ICS 65.020.20 CCS B 05 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3532—2024 甜菜单胚雄性不 育系及保持系鉴定规程 Code of practice for identifying of monogerm male sterile line and maintainer line in sugar beet 2024-06-28发布 2024-07-28实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3532 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自 治区农业标准化技术委员会 (SAM/TC 20) 归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、托克托县古城镇综合保障和技术推广中心。 本文件主要起草人：付增娟、张自强、鄂圆圆、赵尚敏、王良、张惠忠、张辉、韩平安、张必周、 李晓东、郑文哲、张立华、吕艳霞、肖强、周晓华、孙梦媛、索宁宁、张国雄。 DB15/T 3532 —2024 1 甜菜单胚雄性不育系及保持系表型鉴定 规程 1 范围 本文件规定了甜菜单胚雄性不育系及保持系鉴定的 鉴定圃要求 、鉴定要求、鉴定方法与评价指标 等 技术要点。 本文件适用于二倍体甜菜单胚雄性不育系及保持系花期育性、胚数性、表型的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19176 糖用甜菜种子 DB15/T 2895 糖用甜菜单胚雄性不育杂交种生产技术规程 3 术语和定义 DB15/T 2895 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 单胚种 genetic monogerm seed 通过遗传获得的种球内只含有一个种胚的种子。 [来源:DB15/T 2895 -2023，3.1] 雄性不育系 male sterile line 雌雄同株植物中，雄蕊发育不正常，不能产生或者释放遗传上可育的花粉，但它的雌蕊发育正常， 能接受正常花粉而授精结实，并能将雄性不育性遗传给后代的植物品系。 保持系 O type line 当作为父本与不育系杂交时，能使其 F1保持雄性不育性的甜菜品系。 甜菜二倍体 diploid sugar beet 甜菜细胞核内有两组染色体称为二倍体或双倍体（ 2n=2X=18 ）。 DB15/T 3532 —2024 2 开花期 duration of flowering 鉴定群体开花种株数达到 75%的日期。 花粉败育 pollen abortion 植株花药中无花粉或产生的花粉不能正常发育而失去活力的现象。 花粉败育率 pollen abortion rate 不育花粉数占总花粉数的百分比。 镜检 microscopic examination 通过显微镜观察花粉待检标本育性的检查方式。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 TTC ：2，3，5－三苯基氯化四氮唑，一种脂溶性光敏感复合物，可作为一种 氧化还原指示剂 ，可 用来检测花粉、种子等活力 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride ) 5 鉴定圃要求 栽植环境 鉴定现场生态环境和 栽培条件应与生产条件相近，周围环境 10 km不能有其它甜菜花粉污染源。 栽植时间 甜菜母根栽植适宜条件是土壤表土解冻 25 cm或5 cm土层处平均地温达 4 ℃～5 ℃为宜。在内蒙古 中西部地区甜菜母根栽植时间一般在 3月底或4月上中旬，寒冷地区栽植时间可延迟至 4月底。 栽植株数 5.3.1 不育系 除未抽薹无效株外，待鉴定不育系株数不少于 60株。 5.3.2 保持系 除未抽薹无效株外，待鉴定保持系株数不少于 60株。 6 鉴定要求 DB15/T 3532 —2024 3 鉴定人员 从事作物遗传育种、分子育种、种子管理、种子检验等专业人员 3名以上。 鉴定时期 6.2.1 花期 在甜菜种株生长 60 d左右，甜菜种株刚要开花前进行育性、胚数性观察鉴定，盛花期进行花粉量和 种株株型鉴定。 6.2.2 种子成熟期 进行不育率、可育率、单胚率、发芽率鉴定。种子质量满足 GB 19176 要求。 7 鉴定方法与评价指标 种株表型一致性鉴定 7.1.1 现场鉴定 以鉴定种株群体为观测对象，鉴定性状包括株高、株型、叶色、结实密度等，根据主枝和侧枝的多 少确定种株株型。 单茎型：种株仅有一个明显的主枝，侧枝不发达，在主枝上生有第一次分枝，第一次分枝再生第二 次分枝。且要求单茎型种株占总抽薹种株 70%以上。 多茎型：种株具有多数健壮的侧枝，主枝不明显或没有主枝，总分枝数量多。且要求多茎型种株占 总抽薹种株 70%以上。 混合型：种株具有发育健壮的主枝和相当数量的侧枝，并有密集的第一次和第二次分枝。且要求单 茎型种株占总抽薹种株 70%以下或多茎型种株占总抽薹种株 70%以下。 7.1.2 公式结果计算 表型一致性计算按公式（ 1）。 100−= TT ZZZC ……………………………………………… (1) 式中： C——表型一致性，单位为百分比（ %）； ZT——观察样本总数，单位为株； Z——杂株数，单位为株。 计算结果精确到小数点后一位 7.1.3 评价指标 种株表型一致性 ≥90.0%。 花粉活力鉴定 7.2.1 田间取样 在花期的晴天 8:00～10:00进行花粉取样。 DB15/T 3532—2024 4 7.2.2 镜检 染色制片：每株取 2～3个花朵分别制片，把适量的成熟花粉放在载玻片之上，每个样品添加 1～2滴 0. % TTC溶液，盖上盖玻片，在 37 ℃黑暗条件下培养 15 min。 红色越深表明活性越强，不能染色的花粉为不育花粉。 镜检：制片在低倍镜下观察，每片取 5个视野，共统计 100粒，计算花粉的活力百分率。 7.2.3 评价指标 雄性不育系的花粉活力 ≤10.0%。 同型保持系的花粉活力≥ 90.0%。 花粉量鉴定 7.3.1 鉴定内容 在甜菜种株进入花期后，以整个鉴定群体种株为观测鉴定对象，采用目测的方法观察甜菜种株开花 期间雄蕊的发育情况以及当日开放的花药纵裂、 花粉散落的程度。 7.3.2 评价指标 4级花粉量评价指标见表 1。 表1 甜菜花粉量级别与花粉量评价表 花粉育性鉴定 7.4.1 育性表型鉴定 甜菜雄性不育系，雄蕊花药色浅、空瘪、花粉没有生活力，而雌蕊发育正常；保持系的花药大而饱 满，颜色发黄，花粉生活力强。 甜菜花粉育性鉴定一般按完全不育型 (W)、半不育Ⅰ型 (G)、半不育 II型(Ys)、可育型（ Yn)等四种 类型进行鉴别。 完全不育型 (W)：花药色泽为白色或绿色；花药不开裂；花粉败育，花粉败育率为 100%。 半不育Ⅰ型 (G)：花药色泽为淡黄色；花药不开裂；花粉无生活力。 半不育II型(Ys)：花药色泽为橙色；花药基本不开裂；花粉粒有花粉膜，可以看见花粉孔，虽然花 粉粒存在较多但其直径仅为正常的 2/3，无授精能力；花粉无生活力。 可育型（ Yn)：花药色泽为黄色；花药开裂；花粉粒正常；花粉生活力强。 7.4.2 公式结果计算 不育率计算按公式（ 2）。 花粉量级别 花粉量多少 花药颜色 花药状态 0级 无 白色或翠绿色 花药干瘪不开裂，无花粉散落 1级 少 淡黄色 花药开后有很少花粉散落 2级 中 黄色 花药裂开后有相当一部分花粉散落 3级 多 黄色 花药裂开后有大量成熟的花粉散落