ICS 65.020.30 CCS B 41 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3519—2024 规模化奶牛场梭菌病防制技术规范 Technical specification for control of clostridium disease in large - scale dairy farm 2024-06-28发布 2024-07-28实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3519 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古伊利实业集团股份有限公司。 本文件主要起草人：张俊杰、韩吉雨、魏小军、赵晓军、娜仁图娜拉、吴晓亮、王娜、谢跃博。 DB15/T 3519 —2024 1 规模化奶牛场梭菌病防制技术 规范 1 范围 本文件规定了规模化奶牛场 产气荚膜梭菌病、气肿疽和破伤风 的术语定义、诊断技术及防制措 施。 本文件适用于 规模化奶牛场产气荚膜梭菌病、气肿疽和破伤风的防制。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 2696 饲草青贮技术规程 玉米 NY/T 3073 家畜魏氏梭菌病诊断技术 NY/T 3445 畜禽养殖场档案规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 产气荚膜梭菌病 clostridium perfringens disease 由不同血清型的产气荚膜梭菌（又称魏氏梭菌）引发的一种急性、致死性传染病 。 气肿疽 gangraena emphysematosa 由气肿疽梭菌引起的，以肌肉丰满处发生气性肿胀为特征的一种急性、败血性传染病。 破伤风 tetanus 强直症，俗称锁口风，是指由破伤风梭菌经伤口厌氧感染后产生外毒素，侵害神经组织所引起的一 种急性、创伤性、中毒性传染病。 4 诊断技术 产气荚膜梭菌病 4.1.1 流行病学 DB15/T 3519 —2024 2 本病不同年龄的奶牛均可感染，发病青年牛多为体格强壮、膘情较好，发病成年牛多为新产牛和高 产泌乳牛。产气荚膜梭菌广泛分布于土壤和动物消化道内，一定条件下，细菌在奶牛胃肠道内快速繁殖 产生大量毒素，引起全身毒血症，发生中毒性休克、死亡。本病一年四季均可发病。 4.1.2 临床症状 本病特征是突然发病， 常在出现症状后很快死亡， 最急性型病例无任何症状倒地死亡， 死亡牛口腔、 鼻腔及阴道常流出红色泡沫样分泌物，急性型和亚急性型病牛有的发生腹泻，肛门排出含有多量粘液、 酱红色并带有异臭的粪便。 4.1.3 病理变化 本病以全身实质器官出血为主要特征，小 肠黏膜弥漫性出血，空肠最明显，肠管内充满大量气体， 肠壁外观呈暗红色；淋巴结、心、肝、脾、肾、肺等出血；脑充血、出血、水肿。 4.1.4 实验室诊断 按照NY/T 3073的规定执行。 4.1.5 诊断结果判定 4.1.5.1 符合4.1.1、4.1.2和4.1.3的，判定为疑似产气荚膜梭菌病。 4.1.5.2 符合4.1.1、4.1.2和4.1.3的，同时符合 4.1.4的，确诊为 产气荚膜梭菌病 。 气肿疽 4.2.1 流行病学 奶牛对气肿疽易感性较强，大部分病例发生在 6～24月龄。病牛为主要传染源，其排泄物、分泌物 或处理不当的尸体中的细菌污染土壤后形成芽孢，进而污染饲料和饮水 。消化道感染是主要传播途径， 外伤和吸血昆虫叮咬也可传播。该病多为散发，一年四季均可发病，以夏季和秋季发病较多。 4.2.2 临床症状 本病潜伏期一般为 3 d～5 d，病初突然精神沉郁，采食减少或废绝，体温高达 40 ℃～42 ℃。随后 奶牛肌肉丰满部位出现肿胀，皮下及肌肉组织坏死，病变处皮温降低、变凉，触诊有捻发音，叩诊呈鼓 音。 4.2.3 病理变化 本病肌肉丰满的部位有明显的气性肿胀，局部骨骼肌出血坏死性炎，皮下与肌间结缔组织浆液、出 血性炎，切面成海绵状；组织上肌纤维呈玻璃样变，肝脏常有坏死区形成。 4.2.4 实验室诊断 4.2.4.1 细菌学检查 无菌采集肿胀部位的穿刺液或死亡动物的肝、脾进行涂片，革兰氏染色镜检，可看到革兰氏阳性、 带有芽孢的杆菌，菌体较大，两端钝圆，单在或成短链。菌体直径一般是 0.5 m～0.8 m，长1.6 m～ 3.4 m。 4.2.4.2 细菌分离培养 DB15/T 3519 —2024 3 无菌采集肿胀部位的穿刺液或死亡动物的肝、脾接种于血琼脂， 37 ℃厌氧培养 24 h，可见在血琼 脂上形成边缘不整、扁平、灰白色纽扣状的圆形菌落，呈β型溶血。 4.2.4.3 生化鉴定 对葡萄糖、麦芽糖、果糖、乳糖、木糖、甘露醇、水杨苷、 H2S试验、尿素酶试验、明胶液化试验、 酪蛋白水解试验、硝酸盐还原试验、 VP试验进行生化试验，厌氧培养 24 h，观察生化试验结果。 4.2.4.4 结果判定 符合4.2.4.1和4.2.4.2的，同时生化反应是葡萄糖 +、麦芽糖 +、果糖+、乳糖+、木糖-、甘露醇 -、 水杨苷-、H2S试验-、尿素酶试验 -、明胶液化试验 +、酪蛋白水解试验 -、硝酸盐还原试验 +、VP试验-， 判定为气肿疽梭菌。 4.2.5 诊断结果判定 4.2.5.1 符合4.2.1、4.2.2和4.2.3的，判定为疑似气肿疽。 4.2.5.2 符合4.2.1、4.2.2和4.2.3的，同时符合 4.2.4的，确诊为 气肿疽。 破伤风 4.3.1 流行病学 人和多种动物均可感染本病，幼龄动物更易感。破伤风梭菌广泛存在于自然界中，主要通过创口感 染，如钉伤、刺伤、产道损伤、胎衣不下、犊牛脐带未消毒等。本病一般呈零星散发，各季均可发生， 夏季偏多。 4.3.2 临床症状 本病潜伏期从 1周到数周不等，一般平均为 10 d～14 d。病牛采食减少或不能采食，饮水困难，受 到惊吓或外界刺激全身僵直。该病主要特征为全身骨骼肌持续性或阵发性痉挛以及对外界刺激反射兴 奋性增高。 4.3.3 病理变化 本病没有特征性的病理变化，仅在黏膜、浆膜及脊髓等处可见有小出血点，肺充血、水肿，骨骼肌 变性及肌肉间结缔组织水肿 等非特异性变化。 4.3.4 实验室诊断 4.3.4.1 细菌学检查 无菌采集病变组织渗出液涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性芽孢杆菌，多单个存在，芽孢呈 圆形，位于菌体一端呈鼓槌状或羽毛球拍状。菌体直径一般是 0.5 m～1.1 m，长2.4 m～5.0 m。 4.3.4.2 细菌分离培养 无菌采集病变组织渗出液接种于营养琼脂， 37 ℃厌氧培养 24 h，在营养琼脂上可形成直径 4 mm～ 6 mm、扁平、灰白、半透明、表面昏暗、边缘有羽毛状细丝的不规则菌落 。 4.3.4.3 生化鉴定 DB15/T 3519 —2024 4 对葡萄糖、麦芽糖、果糖、乳糖、木糖、甘露醇、水杨苷、酪蛋白水解试验、尿素酶试验 、卵磷脂 酶试验、硝酸盐还原试验、 VP试验、明胶液化进行生化试验，厌氧培养 24 h，观察生化试验结果。 4.3.4.4 结果判定 符合4.3.4.1和4.3.4.2的，同时生化反应是葡萄糖 -、麦芽糖 -、果糖-、乳糖-、木糖-、甘露醇 -、 水杨苷-、酪蛋白水解试验 -、尿素酶试验 -、卵磷脂酶试验 -、硝酸盐还原试验 -、VP试验-、明胶液化试 验+，判定为破伤风梭菌 。 4.3.5 诊断结果判定 4.3.5.1 符合4.3.1、4.3.2和4.3.3的，判定为疑似破伤风。 4.3.5.2 符合4.3.1、4.3.2和4.3.3的，同时符合 4.3.4的，确诊为 破伤风。 5 防制措施 预防措施 5.1.1 科学饲养 5.1.1.1 饲养环境的急剧变化会导致牛只应激、抵抗力下降，易发生产气荚膜梭菌病，生产过程中应 避免暴力赶牛、 带牛作业、 过度助产， 使用新奶厅、 调整日粮配方等， 生产管理变化较大时应逐步过渡 。 5.1.1.2 青贮收割和制作过程要严格按照 NY/T 2696 的要求执行，玉米收获时，留茬高度不低于 15 cm，不应带入泥土等杂物。 5.1.2 消毒灭菌 5.1.2.1 春季运动场解冻后，对运动场至少翻松 15 cm，翻松后使用 2%火碱溶液对运动 场消毒，晾晒 1 d～2 d后再次翻松消毒，反复开展 3次，待运动场干燥后放入牛只。 5.1.2.2 牧场使用发酵菌床需每日翻松，及时清除潮湿垫料，晾干消毒发酵菌床，并添加干燥垫料。 5.1.2.3 开展免疫、断脐带、打耳标、去副乳头、断角等操作时，对创口使用 7%碘酊等消毒剂进行消 毒。排查牧场可能造成奶牛外伤（刮伤、刺伤）的危险因素，并及时处理。 5.1.2.4 新产牛产后护理使用 0.1%新洁尔灭对会阴部进行消毒，产道损伤创面用碘甘油处理。新产牛 注射药物使用一次性注射器，并用 7