SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4065—2014 出口植物性中药材中富马酸单甲酯和 富马酸二甲酯残留量的测定 液相色谱法 Determination of methyl hydrogen fumarate and dimethyl fumarate in botanic Chinese medicinal material for export-Liquid chromatography method 行业标准信息服务平台 2014-11-19发布 2015-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4065—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：唐柏彬、曹淑瑞、郑小玲、邓晓军、存显、张雷、王国民。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4065—2014 出口植物性中药材中富马酸单甲酯和 富马酸二甲酯残留量的测定 液相色谱法 1范围 本标准规定了出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的液相色谱测定方法。 酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯用乙酸乙酯提取，提取液经离心、过滤、浓缩后，经氨基复合石 墨碳柱固相萃取分离、净化，淋洗液经浓缩、定容后，用液相色谱仪测定，外标法定量 4试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 标准信： 4.1甲醇：色谱纯。 4.2 乙酸乙酯：色谱纯。 4.3 冰乙酸：色谱纯。 4.4石 磷酸。 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温.于密封瓶中备用。 4.6 0.05%磷酸：移取0.5mL磷酸，用水稀释至1000mL。 4.7 液相色谱流动相：甲醇-0.05%磷酸（35十65，体积比）。 4.8 冰乙酸-乙酸乙酯溶液（2+98.体积比）：移取2mL冰乙酸用乙酸乙酯稀释至100mL 4.9标准品和标准储备液：富马酸单甲酯标准品（Methylhydrogenfumarate，CsH.O4，CAS号2756- 87-8）：纯度大于等于99%；富马酸二甲酯标准品（Dimethylfumarate，CH：O4，CAS号624-49-7）：纯度 大于等于98%。准确称取适量标准品，用甲醇配制成1000uμg/mL的单个标准储备溶液，0℃~4℃ 保存。 4.11混合标准工作溶液：临用前取适量10μg/mL混合标准中间液（4.10），用流动相（4.7）稀释成 1 SN/T4065—2014 0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL.0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL和5.0μg/mL 的标准工作液。 4.12氨基复合石墨碳固相萃取柱：各0.5g，6mL，或相当者。使用前用10mL甲醇、10mL冰乙酸-乙 酸乙酯溶液（4.8）活化，保持柱体湿润。 4.13微孔滤膜：0.22μm，有机系。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2分析天平：感量0.00001g、0.01g。 5.3高速粉碎机。 5.4 二号筛：24目，850μm±29μm。 5.5振荡器。 5.6 离心机：转速不小于7000r/min。 5.7F 固相萃取装置。 5.8氮吹仪。 5.9减压旋转蒸发器。 5.10 具塞离心管：50mL。 5.11 浓缩瓶：150mL。 6试样制备与保存 6.1五味子、陈皮、苦杏仁、决明子、豆蔻、牛劳子等 取不少于200g样品，用高速粉碎机粉碎，过二号筛，取通过筛网的药材粉末装人洁净的容器内，密 闭并标明标记，于0℃～4℃保存。 6.2 枸杞、山茱英等 取不少于200g样品，于-18℃冷冻2h以上，取出后迅速进行高速粉碎，粉碎后的样品再装入洁 净容器内，密闭并标明标记，于-18℃保存。 准信息服 7测定步骤 7.1提取 称取2.5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入5g无水硫酸钠和20mL乙酸乙酯，振荡 提取30min，7000r/min离心5min，将上清液过滤至150mL浓缩瓶中，用20mL乙酸乙酯再重复萃 取1次，合并萃取液，于35℃减压浓缩至约1mL，加入4mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8），待净化 7.2 2净化 将7.1所得待净化溶液全部转移至活化好的氨基复合石墨碳固相萃取柱（4.12)中，收集流出液，并 用5mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8）分两次洗涤浓缩瓶，洗涤液合并上柱，再用5mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8） 淋洗固相萃取柱，收集全部流出液于刻度试管中，于35℃水浴小心氮吹至近干，用5mL流动相（4.7）溶 解残渣，4000r/min离心3min，取下层溶液过0.22μm微孔滤膜，用液相色谱仪测定。