SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4634—2016 茶黄蓟马检疫鉴定方法 Detection and identification of Scirtothrips dorsalis Hood 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T46342016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江西出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫 局、中华人民共和国新疆出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院植物检疫研究所、江西农业大学 本标准主要起草人：黄丽莉、高渊、王独、祝建新、阙海勇、陈乃中、车飞、薛芳森、何海敏。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4634—2016 茶黄蓟马检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了茶黄蓟马的检疫和鉴定方法。 本标准适用于进出境植物及其产品传带的茶黄蓟马的检疫和鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 注：其他蓟马分类学常见术语图参见附录A。 2.1 过渐变态 hyperpaurometabola 为不全变态中特殊的一类，其若虫在变为成虫前要经过一个不食又少动的类似蛹的虫龄。 2.2 叉状感觉锥 forked sense cones 位于触角第Ⅲ、IV节上、呈叉状的感觉器官。 2.3 后单眼繁 postocular setae 位于单眼三角区后侧的1对刚毛。 3 茶黄蓟马基本信息 学名：ScirtothripsdorsalisHoods,1919 英文名：Chillithrips 异名:Anaphothrips andreae Karny;Anaphothrips fragariae Giard;Heliothrips minutissimus Bagnall Neophysopus fragariae Girault;Scirtothrips andreae (Karny);Scirtothrips fragariae (Grault);Scirtothrips minutissimus(Bagnall); Scirtothrips padmae Ramakrishna; Scirtothrips dor- salis var.padmae Ramakrishna. 分类地位：属缨翅目（Thysanoptera）、蓟马科（Thripidae）、硬蓟马属（Scirtothrips）。为过渐变态昆 虫，一生要经过卵、若虫和成虫三个阶段。该属内在形态上与茶黄蓟马近似的种主要有S.aurantii，S. 茶黄蓟马的其他信息参见附录B。 4方法原理 依据该虫的危害习性和危害状进行检测，收集样本。分类鉴定以成虫的形态特征作为鉴定依据，以 PCR特异性扩增片段作为鉴定的参考依据。 1 SN/T 4634—2016 5仪器、用具及试剂 5.1仪器设备 体视显微镜、生物显微镜、扫描电镜、PCR仪、电泳仪、凝胶成像、超低温冰箱。 5.2用具 手持放大镜、小镊子、解剖针、剪刀、白瓷盘、脱脂棉、载玻片、盖玻片、吸管、小毛笔、玻璃瓶、酒精灯、 小玻瓶。 5.3试剂 5%氢氧化钾、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、蒸馏水、二甲苯、丁香油、中性树胶、蓟马保 存液（75%乙醇：冰醋酸=20：1）、Hoyer氏液（阿拉伯胶30g，水合氯醛200g，甘油20g，蒸馏水 50mL，混合加热，待充分融合后再过滤）、六甲基二硅胺烷（HMDS）。 Tris（三羟甲基氨基甲烷）、EDTA（乙二胺四乙酸）、NaCI、SDS（十二烷基硫酸钠）、蛋白酶K、10X PCR反应缓冲液、MgCl2、PCR引物sdi-16F/sdi-20R、Taq聚合酶、dNTP、DNAMarker、溴化乙锭 (EB)。 6现场检查 检查切花、切枝时，先在地上或实验台上置一白瓷盘，最好再铺上一层深色纸，然后倒持切花、切枝 轻轻抖动，蓟马受惊后会从切花、切枝掉落到盘上，将盘上的蓟马用蘸有75%乙醇的小毛笔收集到盛有 蓟马保存液的透明小瓶内 检查植株时，应注意检查叶面和叶背、枝条、幼果、花萼的隐蔽处，仔细观察是否有蓟马为害状，其中 是否隐藏该虫；尤其要注意嫩枝上的弯曲叶片、呈银化或褐斑、线性增厚的叶片、花萼和幼果的果蒂等 部分。 检查果实时，观察果实表面是否有灰色至黑色的疤痕且成弯曲的、不规则的、交错的条纹状；仔细检 查果实的表面，尤其是果柄处、盛放果实的包装内壁、夹缝处，如发现肉眼可见两头尖、行动迅速、体长约 0.6mm~1mm的昆虫，将其放人保存液中。 在25℃～30℃下，卵历期5d～8d,可在室温下将样品植株插于盛装适量水的容器内保湿，冬天 可在25℃植物生长箱内放置8d，之后检查是否有若虫。或直接将可能有虫卵的叶片剪下，浸泡于 息服务平台 75%乙醇中，待叶片变色后，置体视显微镜下检查。口 7玻片标本制作 茶黄蓟马成虫的玻片标本参照附录C进行制备。 8鉴定 8.1硬蓟马属(Scirtothrips Shull)成虫的主要形态特征（属种的检索表及与相似种的区别参见附录D、附录E) 8.1.1体长 雌虫0.666mm~1.125mm，雄虫0.405mm~0.882mm。 2