ICS67.050 CCSX83 中华人民共和国国家标准 GB/T45243—2025 代替GB/T5009.197—2003 保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、 烟酰胺和咖啡因的测定 Determinationofthiamine,riboflavin,pyridoxine,niacin,niacinamideand caffeineinhealthfoods 2025-01-24发布 2025-08-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件规定了食品质量相关技术要求,食品安全相关要求见有关法律法规、政策和食品安全标准等 文件。 本文件代替GB/T5009.197—2003《保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的 测定》,与GB/T5009.197—2003相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了适用范围(见第1章,2003年版的第1章); b) 增加了核黄素的测定(见5.3.2、5.4.2、7.4、7.5、第8章和附录A); c) 更改了试样制备和处理方法(见7.1、7.2,2003年版的5.1); d) 更改了液相色谱参考条件(见7.3,2003年版的5.2); e) 更改了检出限、定量限(见第10章,2003年版的第1章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国特殊食品标准化技术委员会(SAC/TC466)提出并归口。 本文件起草单位:江中药业股份有限公司、杭州市疾病预防控制中心(杭州市卫生监督所)、江苏艾 兰得营养品有限公司、中轻技术创新中心有限公司、浙江新维士生物科技有限公司、健合(中国)有限公 司、中国食品发酵工业研究院有限公司、江苏华膳健康科技有限公司、东鹏饮料(集团)股份有限公司、 安利(中国)日用品有限公司、浙江养生堂天然药物研究所有限公司、通标标准技术服务有限公司、汤臣 倍健股份有限公司、河北晨光检测技术服务有限公司。 本文件主要起草人:陈芳、金铨、徐小明、武竹英、郑敏敏、严俊、钟其顶、安红梅、黎勇、迟华忠、王道兵、 胡海娥、彭先武、黄志明、潘敏尧、罗诗慧、张晓芳、徐浩然、刘洋、常俊、徐军、钟顺好、张沛霞、吴祥骞、 李学莉、刘春丽、王校冬、杨潞芳、黄正华、贺瑞坤、王文昌、岳红卫。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2003年首次发布为GB/T5009.197—2003; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T45243—2025 保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、 烟酰胺和咖啡因的测定 1 范围 本文件描述了保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的高效液相色谱测定 方法。 本文件适用于片剂、粉剂、硬胶囊、软胶囊、口服液、饮料、凝胶糖果等剂型形态保健食品中硫胺素、 核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样经20%甲醇-0.1%磷酸溶液提取和稀释后,经高效液相色谱柱分离、紫外检测器检测,以保留 时间定性,外标法定量。 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用色谱纯试剂。 5.1 试剂 5.1.1 水,按GB/T6682规定的一级水。 5.1.2 甲醇(CH3OH)。 5.1.3 乙腈(CH3CN)。 5.1.4 1-癸烷磺酸钠(C10H21NaO3S)。 5.1.5 磷酸(H3PO4):分析纯。 5.1.6 盐酸(HCl):分析纯。 5.1.7 酸性磷酸酶:酶活力≥0.5U/mg。 5.2 试剂配制 5.2.1 20%甲醇-0.1%磷酸溶液:量取200mL甲醇(5.1.2),1mL磷酸(5.1.5),用水稀释至1000mL,超声 1GB/T45243—2025 5min,混匀。 5.2.2 盐酸溶液(0.1mol/L):移取9mL的盐酸(5.1.6),用水稀释至1000mL,混匀。 5.2.3 盐酸溶液(1∶1体积比):量取100mL的盐酸(5.1.6),缓缓倒入100mL水中,混匀。 5.2.4 流动相A:5mmol/L1-癸烷磺酸钠溶液(含0.15%磷酸)。称取1.22g1-癸烷磺酸钠(5.1.4),用 950mL水溶解,加入1.5mL磷酸(5.1.5),用水稀释至1000mL,超声5min,混匀。 5.2.5 流动相B:5mmol/L1-癸烷磺酸钠-90%乙腈溶液(含0.15%磷酸)。称取1.22g1-癸烷磺酸钠 (5.1.4),用100mL水溶解,加入1.5mL磷酸(5.1.5),加入到900mL乙腈(5.1.3)中,超声5min,混匀。 5.3 标准样品或标准物质 5.3.1 盐酸硫胺素标准品(C12H17ClN4OS·HCl,CAS号:67-03-8):纯度不低于98%,或经国家认证并 授予证书的标准样品或标准物质。 5.3.2 核黄素标准品(C17H20N4O6,CAS号:83-88-5):纯度不低于98%,或经国家认证并授予证书的标 准样品或标准物质。 5.3.3 烟酸标准品(C6H5NO2,CAS号:59-67-6):纯度不低于98%,或经国家认证并授予证书的标准样 品或标准物质。 5.3.4 烟酰胺标准品(C6H6N2O,CAS号:98-92-0):纯度不低于98%,或经国家认证并授予证书的标准 样品或标准物质。 5.3.5 盐酸吡哆醇标准品(C8H11NO3·HCl,CAS号:58-56-0):纯度不低于98%,或经国家认证并授 予证书的标准样品或标准物质。 5.3.6 咖啡因标准品(C8H10N4O2,CAS号:58-08-2):纯度不低于99%,或经国家认证并授予证书的标 准样品或标准物质。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 硫胺素标准储备溶液(1mg/mL):称取盐酸硫胺素标准品(5.3.1)12.7mg(精确至0.1mg,相当 于硫胺素10mg),用0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻 璃容器中,在2℃~8℃冰箱中贮存,有效期3个月。 5.4.2 核黄素标准储备溶液(0.1mg/mL):称取核黄素标准品(5.3.2)10mg(精确至0.1mg),加入 2mL盐酸溶液(5.2.3),超声溶解后,立即用水定容至100mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器 中,在2℃~8℃冰箱中贮存,有效期3个月。 5.4.3 烟酸标准储备溶液(1mg/mL):称取烟酸标准品(5.3.3)10mg(精确至0.1mg),用0.1mol/L盐 酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器中,在2℃~8℃冰箱中贮 存,有效期3个月。 5.4.4 烟酰胺标准储备溶液(1mg/mL):称取烟酰胺标准品(5.3.4)10mg(精确至0.1mg),用 0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器中,在2℃~8℃ 冰箱中贮存,有效期3个月。 5.4.5 吡哆醇标准储备溶液(1mg/mL):称取盐酸吡哆醇标准品(5.3.5)12.2mg(精确至0.1mg,相当 于吡哆醇10mg),用0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻 璃容器中,在2℃~8℃冰箱中贮存,有效期3个月。 5.4.6 咖啡因标准储备溶液(1mg/mL):称取咖啡因标准品(5.3.6)10mg(精确至0.1mg),用 0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器中,在2℃~8℃ 冰箱中贮存,有效期3个月。 5.4.7 混合标准中间溶液(50μg/mL):分别移取硫胺素标准储备溶液(5.4.1)、烟酸标准储备溶液 (5.4.3)、烟酰胺标准储备溶液(5.4.4)、吡哆醇标准储备溶液(5.4.5)、咖啡因标准储备溶液(5.4.6)各 2GB/T45243—2025 2.5mL,核黄素标准储备溶液(5.4.2)25mL于50mL容量瓶中,以20%甲醇-0.1%磷酸溶液(5.2.1)定 容。混匀后转移入棕色玻璃容器中,临用现配。 5.5 系列标准工作溶液配制 分别移取混合标准中间溶液(5.4.7)0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL至5mL容量瓶 中,用20%甲醇-0.1%磷酸溶液(5.2.1)定容。该标准系列工作溶液浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、 5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL。临用现配。 5.6 材料 滤膜:0.45μm,有机系。 6 仪器设备 6.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器或相当者。 6.2 天平:感量0.1mg和0.01g。 6.3 超声波清洗器。 6.4 涡旋混合器。 6.5 恒温水浴锅。 6.6 高速粉碎机。 6.7 高速离心机:转速不低于8000r/min。 7 分析步骤 7.1 试样制备 不同剂型形态试样制备步骤如下: a) 片剂:取不少于20片或不少于10g样品,经高速粉碎机或研钵磨成粉状,混匀,封存备用; b) 粉剂:取不少于5袋或不少于10g样品,混匀,封存备用; c) 硬胶囊:取不少于2