中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 ICS 67.080.20 CCS B 39 GB/T 45733—2025 银耳中银耳多糖的测定方法 离子色谱法 The determination of polysaccharides in white jully fungus — Ion chromatography 2025 ⁃05⁃30 发布 2026 ⁃06⁃01 实施 国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布GB/T 45733—2025 前　　言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华全国供销合作总社提出 。 本文件由全国银耳标准化工作组 （SWG 9）归口。 本文件起草单位 ：自然资源部第三海洋研究所 、古田县食用菌研发中心 、福建省农业科学院农产品 加工研究所 、福建省祥云生物科技发展有限公司 、厦门谱尼测试有限公司 、古田海旭宝生物科技有限公司 、 安发（福建）生物科技有限公司 、金唐（福建）健康科技有限公司 、太阳树（厦门）生物工程有限公司 、上海 辉文生物技术股份有限公司 、宁德市产品质量检验所 、安诺康（福建）生物科技有限公司 、古田县食用菌 产业发展中心 。 本文件主要起草人 ：张怡评、郑瑜婷、陈伟珠、施丽君、赖谱富、黄宏南、陈祥珍、余新富、丁清、郑春源、 张涵芝、马涛、林丽容、林枝东、刘裕、张李躬、俞穗珍、孙钧政、黄文华、高益槐、韩春霞、陈巧、黄勇云。 Ⅰ GB/T 45733—2025 银耳中银耳多糖的测定方法 离子色谱法 1　范围 本文件描述了银耳中银耳多糖含量的离子色谱测定方法 。 本文件适用于银耳中银耳多糖的测定 。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于 本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 银耳多糖　 polysaccharides in white jully fungus 由担子菌银耳提取的以岩藻糖 、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等为单糖 单元的通过脱水缩合以糖苷键聚合而成的高分子化合物 。 [来源：GB/T 35945 —2018，2.1.8.8，有修改 ] 4　原理 样品经水提取的银耳多糖混合液 ，用三氟乙酸水解 ，产物经阴离子色谱柱分离 ，采用配有脉冲安培 检测器的离子色谱仪测定 ，外标法定性定量 ，以各单糖的峰面积为基准计算出样品中银耳多糖的含量 。 5　试剂和材料 除非另有说明 ，本方法所用试剂均为分析纯 。 5.1　水：GB/T 6682，一级。 5.2　氮气（N2） ：99.5%。 5.3　甲醇（CH 3OH） ：色谱级。 5.4　三氟乙酸 （C₂HF₃O₂） 。 5.5　氢氧化钠 （NaOH） ：色谱级。 5.6　乙酸钠 （CH 3COONa） ：色谱级。 5.7　岩藻糖标准品 （C6H12O5，CAS号：2438 ⁃80⁃4） ：纯度不小于 98%，或等同标准物质 /标准样品 。 5.8　半乳糖标准品 （C6H12O6，CAS号：59⁃23⁃4） ：纯度不小于 98%，或等同标准物质 /标准样品 。 1 GB/T 45733—2025 5.9　葡萄糖标准品 （C6H12O6，CAS号：50⁃99⁃7） ：纯度不小于 98%，或等同标准物质 /标准样品 。 5.10　木糖标准品 （C5H10O5，CAS号：58⁃86⁃6） ：纯度不小于 98%，或等同标准物质 /标准样品 。 5.11　甘露糖标准品 （C6H12O6，CAS号：3458 ⁃28⁃4） ：纯度不小于 98%，或等同标准物质 /标准样品 。 5.12　半乳糖醛酸标准品 （C6H10O7，CAS号：14982 ⁃50⁃4）：纯度不小于 98%，或等同标准物质 /标准 样品。 5.13　葡萄糖醛酸标准品 （C6H10O7，CAS号：6556 ⁃12⁃3）：纯度不小于 98%，或等同标准物质 /标准 样品。 5.14　三氟乙酸溶液 （2 mol/L） ：准确量取 15.00 mL三氟乙酸 （5.4） ，溶于水并稀释至 100 mL，混匀。 5.15　氢氧化钠溶液 （0.05 mol/L） ：称取 2.00 g氢氧化钠 （5.5） ，溶于水并稀释至 1 000 mL，混匀。 5.16　氢氧化钠溶液 （0.25 mol/L） ：称取 10.00 g氢氧化钠 （5.5） ，溶于水并稀释至 1 000 mL，混匀。 5.17　氢氧化钠 （0.10 mol/L）和乙酸钠 （0.15 mol/L）混合溶液 ：称取 4.00 g氢氧化钠 （5.5）和12.30 g乙 酸钠（5.6） ，溶于水并稀释至 1 000 mL，混匀。 5.18　混合标准储备液 ：分别准确称取经过 60 ℃± 2 ℃真空干燥 2 h的岩藻糖 、半乳糖、葡萄糖、木糖、 甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸标准品 0.1 g（精确至 0.000 1 g）置于 100 mL容量瓶中 ，加水溶解并 定容至刻度 ，摇匀，即得质量浓度为 1.0 mg/mL 的标准储备液 ，于4 ℃± 2 ℃冰箱中冷藏保存 ，有效期 3个月。 5.19　混合标准中间液 ：移取 1.00 mL混合标准储备液 （5.18）于10 mL容量瓶中 ，用水定容至刻度 ，摇 匀，现配现用 。 5.20　混合标准工作液 ：准确移取适量混合标准中间液 （5.19）于容量瓶中 ，用水稀释成质量浓度分别为 0.50 µg/mL、1.00 µg/mL、2.50 µg/mL、5.00 µg/mL、10.00 µg/mL 和20.00 µg/mL 的混合标准工作液 ， 可根据试样溶液的质量浓度适当调整混合标准工作液质量浓度 ，现配现用 。 5.21　0.45 µm水性滤膜针头过滤器 （纤维素滤膜除外 ） 。 6　仪器 6.1　离子色谱仪 ：配脉冲安培检测器 。 6.2　真空干燥箱 ：50 ℃~ 150 ℃。 6.3　分析天平 ：感量 0.000 1 g。 6.4　恒温水浴锅 ：室温 ~100 ℃。 6.5　恒温加热磁力搅拌器 ：室温 ~100 ℃。 6.6　离心机 ：转速 ≥10 000 r/min。 6.7　电热恒温干燥箱 。 6.8　氮吹仪 。 6.9　标准筛 ：孔径 0.70 mm。 6.10　水解管 （高硼硅玻璃厚壁耐压 ） ：10 mL。 7　测定步骤 7.1　样品前处理 7.1.1　试样制备 新鲜样品 ：准确称取适量样品置于烘箱 ，50 ℃~ 60 ℃条件下干燥 8 h，按8.1中公式（1）计算含水率 后，粉碎，过标准筛 ，混匀备用 。 2 GB/T 45733—2025 干样品：取适量样品粉碎 ，通过标准筛 ，混匀备用 。 7.1.2　试样提取 准确称取试样 1 g（精确到 0.000 1 g）至125 mL三角烧瓶中 ，加入 60 mL水，用恒温水浴在 100 ℃± 2 ℃条件下搅拌提取 2 h后，放置冷却倒入离心管 ，10 000 r/min离心 10 min，取上清液 ，置于 250 mL容量瓶，离心管沉淀按照上述步骤重复提取 2次，合并上清液于 250 mL容量瓶，加水定容至刻 度，混匀，即为银耳多糖混合液 。 7.1.3　试样水解 准确吸取银耳多糖混合液 （7.1.2）0.5 mL于10 mL水解管中 ，加入 2 mol/L三氟乙酸溶液 0.5 mL， 在110 ℃± 2 ℃电热恒温干燥箱中水解 1.5 h，取出后冷却至室温 ，加入 1 mL甲醇，氮气吹干 ，加水溶解 转移至 5 mL容量瓶中 ，用水定容至刻度 ，混匀，采用 0.45 µm水性滤膜过滤后 ，即为试样溶液 。 7.2　测定 7.2.1　色谱条件 以下分析条件可供参考 ，采用其他条件应验证其适用性 ： a）色谱柱：以季铵盐为功能基 ，聚苯乙烯 /二乙烯基苯聚合物树脂为填料的阴离子交换柱 （3 mm× 150 mm，粒径 6.5 µm） ，或性能相当者 ； b）柱温：30 ℃； c）进样体积 ：10 µL； d）流速：0.5 mL/min ； e）脉冲安培检测器 ：Ag/AgCl 参比电极 ；Au工作电极 ；检测器电位波形程序见表 1； f）流动相：A相为水，B相为氢氧化钠溶液 （0.05 mol/L），C相为氢氧化钠溶液 （0.25 mol/L）， D相为氢氧化钠 （0.10 mol/L）和乙酸钠 （0.15 mol/L）混合溶液 ，梯度洗脱程序见表 2。 表1　检测器电位波形程序 时间 s 0.00 0.20 0.40 0.41电压 V +0.10 +0.10 +0.10 -2.00积分 — 开始 结束 —时间 s 0.42 0.43 0.44 0.50电压 V -2.00 +0.60 -0.10 -0.1积分 — — — — 表2　梯度洗脱程序 0 20.0 20.198 98 402 2 00 0 00 0 60时间 minA %B %C %D % 3 GB/T 45733—2025 35.0 35.1 45.0 45.1 55.040 20 20 98 980 0 0 2 20 80 80 0 060 0 0 0 0表2　梯度洗脱程序 (续) 时间 minA