ICS 65.020.30 CCS B 44 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3358—2024 绵羊腹腔镜 活体采卵技术规程 Technical code on laparoscopic ovum pick -up in sheep 2024-02-23发布 2024-03-23实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3358 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19 ）归口。 本文件起草单位： 内蒙古赛诺种羊科技有限公司、内蒙古农业大学。 本文件主要起草人：陈大勇、张家新、程磊、仇春娟、范利宏、包梅荣、龚璐、张楠、宋宇琨、朱 怡静。 DB15/T 3358 —2024 1 绵羊腹腔镜活体采卵技术规程 1 范围 本文件规定了绵羊腹腔镜采卵中术语和定义、供体绵羊选择、抽卵液配制及采卵操作等内容。 本文件适用于绵羊腹腔镜活体采卵。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 1571 羊胚胎移植技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 活体采卵 ovum pick -up 借助腹腔镜及其他装置在绵羊活体状态下采集卵母细胞的一系列过程。 供体 donor 提供卵母细胞的绵羊个体。 4 供体绵羊的选择及预处理 供体绵羊的选择 选择优良品种，谱系清楚的一级以上母羊，发育正常，以 1.5～6周岁为宜；产后空怀 90 d以 上，至少有两次以上正常发情周期，繁殖机能正常；无遗传疾病、生殖系统疾病和传染性疫病。 供体羊预处理 供体埋置孕酮海绵栓 13 d，撤除海绵栓前 3 d间隔24 h分别注射重组 FSH 3 mL 诱导卵泡发育 ,撤除 海绵栓前 1 d进行采卵。 5 采卵操作 DB15/T 3358 —2024 2 采卵前准备 5.1.1 供体羊空腹 供体羊空腹，冬季控水控料 36 h、夏季控水 24 h控料36 h、羔羊手术前 12 h空腹。 5.1.2 手术室 术前一天清扫手术室并用紫外线消毒 60 min；术前30 min用酒精消毒工作台 。 5.1.3 器械与消毒 5.1.3.1 器械准备 两把长臂钳、三个套管、三个穿刺针、 腹腔镜镜头和负压机。 5.1.3.2 器械消毒 提前30 min用75%酒精喷洒长臂钳、套管、穿刺针和腹腔镜镜头， 5 min后放入器械杯；术前用 新洁尔灭水将创布浸泡 10 min并甩干水分 。 穿刺操作 5.2.1 麻醉与保定 按照NY/T 1571的相关规定进行术前麻醉。穿刺手术前将动物固定在保定架上，将腹侧手术区域 剃毛。保定架呈一定倾斜度，头部处于低位，用 2%洗必泰和 1%碘液进行消毒，用干净的创布遮盖在手 术部位靠下方的位置，且用创巾钳固定 。 5.2.2 腹部穿孔 选择三个穿刺位置，第一个腹腔镜套管穿刺针在母羊左侧乳房基部下方 2 cm～5 cm处的位置刺入 最佳(靠近腹中线）；第二个穿刺孔位于腹中线两侧，离乳房 10 cm～15 cm；第三个穿刺孔位于右侧 乳房基部 3 cm～6 cm处。穿孔时将腹部外皮向上提起，穿刺针抵住手术位置刺入，刺入时注意皮和腹 膜的穿刺 点位置不要错开，注意避开血管 。 5.2.3 设备放置 将腹腔内窥镜放入第一孔，将长臂钳放入第三孔，观察穿刺套管是否进入腹腔内，如果腹部脂肪 过厚，导致视野内未看见套管，可用长臂钳或穿刺针拨开脂肪使套管暴露在视野内。第二孔中也放入 一支长臂钳用于辅助右侧的长臂钳将卵巢固定好。如卵巢固定好，第二孔长臂钳拔出，将采卵针放进 套管，准备采卵。 采卵 5.3.1 准备工作 5.3.1.1 采卵液配制 采卵液配方见附录 A。 5.3.1.2 准备 采卵前将采卵针和吸管用采卵液冲洗一遍，试管内采卵液不少于 2 mL。 DB15/T 3358 —2024 3 5.3.2 卵泡穿刺 观察卵巢后，用卵巢固定钳夹住卵巢的系带部分，在内窥镜的观察 下使用采卵针依次抽吸 2 mm以 上的有腔卵泡，从下往上抽取，同时记录抽取卵泡的数量。抽取大卵泡或抽取的卵泡液多时，要轻轻 的晃动采卵液，以防止采卵试管内的液体粘连；采卵试管内抽到血时要及时进行清洗；采卵完成后迅 速将采卵试管送回实验室内进行检卵与体外培养 。 5.3.3 术后流程 手术完成后，将套管拔出，移除所有器械（如果伤口出血严重，要进行结扎缝合）。伤口滴少许青 链霉素或皮下注射预防剂量的抗生素，注射 0.2 mL盐酸赛拉嗪。伤口喷洒碘酊 。 DB15/T 3358 —2024 4 A A 附录 A （资料性） 采卵液配置 DPBS+10% （v:v）FBS+1 mg/mL BSA+6 IU/mL 肝素钠+1.0%青链霉素合剂 ，混匀后用 Millipore 0.22 µm的过滤器过滤 ，在0 ℃～5 ℃条件下可保存两周。