ICS 65.020.01 CCS B 20 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3349—2024 饲用燕麦草 中性洗涤纤维瘤胃液体外 240 小时降解率的测定 A method to assess 240 -h ruminal in vitro neutral detergent fiber degradability of the forage oat hay 2024-02-23发布 2024-03-23实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3349 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19) 归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区知识产权保护中心、内蒙古大青山国家级自然保护区管理局、内蒙 古自治区农牧业科学院、内蒙古草业技术创新中心有限公司、包头职业技术学院、鄂尔多斯市农牧业科 学研究院、内蒙古自治区农畜产品质量安全中心、 呼和浩特市园林建设服务中心 、内蒙古自治区农牧业 技术推广中心。 本文件主要起草人：李宁、聂竹彦、金鹿、王博、张春华、李胜利、杨鼎、萨初拉、刘威、 刘利、 宝华、张崇志、胡晓晓、付乐、李文婷、张跃华、桑丹、娜美日嘎、赵英、蔡婷。 DB15/T 3349 —2024 1 饲用燕麦草中性洗涤纤维瘤胃液体外 240小时降解率的测定 1 范围 本文件规定了饲用燕麦草 240 h体外消化率测定方法的试剂和溶液、仪器和设备、样品、分析步骤 和结果计算。 本文件适用于不同生长期、 不同品种的饲用燕麦草中性洗涤纤维瘤胃液体体外 240 h降解率的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 3358.1 统计学词汇及符号 第1部分：一般统计术语与用于概率的术语 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 DB15/T 1583 牧草中aNDFom的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 中性洗涤纤维 neutral detergent fiber 用中性洗涤剂去除饲草中的脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等成分后，残留的不溶解物质的总称。 饲用燕麦草中性洗涤纤维体外降解率 the degradability of neutral detergent fiber of oat in vitro 瘤胃液体外降解的饲用燕麦草中中性洗涤纤维含量占饲用燕麦草原样中中性洗涤纤维含量的百分 比。 4 试剂和溶液 试剂和溶液 4.1.1 如无特别说明，本方法所用试剂均为分析纯，所用水一律指 GB/T 6682 中三级水。 DB15/T 3349 —2024 2 4.1.2 丙酮（CH3COCH3 ）。 4.1.3 磷酸氢二钾（ KH2PO4）。 4.1.4 七水硫酸镁（ MgSO4·7H2O）。 4.1.5 氯化钠（ NaCl）。 4.1.6 二水氯化钙（ CaCl2·2H2O）。 4.1.7 尿素（CO(NH2)2 ）。 4.1.8 碳酸钠（ Na2CO3）。 4.1.9 九水硫化钠（ Na2S·9H2O）。 4.1.10 乙二胺四乙酸二钠（ C10H14N2Na2O8 ）。 4.1.11 四硼酸钠（ Na2B4O7·10H2O）。 4.1.12 十二烷基硫酸钠（ C12H25NaSO4 ）。 4.1.13 乙二醇乙醚（ C4H10O2）。 4.1.14 无水磷酸氢二钠（ Na2HPO4）。 试剂配制 4.2.1 缓冲液A的配制 缓冲液A的配制参见附录 A。 4.2.2 缓冲液B的配制 缓冲液B的配制参见附录 B。 4.2.3 3%十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液配制 称取18.60 g乙二胺四乙酸二钠和 6.80 g四硼酸钠加入到 100 mL烧杯中，加少量水加热溶解后，再 加入30.00 g十二烷基硫酸钠和 20 mL乙二醇乙醚。称取 4.65 g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中，加少 量水，微微加热溶解后倒入第一个烧杯中，稀释至 1000 mL。 5 仪器和设备 羊用瘤胃液取样器（ 长30 cm，内径12.70 mm ，PPR管）。 分析天平（分度值 0.0001 g ）。 烘干箱（室温至 300 ℃）。 磁力搅拌器（转速为 100 r/min ～1400 r/min ）。 纤维袋（ ANKOM F57 ，25 μm孔隙）。 体外模拟培养箱（室温至 45 ℃）。 全自动纤维分析仪（室温至 100 ℃）。 6 中性洗涤纤维瘤胃液体外 240 h降解率的测定程序 见图1。 DB15/T 3349 —2024 3 图1 中性洗涤纤维瘤胃液体外 240 h降解率的测定程序 7 样品 取样 按GB/T 14699.1 进行采样。 制备 样品根据 GB/T 20195 制备，置于烘箱内于 65 ℃烘干，研磨，过 1 mm筛后取筛下物。 8 分析步骤 瘤胃液的制备 在晨饲前经瘤胃瘘管利用瘤胃液取样器采集供试羊（不少于 3只）的瘤胃液，直接转入预热至 39 ℃ 的保温容器中， 混合均匀后经 4层纱布过滤， 滤液持续通入 CO2气体， 然后量取 400 mL瘤胃上清液于 39 ℃ 保温容器备用。 体外消化步骤 样品的采集及制备（见 7） 干燥（见 8.2.3） 消化（见 8.2.1） 洗涤（见 8.2.2） 瘤胃液的制备（见 8.1） 中性洗涤纤维含量的测定（见 8.3） 结果计算（见 9） DB15/T 3349 —2024 4 8.2.1 消化 称取0.5000 g 样品放置于纤维袋中，封口后平铺放置于体外模拟培养箱中消化罐的分隔板两侧。取 两个容器分别加入 266 mL缓冲液B和1330 mL缓冲液A，于39 ℃条件下调节其 pH达到6.80。于每个消化罐 中加入约 1600 mL 混合缓冲溶液（缓冲液 B+缓冲液A）后放置于体外模拟培养箱中，打开加热和转动开 关，使消化罐的温度在 20 min～30 min内达到平衡。取出消化罐加入提前预处理好的 400 mL瘤胃液，持 续通入CO2然后盖紧盖子，置于体外模拟培养箱中连续培养 240 h。 8.2.2 洗涤 待培养结束后取出消化罐倒掉液体，再将纤维袋全部取出，用流动的自来水冲洗 7 min～10 min直 至干净。 8.2.3 干燥 将纤维袋置于 105 ℃烘箱中烘干 6 h，放入干燥器中冷却 30 min后，称重。然后再烘干 30 min，再 冷却称重，直至两次称量之差＜ 0.0020 g为恒重。 中性洗涤纤维含量的测定 原样样品和残渣样品中中性洗涤纤维含量按照 DB15/T 1583 中规定的方法进行。 9 结果计算 样品中中性洗涤纤维含量按式（ 1）计算。 100 12 3−=WWWY …………………………………… (1) 式中： Y——代表样品中中性洗涤纤维的含量，单位为百分比 (%)； W3——代表洗涤后样品和纤维袋的重量，单位为克（ g）； W2——代表纤维袋的重量，单位为克（ g）； W1——代表样品的重量，单位为克（ g）。 样品中中性洗涤纤维体外降解率按式（ 2）计算。 100 45 4−=WWWZ …………………………………… (2) 式中： Z——代表样品在 240 h时间点的中性洗涤纤维瘤胃液体外降解率，单位为百分比 (%)； W4——代表样品中中性洗涤纤维的重量，单位为克（ g）； W5——代表经过 240 h体外降解后残渣样品中中性洗涤纤维的重量，单位为克（ g）。 取两次测定结果的算数平均值，计算结果保留 2位小数点。 根据GB/T 3358.1 ，在重复条件下同一样品同时两次平行测定所得结果相对相差≤ 10%。