ICS 65.020.20 CCS B 05 14 山西省 地方标准 DB14/T 1591—2025 代替 DB14/T 1591-2018 草莓脱毒原原种苗制备技术规程 2025 - 04 - 16发布 2025 - 07 - 16实施 山西省市场监督管理局 发布 DB14/T 1591—2025 I 目次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 外植体选择 ......................................................................... 1 5 脱毒 ............................................................................... 1 6 茎尖初代培养 ....................................................................... 2 7 组培苗继代扩繁 ..................................................................... 2 8 组培苗生根诱导 ..................................................................... 2 9 组培苗驯化移栽 ..................................................................... 3 10 档案管理 .......................................................................... 3 附录A（资料性） 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表 ....................................... 4 附录B（资料性） 草莓脱毒原原种苗出圃登记表 ........................................... 5 DB14/T 1591 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 DB14/T 1591 —2018《草莓脱毒原原种苗制备技术规程》，与 DB14/T 1591 —2018相比， 除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： ——更改了病毒检测方法（见 5.2、2018版的5.2）； ——增加了脱毒原原种苗的保存（见 9.3.3）。 本文件由山西省农业农村厅提出、组织实施和监督检查。 山西省市场监督管理局对本文件的组织实施情况进行监督检查。 本文件由山西省农业农村标准化技术委员会（ SXS/TC19) 归口。 本文件起草单位：山西农业大学。 本文件主要起草人：刘伟、樊新萍、王国平、郭华、史华平、李磊、李志强、程春振、武敏、赵琪、 李倩。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： ——2018年首次发布为 DB14/T 1591 —2018； ——本次为第一次修订。 DB14/T 1591 —2025 1 草莓脱毒原原种苗制备技术规程 1 范围 本文件规定了草莓 脱毒原原种苗制备的术语和定义、外植体的选择、脱毒、病毒检测、茎尖的初代 培养、组培苗的继代扩繁、生根诱导及驯化移栽、原原种苗的保存方式。 本文件适用于草莓脱毒原原种苗的制备。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 3032 草莓脱毒种苗生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 草莓脱毒原原种苗 指脱毒的草莓组培苗移 栽于无草莓病源、虫源的隔离区内生长的植株。 微茎尖脱毒 从匍匐茎上切取约 0.2 mm茎尖分生组织接种至培养基中，分化出的组培苗可脱除病毒。 4 外植体选择 采集时期 外植体宜在结果后期匍匐茎大量抽生阶段进行采集。 选择要求 选取健壮、无病、开花结果正常的草莓植株作为母株，采集刚抽出且叶片未展开的匍匐茎作为外植 体材料。 5 脱毒 脱毒方法 采用微茎尖脱毒法对草莓匍匐茎外植体材料进行脱毒处理。 病毒检测 DB14/T 1591—2025 2 按照NY T 3032的要求执行。 6 茎尖初代培养 初代培养基的选择 按照NY/T 3032 的规定执行。 外植体消毒 切取匍匐茎顶端 2 cm左右作为外植体进行消毒，流水冲洗 0.5 h～2 h 。在超净工作台下，用 75 %酒 精将外植体浸泡 30 s，再用1.0 %次氯酸钠消毒 10 min～15 min 或0.1 %升汞溶液消毒 5 min ～ 10 min， 无菌水冲洗 3次～5次。所用消毒液与外植体体积的比例约为10:1。 茎尖分生组织切取 将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。在解剖镜下用镊子将外植体顶端一层一层小心剥开，直至 露出茎尖分生组织部分，用锋利的解剖刀切取约0.2 mm 的茎尖，接种于初代培养基中。 初代培养条件 初始接种的茎尖暗培养 2 d，之后转置于常规培养条件下培养，培养温度 25 ℃，光照强度 3 000 Lux～5 000 Lux，光照时间 14 h/d～16 h/d ，相对湿度 70 %～75 %。茎尖组织在该培养条件下生长约50 d～60 d形成幼小无根植株后即可转至继代培养阶段。 7 组培苗继代扩繁 继代培养基的选择 按照NY/T 3032 的规定执行。 继代过程的条件控制 草莓组培苗继代培养条件为： 培养温度25 ℃， 光照强度 3 000 Lux ～5 000 Lux ， 光照时间 14 h/d ～ 16 h/d，相对湿度70 %～75 %。继代培养每隔 30 d～40 d 需继代一次。用于制备脱毒原原种苗的组培 苗在继代次数上应控制在 7次以内，总继代培养时间不宜超过一年，即草莓组培苗应在每年重新制备。 组培生产过程应参照附录 A进行详细登记。 8 组培苗生根诱导 生根培养基的选择 按照NY/T 3032 的规定执行。 生根过程的条件控制 用生长健壮且无明显变异的组培苗进行生根诱导。选择高度在2 cm 以上的组培幼苗接种至生根培 养基进行生根。一般无根苗转接至生根培养基培养 30 d左右即有多条根系产生，此时即达到驯化移栽的 条件。生根阶段的培养条件与继代过程相 同。 DB14/T 1591 —2025 3 9 组培苗驯化移栽 组培苗的炼苗措施 将达到驯化移栽条件的组培苗移至塑料薄膜 （或玻璃） 温室或遮阴网室， 温室内温度控制在 10 ℃～ 30 ℃，保持良好的通风条件，在自然光条件下炼苗 7 d左右，每天 10：00～15：00需进行适当遮荫，避 免日光曝晒。采用闭盖炼苗 2 d、松盖炼苗 2 d、开盖炼苗 3 d的方式使组培苗逐渐适应瓶外环境。 移栽基质的准备 移栽基质由草炭、蛭石和珍珠岩按 4：3：1的比例复配而成，同时添加氮、磷、钾比例为 20：10： 20的复合肥料 200 g/m3。移栽容器采用 50孔育苗穴盘，提前装好基质 并浇透水备用。 组培苗移栽及栽后管理 9.3.1 移栽时间与方法 组培苗炼苗后叶片舒展变成深绿色且出现表皮毛，此时即可进行移栽。移栽适宜在晴天的傍晚或阴 天进行。 移栽时需将幼苗用镊子小心地从瓶中夹出， 用清水将根部的培养基清洗干净， 然后将幼苗在 75 % 百菌清可湿性粉剂 800～1 000倍液浸泡杀菌 10 min。杀过菌的幼苗即可移栽至育苗穴盘，移栽时应注意 使根系保持舒展直立的状态，以利于新根的发生与幼苗的成活。 9.3.2 移栽后管理 移栽后将育苗穴盘整齐摆放于温室，然后需立即浇水，并搭建小拱棚外覆 薄膜保湿。第一遍水需浇 透，以利于迅速发根，以后每天上下午需各浇水 1次。移栽后需仔细观察幼苗状态，及时控制温室内环 境条件。移栽 7 d内温室内温度应控制在 25 ℃～30 ℃，湿度 70%以上，并且晴天的 10：00～15：00需特 别注意遮阴。移栽 7 d后草莓植株挺立且有新叶发生则证明移栽成活。 9.3.