ICS65.020.20 CCSB05DB1308 承德市地方标准 DB1308/T376—2025 杏鲍菇液体菌种生产技术规程 2025-01-06发布 2025-01-15实施 承德市市场监督管理局发布DB1308/T376—2025 I前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由承德市农业农村局提出并归口。 本文件起草单位：河北平泉食用菌产业技术研究院。 本文件主要起草人：郭旭彦、王秀清、吴昊、刘桂娟、秦振祎、吕正斌、孙娜、刘洁、孙彦平、孙 嘉镁、赵云云、刘海峰、苏容彦、袁征。DB1308/T376—2025 1杏鲍菇液体菌种生产技术规程 1范围 本文件规定了杏鲍菇液体菌种生产技术的生产环境、前期准备、生产流程、操作方法、菌种质量检 验以及档案记录等内容。 本文件适用于杏鲍菇液体菌种生产。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定 GB5749生活饮用水卫生标准 NY/T528食用菌菌种生产技术规程 NY862杏鲍菇和白灵菇菌种 NY/T1846食用菌菌种检验规程 NY/T2375食用菌生产技术规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4生产环境 4.1厂址选择 符合 NY/T 528 的规定。 4.2厂房 厂房符合 NY/T 2375 要求。厂房内部设置培养基配置室、灭菌室、冷却室、接种室、摇瓶液体菌种 培养室、发酵罐液体菌种培养室等，布局合理。其中培养基配制室、冷却室、摇瓶菌种培养室、发酵罐 菌种培养室空间洁净度达到万级以上；接种室空间洁净度达到百级。生产车间地面耐磨、防水、防腐蚀、 防滑、易清洗，墙角为圆角，墙壁和天花板防潮、防霉、防水、易清洗。 4.3生产用水 符合 GB 5749 的规定。 5前期准备DB1308/T376—2025 25.1设备 发酵罐、恒温摇床、空气压缩机、空气过滤器、冷干机、干燥吸附机、储气罐、高压蒸汽灭菌锅、 蒸汽锅炉、超净工作台、恒温培养箱、显微镜、冰箱，及配套附属设备。 5.2器具 玻璃三角瓶、试管、培养皿、量杯、玻璃漏斗、接种工具及相关辅助器具。 6生产流程 母种活化→接种→培养→发酵罐准备→接种→培养。 7操作方法 7.1母种活化 使用品种和种源符合 NY/T 528 的规定。母种质量符合 NY 862 的规定。接种前取出斜面试管母种， 在室温条件下放置1 d～2 d。 7.2接种 7.2.1培养基配制 7.2.1.1配方 可选择以下配方的一种配置培养基： ——马铃薯（浸出汁） 200 g、葡萄糖 20 g、磷酸二氢钾 1 g、硫酸镁 0.5 g、维生素B1 10 mg、水 1000 mL， pH自然； ——葡萄糖 20 g、蛋白胨 3 g、磷酸二氢钾 1 g、硫酸镁 0.5 g、维生素B1 5 mg、水 1000 mL，pH自 然； ——蔗糖 11.1 g、豆粕粉 2.07 g、磷酸二氢钾 0.67 g、硫酸镁 0.67 g、水 1000 mL，pH自然。 7.2.1.2配置 按照7.2.1.1配制培养基，培养基装量为玻璃三角瓶的1/3～1/5，采用通氧砂芯硅胶塞封口。 7.2.2灭菌 高压蒸汽灭菌，压力 0.105 Mpa～0.125 Mpa，温度121 ℃～123.5 ℃，灭菌 30 min～40 min。 7.2.3接种 将灭菌后的液体培养基放入接种室内超净工作台中，冷却至 20 ℃～25 ℃进行接种。按照无菌操作 要求接种，每瓶接种 0.25 cm2 ～0.5 cm2 琼脂斜面母种块 6 块～8 块。 7.3培养DB1308/T376—2025 3接种后的玻璃三角瓶移至恒温摇床上，在温度 20 ℃～25 ℃和暗光条件下静置 24 h后，启动摇床， 转速 140 r/min～160 r/min，温度 20 ℃～25 ℃，定期检查，及时去除污染或异常的菌种。培养 6 d～7 d， 检验摇瓶液体菌种质量合格后备用。 7.4发酵罐准备 7.4.1发酵罐检查 检查发酵罐是否具有特种设备检验合格证，发酵罐阀门和管路等是否完好，工作正常。 7.4.2发酵罐空消 发酵罐初次及空置后使用、出现污染和更换品种时进行高压蒸汽灭菌，压力 0.105 Mpa～0.125 Mpa， 温度 121 ℃～123.5 ℃，灭菌时间 30 min～40 min，空罐灭菌。 7.4.3投料与定容 7.4.3.1培养基配方：蔗糖1.5% 、豆粕粉0.4% 、酵母浸膏0.3%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05% 、 消泡剂0.03%。 7.4.3.2以罐体总容积60%～70%计算投料总量，按照培养基配方和比例称量原料。 7.4.3.3先将所有原料加适量水搅拌均匀，制备成悬浮液，倒入或用泵抽入发酵罐中，再加水定容至 罐体总容积的60%～70%，拧紧上料口盖。 7.4.4发酵罐实消 高压蒸汽灭菌，压力 0.105 Mpa～0.125 Mpa，温度 121 ℃～123.5 ℃，灭菌时间 60 min～80 min。 7.4.5冷却 灭菌结束后，关闭蒸汽进气阀门，罐温冷却至 100 ℃，提前打开空气进气阀门，罐压保持在 0.04  Mpa～0.05 Mpa。开启冷水阀门将冷水通入发酵罐夹层，罐温冷却至 25 ℃，关闭冷水阀门。 7.5接种 调节排气阀，使罐内压力降至 0.01 Mpa，采用火焰圈法接种，将检验合格的摇瓶菌种接种至发酵罐 内，接种量为1:500～1:1000。接种结束后，罐压调节至 0.04 Mpa～0.05 Mpa。 7.6培养 接种后发酵罐内通气量为料液体积与空气体积比为 1：0.1 ～0.2，罐压保持在 0.04 Mpa～0.05 Mpa， 罐内温度 21 ℃～23 ℃，培养 6 d～7 d，检验发酵罐液体菌种质量合格后即可。 8菌种质量检验 8.1质量要求 8.1.1摇瓶液体菌种 8.1.1.1感官指标 表1给出了摇瓶液体菌种感官指标。DB1308/T376—2025 4表1杏鲍菇摇瓶液体菌种感官指标 项目 要求 发酵液 呈淡黄色，粘稠不分层，具有特殊苦杏仁的香味，无酸、臭或酒精等异味 菌丝体 菌球大小均匀，颜色洁白，表面有毛刺，悬浮于液体培养基 8.1.1.2理化指标 表2给出了摇瓶液体菌种理化指标。 表2杏鲍菇摇瓶液体菌种理化指标 项目 要求 pH值 5.5～6.4 显微镜下菌丝形态和杂菌鉴别 菌丝粗壮，无霉菌、酵母、细菌等活菌体 留存样品无菌检验 无霉菌、酵母、细菌等活菌体 接种后萌发时间 ≤ 24 h 8.1.2发酵罐液体菌种 8.1.2.1感官指标 表3给出了发酵罐液体菌种感官指标。 表3杏鲍菇发酵罐液体菌种感官指标 项目 要求 发酵液呈淡黄色，粘稠不分层，具有特殊苦杏仁的香味，无酸、臭或酒精等异味，发酵 罐排气口气味正常 菌丝体 大小均匀，球状菌丝体颜色洁白，表面有毛刺 8.1.2.2理化指标 表4给出了发酵罐液体菌种理化指标。 表4杏鲍菇发酵罐液体菌种理化指标 项目 要求 pH值 5.5～6.2 生物量（菌丝干重）g/L 10～15 显微镜下菌丝形态和杂菌鉴别 菌丝粗壮，无霉菌、酵母和细菌等活菌体 留存样品无菌检验 无霉菌、酵母、细菌等活菌体 接种后萌发时间 ≤ 24 h 8.2检验方法