ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 1058—2024 代替DB15/T 1058-2016 平菇菌种制作技术规程 Technical code of practice for strain manufacture of pleurotus mushrooms 2024-09-06发布 2024-10-06实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 1058 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件代替 DB15/T 1058 -2016《平菇菌种制作技术规程》，与 DB15/T 1058 -2016相比，除结构调整 和编辑性改动外，主要技术变化如下： a) 增加原种、栽培种中枝条菌种容器的内容（见 6.1.2）； b) 增加了原料处理中粮食菌种处理时间（见表 1）； c) 增加了原料处理中枝条菌种的内容（见 6.1.3）； d) 更改了装袋（瓶）中枝条菌种内容（见 6.1.4，2016年版的6.1.3）； e) 更改了黑木耳原种和栽培种感官容器要求内容（见表 4、表5，2016年版的表 3、表4）； f) 增加了附录 B注的内容 （见附录 B）。 本文件由内蒙古自治区果蔬标准化委员会（ SAM/TC 25 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古农业大 学、克什克腾旗农牧局、呼伦贝尔学院。 本文件主要起草人：庞杰、于传宗、穆宗杰、于凤玲、鲍红春、包妍妍、赵宏宇、孙国琴、李小雷、李 亚娇、王海燕、狄洁增、肖强、贾文姝、张慧、张立华、康立茹、乔慧蕾、解亚杰、于静、孟虎、王勇。 本文件及其 所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2016年首次发布为 DB15/T 1058 -2016； —— 本次为第一次修订。 DB15/T 1058 —2024 1 平菇菌种制作技术 规程 1 范围 本文件规定了制作平菇菌种的菌种生产要求、母种生产、原种、栽培种生产、检验、入库及留样技 术。 本文件适用于的平菇及该属的紫孢侧耳、小平菇、凤尾菇、佛罗里达平菇的母种、原种和栽培种 制 作要求。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 23189 平菇 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 3 术语和定义 GB/T 23189 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 平菇 pleurotus mushroons 隶属于担子菌门 （ Basiduomycota ） 伞菌目 （ Agaricales ） 侧耳科 （ Plenrotaceae ） 侧耳属 （ Pleurotus ） 的木腐菌。 [来源：GB/T 23189 -2008，3.1] 菌种 spawn 通过生产试验验证具有特异性、均一性和稳定性，丰产性好、抗性强的平菇菌株或品种，培养生长 在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。 母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管或培养皿为培 养容器和使用单位，也称为一级种、试管种。 DB15/T 1058 —2024 2 原种 pre-culture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（ 120～170）mm ×（220～280）mm×（0.04～0.05）mm聚丙烯塑料袋为 容器。也称为二级种。 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（ 150～170）mm ×（330～350）mm×（0.04～0.05）mm聚丙烯塑料袋为容器。栽培种只能用于扩大到栽培出菇袋或直接 出菇，不可以再次扩大繁殖菌种。也称为三级种。 4 菌种生产要求 人员 生产所需要的技术人员和检验人员应经过专 业培训、掌握平菇基础知识及平菇菌种生产技术规程 要求的相应专业技术人员。 场地、厂房要求 菌种生产应选择地势高，通风良好，空气清新，水源近，排水通畅，交通便利 的场所。 300 m之内 无酿造厂、无食用菌栽培场、集贸市场、规模养殖的畜禽舍、垃圾和粪便堆积场，无污水、废气、废渣、 烟尘和粉尘等污染源。 菌种生产厂房要求有各自隔离的摊晒场、 原材料库、 配料分装库。 配套有配料室、 搅拌室、 装袋 （瓶） 室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室（ 有恒温和负压装置 ） 、菌种检测室及菌种冷藏库等 各环节的设 施。冷却室、接种室，培养室都要有离子净化 设施。 生产设备 菌种生产需要粉碎机、电子秤、搅拌机、装袋（瓶 ）机、高压灭菌锅或常压灭菌锅、离子净化器、 超净工作台或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、液体菌种灌（ 30 L～250 L）、显微镜等设备。 5 母种生产 培养基 见附录A。 容器 18 mm×180 mm或20 mm×200 mm规格试管；直径 7 cm～9 cm玻璃培养皿或一 次性塑料培养皿。 分装和灭菌 5.3.1 试管分装和灭菌 分装培养基至试管 1/4处，用棉塞或硅胶塞子封闭试管口，每 5支试管为 1把，牛皮纸包棉塞，橡皮 DB15/T 1058 —2024 3 筋扎紧， 棉塞向上放置。棉塞应采用梳棉，不能使用脱脂棉。 在 121 ℃～124 ℃（0.11 MPa ～0.12 MPa ） 下灭菌25 min。 灭菌后温度降到 50 ℃～55 ℃时， 在空气清洁的室内摆斜面， 要求斜面长度不超过试管长度的 2/3。 从摆好的试管中抽取 3%～5%的试管，在 28 ℃下培养72 h，无微生物长出为灭菌合格。 5.3.2 培养皿分装和灭菌 培养基装入 300 mL～500 mL三角瓶至刻度的 2/3处，用带滤膜的封口膜封口后灭菌。培养皿用报纸 包好，同时放入灭菌锅灭菌。在 121 ℃～124 ℃（0.11 MPa ～0.12 MPa）下灭菌 25 min。 灭菌后温度降到 50 ℃～55 ℃时，在超净工作台内将三角瓶中的培养基分装至培养皿中，培养基占 培养皿高度的 1/3～1/2。 接种 在超净工作台或接种箱内接种，接种前用紫外灭菌灯照射 30 min，然后用 75%酒精进行表面杀菌。 接种的菌块 3 mm～5 mm，接种在培养皿或试管的中部。培养皿需用石腊膜 密封。接种过程按照 NY/T 528 的规定执行，接种后及时做好 标签。 培养 温度控制在 24 ℃～26 ℃，空气湿度在 75%以下，通风避光培养。 接种后第 3 d、第5 d和长满培养基后分别进行检验，挑出未活、污染和生长不良的不合格培养物。 检验方式应该是逐个检验。 6 原种、栽培种生产 固体菌种 6.1.1 培养基 见附录B。 6.1.2 容器 原种采用 850 mL以下、 瓶口直径 ≤4 cm、耐126 ℃高温的透明瓶子， 或采用 （ 120～170）mm×（220～ 280）mm×（0.04～0.05）mm的聚丙烯塑料袋； 枝条菌种生产采用（ 120～170）mm×（22～28）mm×（0.04～0.05）mm的聚丙烯塑料袋； 栽培种采用同原种要求的瓶子，也可采用（ 150～170）mm×（330～350）mm×（0.04～0.05）mm的 聚丙烯塑料袋。 6.1.3 原料处理 粮食菌种制备需将粮食提前浸泡 8 h～12 h，然后进行煮制， 煮制时间见表 1，待粮食内部无白芯即 可。煮制结束捞出控水，表明无水渍即可拌入辅料。 DB15/T 1058 —2024 4 表1 不同粮食种类煮制所需时间情况 粮食种类 小麦 谷粒 高粱 玉米 荞麦 燕麦 煮制时间（水开 以后计时 /min） 3～5 15～20 25～35 35～45 25～35 5～8 枝条规格可选用 125 mm×5 mm×7 mm或125 mm×3 mm×7 mm；枝条需要提前浸泡 12 h以上，需要 水全部漫过枝条，待内部无白芯捞出控水，枝条表明无水渍即可拌入辅料。 6.1.4 装袋（瓶） 采用装袋（瓶）机或人工进行装袋（瓶），人工装袋（瓶）需用打孔器在袋口处打孔，孔直径 1 cm～ 1.5 cm深度为8 cm～12 cm，每袋（瓶）装培养基质 500 g～600 g。 枝条菌种人工装袋，每个菌种装入枝条 110～120根，顶端可放 30 g～50 g粮食菌种或棉籽壳菌种。 6.1.5 灭菌 培养基质装袋（瓶）后 4 h内进行灭菌，灭菌可分为高压灭菌和常压灭菌。 高压灭菌： 组合培养料在 121 ℃～124 ℃（0.11 MPa ～0.14 MPa） 下灭菌2 h； 粮食培养基在 121 ℃～ 124 ℃（0.11 MPa ～0.14 MPa ）下灭菌 2.5