ICS 65.080 CCS B 10 13 河北省 地方 标准 DB 13/T 6076—2025 土壤 萘酚的测定 液相色谱 -三重四极杆质谱法 2025 - 04 - 03发布 2025 - 05 - 03实施 河北省市场 监督管理局 发布 DB 13/T 6076 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由河北省地质矿产勘查开发局提出并归口。 本文件起草单位：河北省地质实验测试中心、河北大学、河北省邢台生态环境监测中心。 本文件主要起草人：秦冲、孙凯茜、孟建卫、王磊、刘爱琴、邹佳洁、李然、刘安、安彩秀、杨 利娟、王立平、闫宏远、刘微、张慧。DB 13/T 6076 —2025 1 土壤 萘酚的测定 液相色谱 -三重四极杆质谱法 警示——实验中使用的有机溶剂和标准物质均具有一定的毒性，溶液的配制及样品前处理过程 应在通风橱内进行，按规定佩戴防护器具，避免吸入呼吸道或直接接触皮肤和衣物。 1 范围 本文件规定了测定土壤中萘酚的液相色谱 -三重四极杆质谱法。 本文件适用于土壤中α -萘酚（1-萘酚）和β -萘酚（2-萘酚）的测定。 当取样量为 2.0 g，定容体积为 10.0 mL 时，α-萘酚和β -萘酚的方法检出限均为 0.01 mg/kg，测 定下限均为 0.04 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 HJ/T 166 土壤环境监测技术规范 HJ 613 土壤 干物质和水分的测定 重量法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法原理 土壤中α-萘酚和β-萘酚用甲醇提取，经浓缩、净化、定容后，用液相色谱 -三重四极杆质谱仪 分离检测。根据保留时间和特征离子定性，外标法定量。 5 干扰和消除 具有相近保留时间及分子离子峰的物质对测定产生干扰，可通过改变流动相、改变定量离子对 或采用高分辨质谱消除干扰。 6 试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂。实验用水为 GB/T 6682 中规定的不含目标化合物的 一级水，使用前需经过空白检验，确认目标化合物浓度低于方法检出限。 甲醇（CH3OH）：液相色谱级。 无水硫酸钠（ Na2SO4）。 在马弗炉中 400 ℃ 烘烤4 h，置于干燥器中冷却至室温，转移至磨口玻璃瓶中，于干燥器内保 存。 α-萘酚（C10H7OH）：纯度大于 99.5 %。 β-萘酚（C10H7OH）：纯度大于 99.5 %。 萘酚混合标准储备溶液： ρ=1000 mg/L。 DB 13/T 6076 —2025 2 分别称取 0.10 g（准确称量至 0.0001 g）α-萘酚（6.3）和β-萘酚（6.4）于100 mL 烧杯中， 用 少量甲醇（ 6.1）溶解， 转移至100 mL 容量瓶中，用甲醇（ 6.1）稀释定容至标线，混匀。 4 ℃ 以下 密封避光冷藏，可保存 3个月。也可直接购买有证标准溶液，参照产品说明书保存。 萘酚混合标准使用液： ρ=10.0 mg/L。 用甲醇（ 6.1）稀释萘酚混合标准储备溶液（ 6.5），4 ℃以下密封避光冷藏，可保存 3个月。 石英砂：粒径 0.150 mm～0.450 mm（100目～40目）。 在马弗炉中 400 ℃ 烘烤4 h，置于干燥器中冷却至室温，转移至磨口玻璃瓶中，于干燥器内 保存。 固相萃取柱：填料为 N-乙烯基吡咯烷酮 /二乙烯基苯共聚物（ 500 mg/6 mL），或其它等效固相 萃取柱。 针式过滤器：滤膜为有机系（聚四氟乙烯材质），孔径 0.22 μm。 氮气：纯度≥ 99.999 %。 7 仪器和设备 采样瓶：棕色玻璃直壁广口瓶，具聚四氟乙烯衬垫， 500 mL。 样品瓶： 2 mL带聚四氟乙烯衬垫螺旋盖的棕色玻璃瓶。 液相色谱 -三重四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI），具备梯度洗脱和多反应监测功能。 色谱柱：填料为 ODS（十八烷基硅烷键合硅胶， C18），粒径 2.6 μm，柱长100 mm，内径3.0 mm。也可使用满足分析要求的其它性能相近的色谱柱。 超声波清洗器：输出功率为 180 W以上，工作频率不低于 40 kHz。 离心机：转速≥ 5000 r/min。 具塞塑料离心管： 50 mL。 浓缩装置：平行浓缩仪、旋转蒸发仪或其它同等性能的设备。 固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。 涡旋混匀器 ：转速≥500 r/min。 冷冻干燥机 。 马弗炉：室温 ～800 ℃。 天平：感量为 0.01 g和0.1 mg。 一般实验室常用仪器设备。 8 样品 样品采集和保存 按照HJ/T 166的相关规定进行土壤样品的采集和保存。样品采集后保存在洁净的采样瓶（ 7.1） 中，密封，于 4 ℃以下避光冷藏运输和保存， 7 d内完成萃取。 样品的制备 将样品放在搪瓷盘或不锈钢盘上，除去枝棒、叶片、石子等异物，充分混匀。采用冷冻干燥机 （7.11）对样品进行脱水干燥，将冻干后的样品进行研磨、过筛，均化处理成 0.250 mm（60目）左右 的颗粒，用于干物质的测定及试样的制备。 如果样品中水分含量超过 30 %，应先采用离心机（ 7.6） 分离出水相，再进行干燥处理。 干物质的测定 按照HJ 613测定冷冻干燥后的 土壤样品干物质含量。 试样的制备 8.4.1 提取 称取2 g（精确至 0.01 g）样品（8.2）至离心管（ 7.7）中，加入 5 g无水硫酸钠（ 6.2）分散混匀， 加入10 mL 甲醇（6.1），密封后用涡旋混匀器（ 7.10）涡旋混匀 2 min，超声提取 10 min，控制提取DB 13/T 6076 —2025 3 时温度不超过 40 ℃ （可将离心管放在冰水浴中） ， 5000 r/min 离心5 min， 将上清液倒入浓缩管中。 用10 mL 甲醇（6.1）重复提取一次，合并两次提取液。 8.4.2 浓缩 向提取液中加入 10 mL水，摇匀，用浓缩设备（ 7.8）于40 ℃浓缩至 10 mL，待净化。 8.4.3 净化 将固相萃取柱（ 6.8）固定在固相萃取装置（ 7.9）上，依次用 5 mL 甲醇（6.1）和5 mL水活化， 始终保持柱头浸润。 然后将待净化液 （ 8.4.2） 过固相萃取柱， 待全部通过后， 用 10 mL水冲洗样品瓶。 洗涤液一并转移至柱上，弃去流出液。加压挤出或抽干萃取柱中的水后，用 10 mL 甲醇（6.1）洗脱， 接收洗脱液，待初始洗脱液流出后，关闭活塞，浸泡固相萃取柱至少 5 min。打开活塞，收集全部洗 脱液，用甲醇（ 6.1）定容至 10.0 mL，混匀，经针式过滤器（ 6.9）过滤，待测。 处理好的试样应 4 ℃以下冷藏、密封、避光保存， 14 d内完成分析。 空白试样的制备 用石英砂（ 6.7）代替实际样品，按照与试样的制备 （8.4）相同的步骤制备空白试样。 9 分析步骤 仪器参考条件 9.1.1 液相色谱参考条件 流动相A：水，流动相 B：甲醇，梯度洗脱程序见表 1；流速： 0.25 mL/min；柱温： 30 ℃；进样 量：10 μL。 表1 梯度洗脱参考程序 时间（min） A（%） B（%） 0.0 80 20 6.0 40 60 15.0 40 60 15.1 0 100 18.0 0 100 18.1 80 20 20.0 80 20 9.1.2 质谱参考条件 电喷雾离子源（ ESI），负离子模式；监测方式为多反应监测（ MRM）。其余条件参见附录 A。 9.1.3 仪器调谐 注意不同厂家的仪器调谐参数存在一定差异，应按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对质 谱仪进行仪器质量数和分辨率的校正，以确保仪器处于最佳测试状态。 校准 9.2.1 标准曲线的建立 移取适量的萘酚混合标准使用液（ 6.6），用甲醇 （6.1）稀释，配制至少 5 个浓度点的标准系 列溶液， 标准溶液中萘酚的质量浓度分别为： 2.00 µg/L，5.00 µg/L，20.0 µg/L，50.0 µg/L，100 µg/L， 200 µg/L（此为参考浓度），混匀后贮存在棕色样品瓶（ 7.2）中，待测。 按照仪器参考条件（ 9.1）由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进行分析，以标准系列溶液中 目标化合物的质量浓度为横坐标，以其对应的峰面积为纵坐标，建立标准曲线。 9.2.2 标准样品的总离子色谱图 DB 13/T 6076 —2025 4 在仪器参考条件（ 9.1）下，α-萘酚和β-萘酚标准样品（ 50.0 µg/L）的总离子色谱图见图 1。 出峰顺序 ：1—β-萘酚；2—α-萘酚 图1 萘酚标准样品总离子色谱图 试样测定 按照与标准曲线的