ICS 65.020.01 CCS B 25 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3364—2024 沙蒿籽多糖含量测定 分光光度法 Determination of artemisia seed polysaccharides —— Spectrophotometric method 2024-02-23发布 2024-03-23实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3364—2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人：孙海洲、李胜利、金鹿、张春华、张崇志、杨鼎、萨初拉、王博、刘威、宝华、 付乐、李文婷。 DB15/T 3364 —2024 1 沙蒿籽多糖含量测定 分光光度 法 1 范围 本文件确定了分光光度法测定沙蒿籽多糖含量的方法。 本文件适用于多糖制品中多糖含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 沙蒿籽多糖 artemisia seed polysaccharide 在沙蒿籽表面覆盖的多糖类大分子物质，约占种子质量的 20%，是一种常见的食品添加剂。 4 原理 多糖类成分在浓硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水形成糠醛衍生物，然后与苯酚反应生成橙 黄色溶液，在 490 nm处有最大吸收峰，吸光度值与多糖含量成正比。 5 试剂和材料 试剂 5.1.1 本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.2 浓硫酸（ H2SO4）。 5.1.3 D-无水葡萄糖（ C6H12O6）。 5.1.4 苯酚（C6H6O）。 试剂配制 苯酚溶液：苯酚使用重蒸苯酚，称取重蒸苯酚 10 g，加水150 mL，置于棕色瓶中，现用现配 。 DB15/T 3364 —2024 2 标准品 葡萄糖标准品（ C6H12O）：纯度≥ 98%。 标准溶液配制 5.4.1 葡萄糖标准储备液（ 1 mg/mL）：取干燥至恒重的葡萄糖标准品 50 mg，精密称定，用水溶解并 定容至50 mL，摇匀即可。 4 ℃以下保存。 5.4.2 葡萄糖标准系列工作溶液：精密量取葡萄糖标准储备液 1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别 置50 mL容量瓶中，用水定容，摇匀，得浓度为 20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL的标准系列工作溶液。 6 仪器和设备 分析天平，感量 0.0001 g 。 恒温水浴锅，精度± 0.5 ℃。 离心机， 5000 r/min 。 干燥箱， RT+10 ℃～250 ℃。 实验室用样品粉碎机或研钵。 分光光度计，规格 185 nm～900 nm。 7 沙蒿籽多糖的提取 称取50 g沙蒿籽于烧杯中，加入 100 mL水至恒温水浴锅内 100 ℃浸提2 h。过滤后在上清液中加入 4倍体积95%乙醇，静置过夜后在离心机上 5000 r/min 离心10 min，去上清液，将沉淀复溶于 50 mL水中。 加入相同体积 95%乙醇，5000 r/min 离心10 min，留取沉淀。置沉淀于干燥箱内 65 ℃烘干，粉碎或研 磨后过1 mm筛，混匀，装入密闭容器中，保存备用。 8 分析步骤 标准曲线的绘制 8.1.1 准确吸取标准系列工作溶液各 1.00 mL 分别置于 20 mL具塞试管中，各加水 1.00 mL 至2.00 mL，再加苯酚溶液 1.00 mL，迅速滴加浓硫酸 5.00 mL，摇匀后放置 5 min，置沸水浴中加热 15 min， 取出冷却至室温。 8.1.2 同上操作蒸馏水为空白对照。 8.1.3 于490 nm处测定吸光度。 8.1.4 以吸光度为纵坐标，标准系列工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，其线性相关系数应大于 0.99，待测样液的响应值应在标准曲线线性范围内。 样品的测定 8.2.1 称取约0.1 g（精确至 0.0001 g ）备用样品，加 500 mL水溶解，过滤残渣，定容至 1000 mL得 到样品溶液。 8.2.2 准确吸取样品溶液 1.00 mL，按8.1.1测定吸光度。 8.2.3 根据标准曲线计算待测液中葡萄糖的含量。 DB15/T 3364 —2024 3 9 多糖含量计算 试样中沙蒿籽多糖的含量以质量分数表示，按式（ 1）计算： 4 2 21 1109.0−=VmVmX ………………………………（ 1） 式中： X——试样中多糖的含量，单位为质量分数（ %）。 m1——由标准曲线计算得到样品测定液中的多糖 含量，单位为微克（μ g）。 V1——样品定容体积，单位为毫升（ mL）。 m2——样品质量， 单位为克（ g）。 V2——比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升（ mL）。 0.9——葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。 结果表示 取两次测定的算数平均值作为结果，保留两位小数。 重复 每试样称取两个平行样进行测定，取平均值为分析结果；同一样品平行测定结果偏差不应超过算术 平均值的 10%。