ICS 65.020.01 CCS B 16 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3323—2024 番茄抗颈腐 根腐病室内鉴定技术规程 Technical code of practice for evaluating resistance of tomato against Fusariumoxysporumf.sp. radicis -lycopersici 2024-01-25发布 2024-02-25实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3323 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（ SAM/TC 25 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大学、内蒙古包头市九原区农业技术推 广中心、辽宁省绥中县农业事务服务中心。 本文件主要起草人：杨永青、王永、刘燕、高婧、李正男、孙平平、张磊、张俊、党媛玥、宋培玲、 贾晓清、康立茹、乔慧蕾、刘富贵、白金。 DB15/T 3323 —2024 1 番茄抗颈腐根腐病室内鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了番茄抗颈腐根腐病室内鉴定方法， 包括主要仪器、 培养基的配制、 分生孢子液的制备、 鉴定材料的准备、人工接种、室内抗性鉴定。 本文件适用于在室内条件下对番茄幼苗进行颈腐根腐病抗性鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 1858.3 番茄抗枯萎病鉴定技术规程第 3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程 3 术语和定义 NY/T 1858.3 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 番茄颈腐根腐病 Fusarium crown and root rot 由尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐专化型（ Fusarium oxysporum f.sp. radicis -lycopersici ，FORL）引起的一种 番茄土传病害，主要症状为：初始发生时主根基部开始褐变，后扩展到土壤与植株茎基部交接处，环绕 茎基部有浅褐色至深褐色病斑；严重时维管束褐变和根部腐烂，苗期发病时茎基部溢缩变褐，可从发病 部位折倒而死亡；成株期发病严重时导致全株性萎蔫。 4 主要仪器 高压灭菌锅、超纯水系统、恒温培养箱、超净工作台、光学显微镜、恒温振荡摇床、电子天平、血 球计数板等。 5 培养基的配制 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ PDA） 将马铃薯洗净去皮切块，称 200 g加1000 mL蒸馏水，煮沸 10min～20 min，用四层纱布过滤，加 入20 g葡萄糖和 20 g琼脂粉，补加蒸馏水至 1000 mL，121 ℃高压灭菌 20 min。 马铃薯葡萄糖液体培养基（ PDB） 同5.1中PDA的配制方法，不加琼脂粉。 DB15/T 3323 —2024 2 6 分生孢子液的制备 将已纯化并鉴定的番茄颈腐根腐病菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ PDA）上培养 5 d～7 d，从 培养皿3/4处打取3块直径为 5 mm的菌块置于盛有 100 mL马铃薯葡萄糖液体培养基（ PDB）的500 mL 三角瓶中， 25 ℃，150 rpm/min 振荡培养 3 d，用4层无菌纱布过滤去除菌丝体获得分生孢子液，利用 血球计数板计数，无菌水调节分生孢子液浓度至 1×107个/mL，备用。 7 鉴定材料的准备 育苗基质预先装入不锈钢托盘中，在 105 ℃烘箱中干热灭菌 3 h，自然冷却后加一定量无菌水拌匀 （基质含水量约为 50%），装入 21孔加深穴盘。选取饱满的种子，放入 50 ℃～55 ℃的温水中浸种 15 min～20 min，播种于穴盘中；待幼苗生长至 3～4叶期时，进行室内人工接种。 8 人工接种 鉴定对照材料 设“Moneymaker ” 番茄作为感病对照品种。 接种方法 将水果刀（或手术刀）插入幼苗周围的基质中，对植株侧根进行伤根处理，然后将 30 mL病原菌孢 子液灌入其根系周围；将穴盘置于 18 ℃～22 ℃，16 h光照、8 h黑暗人工气候室中常规管理。每个 材料设置 3次重复，每次重复接种 20株幼苗；同时设置接无菌水的植株为对照。 9 室内抗性鉴定 发病情况调查 接种30 d后，将植株根系清洗干净，按照附录 A中的图A.1中病情分级标准和表 A.1中各病情级 别的症状描述准进行发病等级调查。 病情指数计算 根据公式（ 1）计算病情指数： ............................................... （1） 式中： DI——为病情指数 disease index ，DI； DV——为病情级别代表的数值，分别为 0、1、2、3、4； n——为各病情级别的植株数； DVX——为最高病情级别的代表数值，本文件中为 4； N——为同一种材料调查的总株数。 DB15/T 3323 —2024 3 抗性评价 按照下列抗性鉴定标准[1]对供试材料进行抗性评价。 免疫：DI=0；高抗： 0＜DI＜12.5；抗病： 12.5≤DI＜25；中抗： 25≤DI＜50；感病： 50≤DI＜75； 高感：75≤DI≤100。 鉴定有效性判定 感病对照材料“ Moneymaker ”的病情指数≥ 50时，该批次抗性鉴定视为有效。 DB15/T 3323 —2024 4 A A 附录 A （资料性） 番茄抗颈腐根腐病鉴定中病情级别划分及分级标准 A.1 番茄颈腐根腐病抗性鉴定病情分级标准参考图示见图 A.1。 标引序号说明： a：0级 ； b：1级； c：2级 ； d：3级； e：4级。 图A.1 番茄颈腐根腐病抗性鉴定病情分级标准参考图示 A.2 番茄颈腐根腐病病情级别的划分见表 A.1。 表A.1 番茄颈腐根腐病病情级别的划分 病情分级 症状描述 参考图示 0级 主根白色、侧根白色或浅黄色、均无褐变，纵切维管束正常 图1a 1级 主根基部轻微褐变，侧根正常，纵切维管束正常 图1b 2级 主根基部明显褐变，靠近主根基部的侧根褐变，纵切维管束褐变但褐变 部位未到达地上茎部 图1c 3级 主根侧根明显褐变，侧根脱落，纵切维管束主根基部明显褐变，且褐变 部位延维管束向上到达茎部，且超过株高的 1/4但不超过株高的 1/2 图1d 4级 植株长势受限，根部严重褐变甚至腐烂，侧根脱落，纵切根、茎维管束 严重褐变，且褐变部位超过株高的 1/2 图1e DB15/T 3323 —2024 5 参考文 献 [1] 王梦蕊,刘淑梅,侯丽霞,王施慧,吕宏君,苏晓梅. 2022.番茄颈腐根腐病抗性鉴定技术的建立 及抗性种质资源筛选 .中国农业科学 , 55(4):707 -718.