ICS 65.020.01 CCS B 61 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3796—2024 葡萄组培脱毒 育苗技术规程 Technical code for tissue culture and detoxification of grape seedling 2024-12-18发布 2025-01-18实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3796 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由内蒙古农业大学提出。 本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（ SAM/TC 25 ）归口。 本文件起草单位： 内蒙古农业大学、 内蒙古电子信息职业技术学院、 内蒙古量蕴农业发展有限公司、 内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古嘉仕农业科技发展有限公司、呼和浩特市果丰种养殖专业合 作社。 本文件主要起草人：樊丽、王旭、李小燕、刘艳、谢岷、杨波、陈晓旭、李家锋、肖存海、陆明、 张敏、李正男、孙平平、张磊、聂素平、刘刚、董莉洁。 DB15/T 3796 —2024 1 葡萄组培脱毒育苗技术 规程 1 范围 本文件规定了葡萄组培育苗过程中的仪器准备、外植体选择、热处理、外植体消毒、茎尖剥离、初 代培养、增殖培养、生根培养、病毒检测、炼苗移栽、苗木质量控制等内容。 本文件适用于葡萄组织培养脱毒育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 15981 消毒器械灭菌效果评价方法 NY 469 葡萄苗木 NY/T 2377 葡萄病毒检测技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 外植体 explant 植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。 组培苗 tissue culture seedling 利用外植体，在无菌和适宜的人工条件下，培育的完整植株。 脱毒苗 virus-free seedling 不带有葡萄上常见的或已经鉴定的病毒种类的葡萄组培苗。 4 仪器准备 实验中所用的超净工作台、镊子、解剖刀、解剖针、培养皿、滤纸、培养基等器材均需灭菌。 5 外植体选择 DB15/T 3796 —2024 2 选择品种纯正、生 长势强、无病虫害的葡萄母株，采集母株上带有腋芽的嫩茎 3 cm～5 cm茎段作为 外植体，采样最佳时间为上午 10时以前。 6 热处理 采集的外植体插在装有营养液的容器中，先置于 37 ℃条件下培养 14 h/d，然后25 ℃条件下培养 10 h/d，培养20 d～30 d。 7 外植体消毒 将外植体去除叶片 和叶柄，剪成长度 3 cm左右的茎段。茎段用自来水冲洗 15 min后，转入超净工作 台，用75%酒精浸泡 30 s，再用无菌水冲洗 3遍，然后用 10%次氯酸钠溶液或 0.1%升汞溶液浸泡 8 min～10 min（期间不断摇晃瓶子，使消毒液和茎段充分接触），最后用无菌蒸馏水冲洗 5遍。消毒所用器械的灭 菌按照GB/T 15981 的规定。 8 茎尖剥离 将灭菌后的茎段 在灭菌的滤纸上吸干水分， 置于解剖镜下， 进行茎尖剥离。 剥离出的茎尖大小为 0.3 mm～0.5 mm。将剥离的茎尖快速接种于灭菌的初 代培养基上。 9 初代培养 初代培养基 基本培养 基为MS培养基，添加 1.0 mg/L 6 -苄氨基嘌呤， 0.05 mg/L α-萘乙酸， 20 g/L～30 g/L蔗 糖，5 g/L～7 g/L琼脂粉， pH调至5.5～6.0。 培养条件 接种瓶苗置于温度 20 ℃～25 ℃，湿度 60%～80%，光照强度 1500 lx～2000 lx，8 h光照，16 h黑 暗。 10 增殖培养 培养时间 在培养50 d～60 d后，取高度为 1 cm左右的葡萄新 芽，将其转接到增殖培养基上。 增殖培养基 基本培养基 为MS培养基，添加 1.0 mg/L 6 -苄氨基嘌呤， 0.1 mg/L α-萘乙酸， 2.0 mg/L PVP ，20 g/L～30 g/L蔗糖，5 g/L～7 g/L琼脂粉， pH调至5.5～6.0。 培养条件 接种瓶苗置于温度 20 ℃～25 ℃，湿度 60%～80%，光照强度 2000 lx～2500 lx，12 h光照，12 h黑 暗。 DB15/T 3796 —2024 3 11 生根培养 培养时间 当继代培养的 组培苗高约 2 cm时，将其转接 到生根培养基上。 生根培养基 基本培养基 为1/2 MS培养基，添加 0.2 mg/L α-萘乙酸， 0.2 g/L 活性炭， 20 g/L～30 g/L蔗糖， 5 g/L～7 g/L琼脂粉， pH调至5.5～6.0。 培养条件 接种瓶苗 置于温度 20 ℃～25 ℃，湿度 60%～80%，光照强度 2000 lx～2500 lx，16 h光照，8 h黑 暗。 12 病毒检测 经过脱毒处理的 葡萄组培苗长至 8 cm～10 cm时，对其进行病毒检测，检测病毒种类及检测方法按 照NY/T 2377的规定。检测结果为阴性时，确定该植株 为葡萄组培脱毒苗。 13 炼苗移栽 炼苗 当根的长度 达到约1.0 cm时，将生根良好的试管苗转移到室温条件下放置 5 d～7 d，然后打开瓶盖 继续放置 2 d～4 d。 移栽 移栽时，将组培苗根部附着的培养基清洗干净，移入装有基质的穴盘中。移栽选择晴天的傍晚或阴 天进行。 水肥管理 移栽7 d内，保证土壤持水量在 70%～90%，每天喷雾浇水 2次。7 d～14 d，保证土壤持水量在 50%～ 70%。之后的水肥管理按葡萄正常管理进行 。 14 苗木质量控制 苗木质量标准、检测方法、出圃、包装等按 照NY 469执行。