SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4604—2016 进出口中药材中真菌毒素的测定 Determination of mycotoxins in Chinese herbal medicine for import and export 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4604—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：聂福平、唐柏彬、杨俊、存显、王国民、李贤良、王昱、吴蕊、田郡、孔德英、 杨惠琴。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4604—2016 进出口中药材中真菌毒素的测定 1范围 本标准规定了进出口中药材中黄曲霉素B1、B2、G1G2、M、M2，赭曲霉素A，伏马菌素B1、B2，T-2 毒素，HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于进出口当归、桔梗、五味子、枸杞、大青叶、金银花、地龙中黄曲霉素BI、B2、G1、G2、 M1、M2赭曲霉素A，伏马菌素BI、Bz，T-2毒素,HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色 谱-质谱/质谱测定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品经PBS溶液和甲醇提取，提取液经稀释、过滤后，用免疫亲和柱净化，洗脱液氮吹干定容后，用 液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。 4试剂材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 业标准信息服务平台 4.1甲醇：色谱纯。V 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 乙酸铵：色谱纯。 4.5 十二水磷酸氢二钠。 4.6 氯化钾。 4.7 磷酸二氢钾。 4.8 氯化钠。 4.9 浓盐酸。 4.10 吐温。 4.11氢氧化钠。 4.12 0.1mol/L盐酸溶液：量取9mL浓盐酸（4.9），用水稀释至1000mL。 4.131mol/L氢氧化钠溶液：称取40.0g固体氢氧化钠（4.11）,用水溶解并稀释至1000mL。 4.14pH7.4PBS溶液：称取2.92g十二水磷酸氢二钠（4.5）、0.20g氯化钾（4.6）、0.20g磷酸二氢钾 (4.7）和8.00gNaCl(4.8)用900mL水溶解，用0.1mol/L盐酸溶液（4.12）或1mol/L氢氧化钠溶液 (4.13)调节pH值到7.4,用水稀释至1000mL。 1 SN/T 4604—2016 4.150.1%吐温PBS溶液：称取0.5g吐温，用pH7.4PBS溶液（4.14)溶解并稀释至500mL。 4.162mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：准确称取0.154g乙酸铵（4.4），用水溶解并转移至1000mL 容量瓶中，加人1mL甲酸（4.3），用水定容至刻度。 乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（4.16），混匀。 4.18黄曲霉素BI、Bz、Gi、G2、M1、M2，赭曲霉素A,伏马菌素BI、B2,T-2毒素,HT-2毒素，二羟基苯 甲酸内脂类标准品：标准物质纯度为≥98%，标准品信息见附录A表A.1。 4.19标准储备液：分别准确称取适量标准物质，用乙睛配制成浓度为100mg/mL的标准储备溶液。 4℃下避光保存。 4.20混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，混合后50℃氮吹至干后用 甲醇-2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（40：60，体积比）（4.17)重新溶解制成适当浓度的混合标准 工作液，4℃下避光保存。 4.21免疫亲和柱：Myco6in1TMLC/MS/MS亲和柱，或相当者。 4.22滤膜：0.22μm，有机系。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g。 5.3高速均质器。 5.4离心机：转速不低于4000r/min。 5.5恒温氮吹装置。 5.6涡旋混合器。 5.7玻璃微纤维滤纸。 5.8粉碎机。 6 试样制备与保存 从所取样品中取出具有代表性样品适量，磨碎混匀后，装人洁净的塑料袋中，密封，并标明标记。 7分析步骤 7.1提取 称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加人1g氯化钠，再加人PBS溶液 （4.14）25mL，均质提取2min，5000r/min离心10min，将全部上清液用玻璃纤维滤纸过滤后得提取 液A：向残渣中加人25mL甲醇，均质提取2min，5000r/min离心10min，取上清液10mL，用PBS （4.14）稀释至100mL，用玻璃纤维滤纸过滤后得到提取液B。 7.2免疫亲和柱净化 将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，将50mL提取液B全部通过免疫亲和柱（流速控制在 1滴/s~2滴/s），然后用10mL含0.1%吐温的PBS（4.15）淋洗亲和柱，再将5mL提取液A通过免疫 亲和柱（流速控制在1滴/s2滴/s），待提取液全部通过亲和柱，用5mL含0.1%吐温的PBS（4.15）和 2