ICS 65.020.21 CCS B 30 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 1056—2024 代替DB15/T 1056-2016 香菇菌种制作技术规程 Regulation of strain manufacture for lentinula edodes 2024-07-31发布 2024-08-31实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 1056 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 DB15/T 1056 -2016《香菇菌种制作技术规程》，与 DB15/T 1056 -2016相比，除结构调整 和编辑性改动外，主要技术变化如下： a) 更改了母种培养基要求（见 5.1，2016版5.1）； b) 增加了母种容器要求（见 5.2，2016版5.2）； c) 增加了母种检测要求（见 5.4）； d) 更改了母种培养要求（见 5.6，2016版5.5）； e) 更改了原种、栽培种培养基要求（见 6.1.1，2016版6.1.1）； f) 更改了原种、栽培种培养要求（见 6.1.6，2016版6.1.6）； g) 更改了原种、栽培种贮存要求（见 6.1.7，2016版6.1.7）； h) 增加了瓶装液体菌种检验要求（见 6.2.2.4）； i) 更改了菌种罐液体菌种装罐和灭菌要求（见 6.2.3.1，2016版6.2.3.1）； j) 更改了母种、 原种、 栽培种感官要求 （见 7.1.1、7.1.2、7.1.3，2016版7.1.1、7.1.2、7.1.3）； k) 更改了入库要求（见 7.2，2016版7.2）； l) 删除了留样要求（见 2016版7.3）。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内需古自区果蔬标准化技木委会（ SAM/TC 25 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、克什克腾旗农牧技术推广中心、 清水河县摇铃沟农 业科技发展有限公司 。 本文件主要起草人：李亚娇、王海燕、孙国琴、于传宗、庞杰、王永、杨景杰、李炳华、吴静、李 松树叶、狄洁增、吕永伟、苏永梅、赵宏宇、刘晓蕊、刘瑞。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2016年首次发布为 DB15/T 1056 -2016； —— 本次为第一次修订。 DB15/T 1056 —2024 1 香菇菌种制作技术 规程 1 范围 本文件规定了香菇 菌种制作的 菌种生产要求、母种生产、原种和栽培种生产、检验、入库等技术流 程要点。 本文件适用于香菇母种、原种和栽培种菌种制作要求。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 香菇 lentinula edodes 又名香蕈、香信 、香菌、冬菇、椎茸 (日本)。类脐菇科（Omphalotaceae ） 、香菇属（ Lentinula）、 香菇种的一类木腐菌，子实体肉质或近肉质。 菌种 spawn 通过生产试验验证具有特异性、均一性和稳定性，丰产性好、抗性强的香菇菌株或品种，生长在 适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。 母种 stock culture 经分离、杂交、诱变等各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃 试管和培养皿为培养容器和使用单位，也称为一级种、试管种。 原种 pre-culture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称为二级种。 DB15/T 1056 —2024 2 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种，也 称为三级种。 固体菌种 solid spawn 以富含木质素、纤维素和淀粉等天然有机物为主要原料，添加适量的有机氮源和无机盐类，具有一 定水分含量的培养基培养的纯菌丝体。 液体菌种 liquid spawn 在液体培养基中，通过摇瓶震荡培养或深层发酵技术快速获得的大量的纯双核菌丝体。 4 菌种生产要求 场地 总体要求交通运输便利，地势较高，通风良好，有充足的水源和电源，排水通畅，远离污染源。 厂房 菌种生产厂房要求有各自隔离的摊晒场、 原材料库、 配料分装库。 配套有配料室、 搅拌室、 装袋 （瓶） 室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室（通风好，有纱窗）、菌种检测室及菌种冷藏库等各环节的设施。 冷却室、接种室，培养室都要有净化设施。菌种生产厂房条件符合 NY/T 1731 规定。 生产设备 菌种生产需要粉碎机、电子秤、搅拌机、装袋（瓶）机、高压灭菌锅或常压灭菌锅、离子净化器、 超净工作台或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、液体菌种 灌（30 L～250 L）、冰箱、显微镜等设 备。菌种生产设备条件符合 NY/T 1731 规定。 5 母种生产 培养基 马铃薯200 g加水1200 ml煮沸20 min，滤液定容至 1000 ml，加入葡萄糖 10 g、蔗糖10 g、蛋白胨 1.5 g、酵母粉 1.5 g、硫酸镁（ MgSO 4）0.5 g、磷酸二氢钾（ KH2PO4）1 g、琼脂粉 8 g～10 g，pH自然； 麦粒100 g加水1200 ml煮沸20 min，滤液定容至 1000 ml，加入葡萄糖 10 g、蔗糖10 g、蛋白胨 5 g、硫酸镁（ MgSO 4）0.5 g、磷酸二氢钾（ KH2PO4）1 g、琼脂粉 8 g～10 g，pH自然； 马铃薯200 g加水600 ml煮沸20 min，滤液定容至 500 ml；麦麸100 g加水600 ml煮沸20 min，滤液 定容至500 ml，二者混合，加入葡萄糖 10 g、蔗糖10 g、蛋白胨 1.8 g、硫酸镁（ MgSO 4）0.5 g、磷酸二 氢钾（KH2PO4）1 g、琼脂粉 8 g～10 g，pH自然。 DB15/T 1056 —2024 3 容器 试管选用 18 mm×180 mm或者20 mm×200 mm；培养皿选用直径 7 cm～9 cm玻璃培养皿或一次性塑 料培养皿，三角瓶规格 300 ml～500 ml。 分装和灭菌 5.3.1 试管分装和灭菌 分装培养基至试管 1/4处，用棉塞或硅胶塞子封闭试管口，每 5支试管为 1把，牛皮纸包棉塞，橡皮 筋扎紧， 棉塞向上放置。棉塞应采用梳棉，不能使用脱脂棉。 在 121 ℃～122 ℃（0.11 MPa ～0.12 MPa ） 下恒温灭菌 25 min。 降温至（ 65±5）℃时取出试管，在空气清洁的室内摆斜面，斜面长度不超过试管长度的 2/3。自然 降温凝固后成斜面。 5.3.2 培养皿分装和灭菌 培养基装入 300 ml～500 ml三角瓶至刻度的 2/3处，用带滤膜的封 口膜封口后灭菌。培养皿用报纸 包好，放入灭菌锅。 121 ℃～122 ℃（0.11 MPa ～0.12 MPa ）恒温灭菌 25 min。 降温至（ 65±5）℃时，在超净工作台内将三角瓶中的培养基分装至培养皿中，培养基占培养皿高 度的1/3～1/2。 检测 抽取3%～5%灭菌后的试管和培养皿，在 28 ℃下培养 48 h，无微生物长出为灭菌合格。 接种 超净工作台或接种箱内紫外灯照射 30 min后吹风，之后用 75%酒精进行表面消毒。接菌过程严格执 行无菌操作，接种后及时贴好标签并做好记录。 将3 mm～5 mm菌块接种在培养皿或试管培养基的中部。培养皿用石腊膜密封。 培养 在通风避光、 22 ℃～26 ℃下培养。 接种后每隔 2 d～3 d检验一次，剔除菌种未活、污染和生长不良的不合格培养物。 菌丝长满培养基表面即可使用。 6 原料、栽培种生产 固体菌种 6.1.1 培养基 粮食培养基：谷粒、麦粒或玉米粒 89%，柠条粉、棉籽壳、木屑、玉米芯粉或豆秸粉 9%，石膏1%、 过磷酸钙 %，水分含量（ 60±2）%，石灰水调节 pH 6.0～pH 6.6。 组合培养基： 木屑78%，麦麸或细米糠 20%，石膏1%，过磷酸钙 1%，水分含量（ 60±2）%，石灰水调 节pH值到6～6.6； 柠条粉60%，玉米芯20%，麸子18%，石膏1%，过磷酸钙 1%，水分含量（ 60±2）%，石灰水调节 pH值 到6～6.6； DB15/T 1056 —2024 4 豆秸粉60%，玉米芯20%，麸子18%，石膏1%，过磷酸钙 1%，水分含量（ 60±2）%，石灰水调节 pH值 到6～6.6； 硬杂木屑 87%，麦麸12%，石膏1%，水分含量（ 60±2）%，石灰水调节 pH值到6～6.6； 硬杂木屑 84%，麸皮12%，高粱壳 3%，石膏1%，水分含量（ 60±2）%，石灰水调节 pH值到6～6.6。 6.1.2 容器 原种选用耐 126 ℃高温、有透气膜封口的透明瓶子，或 选用（12