液配制 4.2.1 10%糖盐溶液：称取 12.5 g葡萄糖，溶解在 125 mL生理盐水中。 4.2.2 葡萄糖滴注液： 125 mL 10% 糖盐溶液与 75 mL 50% 葡萄糖溶液混匀，用 0.22 μm的一次性过 滤器过滤除菌，配制 成葡萄糖滴注液待用。 4.2.3 胰岛素滴注液： 称取3 mg胰岛素与 0.03 g BSA 溶于3 mL无菌水中，充分混合后，加入 150 μ L 6N盐酸制备为冻存液。称取 0.23 g BSA 、量取2.88 mL冻存液溶解于 237.12 mL 生理盐水中，混匀 后用0.22 μm的一次性过滤器过滤除菌，配制成胰岛素滴注液待用。 5 仪器和设备 恒流泵（型号： HL-2，输出流量： 2×（1 mL/h～600 mL/h ））。 注射泵（型号： W0109-1B，流量范围： 5.297 μL/min～52.97 mL/min（60 mL注射器））。 快速测血糖仪（室温～ 30 ℃）。 0.22 μm的一次性过滤器。 输液管。 一次性静脉留置针。 6 测定步骤 母羊滴注前处理 滴注前一周对母羊进行 3 d适应性训练，在代谢笼中饲养，自由饮水，每隔两小时饲喂一次，为避 免采食量变化对机体血糖水平的影响，需要对动物进行定量限饲，饲喂量为前一日饲喂量的 80%。 安装静脉留置针 滴注前一天，在母羊的一侧颈静脉安装留置针，连接三通管，一端连接注射胰岛素，一端连接葡萄 糖输注泵，输注滴注液。同时，在动物的另一侧颈静脉安装留置针用于采集血样。 胰岛素与葡萄糖的滴注 200 mL胰岛素滴注液使用注射泵调节， 保证胰岛素滴注液以 10 mL/h的速度恒流灌注入颈静脉中。 100 mL葡萄糖滴注液使用恒流泵调节，灌注速率随机体血糖水平的变化调节，使机体血糖水平保持稳 定，此时葡萄糖滴注液的滴注速率为 8 mL/h，此滴注过程大约需要 10 h～12 h。 钳夹处理期血液中血糖浓度的测定 基准期： 灌注前一天， 分别于 07:30、08:30、13:30、14:30、19:30和20:30六个时间点采集血样， 用快速测血糖仪测定血糖浓度，确定基础血糖在 1.4 mmol/L ～4.4 mmol/L 范围内。 灌注期：葡萄糖，胰岛素灌注后每隔 10 min测定一次血糖，并根据血糖浓度调节目标血糖水平， 使其稳定在基础血糖 1.4 mmol/L ～4.4 mmol/L 范围内。待血糖稳定后，每隔 1 h采一次血样测定血糖 并留样用于测定胰岛素浓度。 完成期：钳夹结束时，首先停止泵入胰岛素，预防低血糖发生，然后逐渐减少葡萄糖输入速度。 血样的处理 采集的血样中加入肝素钠抗凝，低速台式离心机 3000 rpm ，离心15 min，取血浆以分析胰岛素和DB15/T 4046 —2025 3 血糖浓度。 血样的测定指标与方法 血浆胰岛素浓度按照 YY/T 1250 进行测定。 血浆葡萄糖浓度按照 YY/T 1200 进行测定。