ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 1055—2024 代替DB15/T 1055-2016 黑木耳菌种制作技术规程 Technical code of practice for strain manufacture of auricularia auricula 2024-09-06发布 2024-10-06实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 1055 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 DB15/T 1055 -2016《黑木耳菌种制作技术规程》，与 DB15/T 1055 -2016相比，除结构调 整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a) 增加了原料处理中枝条菌种的内容（见 6.1.3）； b) 增加了原料处理中粮食菌种处理时间（见表 1）； c) 更改了装袋（瓶）中枝条菌种内容（见 6.1.4，2016年版的6.1.3）； d) 增加了黑木耳原种和栽培种感官容器要求内容（见表 3、表4）； e) 更改了培养基质配方（见附录 A，2016年版的附录 A）； f) 增加了附录 B注的内容（见附录 B）。 本文件由内蒙古自治区果蔬标准化委员会 （SAM/TC 25 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古农 业大学、克什克腾旗农牧局、呼伦贝尔学院。 本文件主要起草人：庞杰、于传宗、穆宗杰、于凤玲、鲍红春、包妍妍、赵宏宇、孙国琴、李 小雷、李亚 娇、王海燕、狄洁增、肖强、贾文姝、张慧、张立华、康立茹、乔慧蕾、解亚杰、于静、 孟虎、王勇。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2016年首次发布为 DB15/T 1055 -2016； —— 本次为第一次修订。 DB15/T 1055 —2024 1 黑木耳菌种制作技术规程 1 范围 本文件规定了黑木耳（ Auricularia auricula ）母种、原种和栽培种有关的定义、菌种制作技术流程 要点等。 本文件适用于黑木耳母种、原种和栽培种菌种制作要求。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6192 黑木耳 GB 19169 黑木耳菌种 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 3 术语和定义 GB/T 6192 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 黑木耳 auricularia auricular 隶属于担子 菌亚门（ Basidiomycotina ）木耳目（ Auricularisles ）木耳科（ Auriculariaceae ）的 可食用的大型真菌。 [来源：GB/T 6192 -2019，3.1] 菌种 spawn 通过生产试验验证具有特异性、均一 性和稳定性，丰产性好、抗性强的黑木耳菌株或品种，培养 生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。 母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以试管或培养皿为培养容 器和使用单位，也称为一级种。 DB15/T 1055 —2024 2 原种 pre-culture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称为二级种 。 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种可以用于扩大到栽培出菇袋或直接出耳。也 称为三级种。 4 菌种生产要求 人员 生产所需要的技术人员和检验人员应经过专业培训，掌握黑木耳基础知识及黑木耳菌种生产技术 规程要求。 场地、厂房要求 菌种生产应选择地势高、通风良好、空气清新、水源近 、排水通畅、交通便利的场所。 300 m之内 无酿造厂、食用菌栽培场、集贸市场、规模养殖的畜禽舍、垃圾和粪便堆积场，无污水、废气、废渣、 烟尘和粉尘等污染源。 菌种生产厂要求有各自隔离的摊晒场、 原材料库、配料分装库。配套有配料室、 搅拌室、 装袋 （瓶） 室、灭菌室 、冷却室、接种室、培养室（有恒温和负压装置）、 菌种检验（检测）室及菌种冷藏库等。 冷却室、接种室，培养室都要有离子净化设施。 生产设备 菌种生产需要粉碎机、电子 秤、搅拌机、装袋（瓶）机、高压灭菌锅或常压灭菌锅、离子净化器、 超净工作台或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、液体菌种罐（ 30 L～250 L）、冰箱 、显微镜等设 备。 5 母种生产 培养基 见附录A。 容器 试管选用18 mm×180 mm或20 mm×200 mm；培养皿选用直径 7 cm～9 cm玻璃培养皿或一次性塑料 培养皿。 分装和灭菌 5.3.1 试管分装和灭菌 分装培养基至试管 1/4处，用棉塞或硅胶塞子封闭试管口，每 5支试管为 1把，牛皮纸包棉塞，橡皮 DB15/T 1055 —2024 3 筋扎紧， 棉塞向上放置。棉塞应采用梳棉，不能使用脱脂棉。 在 121 ℃～124 ℃（0.11 MPa ～0.12 MPa ） 下灭菌25 min。 灭菌后温度降到 50 ℃～55 ℃时， 在空气清洁的室内摆斜面， 要求 斜面长度不超过试管长度的 2/3。 抽取3%～5%的试管，在 28 ℃下培养 72 h，无微生物长出为 灭菌合格。 5.3.2 培养皿分装和灭菌 培养基装入 300 mL～500 mL三角瓶至刻度的 2/3处，用带滤膜的封口膜封口。培养皿用报纸包好， 一起在121 ℃～124 ℃（0.11 MPa ～0.12 MPa ）下灭菌 25 min。 灭菌后温度降到 50 ℃～55 ℃时，在超净工作台内将三角瓶中的培养基分装至培养皿中，培养基占 培养皿高度的 1/3～1/2。 接种 在超净工作台或接种箱内接种，接种前用紫外灯照射 30 min，然后用 75%酒精进行表面消毒。将 3 mm～5 mm的菌块接，接种在培养皿或试管的中部，接种箱内需在 1 h内完成接种工作。培养皿用石腊膜 密封。接种过程按照 NY/T 528 的规定执行，接种后及时贴好标签。 培养 温度控制在 25 ℃±1 ℃，空气湿度在 75%以下，通风黑暗培养。 接种后第 4 d、第7 d和长满培养基后分别进行检验，挑出未活、污染和生长不良的不合格培养物。 检验方式应该是逐个检验 。 6 原种、栽培种生产 固体菌种 6.1.1 培养基 见附录B。 6.1.2 容器 原种采用 850 mL以下、 瓶口直径≤ 4 cm、耐126 ℃高温的透明瓶子； 枝条菌种生产采用 （ 120～170） mm×（220～280）mm×（0.04～0.05）mm的聚丙烯塑料袋。 栽培种采用同原种要求的瓶子，也可采用（ 150～170）mm×（330～350）mm×（0.04～0.05）mm的 聚丙烯塑料袋。 6.1.3 原料处理 粮食菌种制备需将粮食提前浸泡 8 h～12 h，然后进行煮制，煮制时间见表 1，待粮食内部无白芯即 可。煮制结束捞出控水，表面无水渍即可拌入辅料。 表1 不同粮食种类煮制所需时间情况 粮食种类 小麦 谷粒 高粱 玉米 荞麦 燕麦 煮制时间（水开 以后计时 /min） 3～5 15～20 25～35 35～45 25～35 5～8 DB15/T 1055 —2024 4 枝条规格可选用 125 mm×5 mm×7 mm或125 mm×3 mm×7 mm；枝条需要提前浸泡 12 h以上，需要 水全部漫过枝条，待内部无白芯捞出控水，枝条表面无水渍即可拌入辅料 。 6.1.4 装袋（瓶） 采用装袋（瓶）机或人工进行装袋（瓶），人工装袋（瓶）需用打孔器在袋口处打孔，孔直径 1 cm～ 1.5 cm，深度为 8 cm～12 cm，每袋（瓶）装培养基 500 g～600 g。 枝条菌种人工装袋，每袋装入枝条 110～120根，顶端可放 30 g～50 g粮食菌种或棉籽壳菌种 。 6.1.5 灭菌 培养基质装袋（瓶） 4 h内进行灭菌，灭菌可分为高压灭菌和常压灭菌。 高压灭菌： 组合培养基在 121 ℃～124 ℃（0.11 MPa ～0.14 MPa ） 下灭菌2 h； 粮食培养基在 121 ℃～ 124 ℃（0.11 MPa ～0.14 MPa ）下灭菌 2.5 h。 常压灭菌：在 3 h之内使灭菌温度达到 100 ℃，保持 10 h～12 h。 6.1.6 接种 原种、栽培种在超净工作台或接种箱内接种，接种前打开紫外灯照射 30 min，接种时用 75%酒精对 超净工作台或接种箱进行表面擦拭消毒。每个原种接入 2 cm～3 cm的母种块；每个栽培种接入原种量不 应少于15 g。菌种都应从容器开口处接种，不应打孔多点接种。 要严格按无菌操作接种，每批接种应为单一品种，如中途换品种时采用 7