SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3869—2014 出口水产品中雪卡毒素的测定 Determination of ciguatoxin in aquatic product for export 行业标准信息服务平台 2014-01-13发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3869—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任， 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心、厦门市疾病预防控制 中心。 本标准主要起草人：张缙、徐敦明、陈达捷、曾三妹、周昱、林立毅、张志刚、陈鹭平。 行业标准信息服务平台 SN/T38692014 出口水产品中雪卡毒素的测定 1范围 本标准规定了出口水产品中雪卡毒素的液相色谱-质谱/质谱测定方法， 本标准适用于老虎斑、老鼠斑、红斑、苏眉鱼和虎鳗鱼肉及内脏中雪卡毒素（太平洋雪卡毒素-1,P- CTX-1)的检测与确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 采用甲醇提取试样中的雪卡毒素，提取液经C18和硅胶固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测 和确证，外标法定量。 4试剂材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：液相色谱纯。 4.2正已烷：液相色谱纯。 4.3中性氧化铝：100目～200日。 4.4无水硫酸钠：550℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，于密封瓶中备用。 4.5 三氯甲烷。 4.6 乙酸铵。 4.7氯化钠。 4.81mol/L氯化钠溶液：准确称取5.845g氯化钠于100mL容量瓶中，用水定容至刻度线。 4.910mmol/L乙酸铵溶液：准确称取0.077g乙酸铵于100mL容量瓶中，用水定容至刻度线 4.10甲醇-10mmol/L乙酸铵溶液（1+1，体积比）：准确称取0.077g乙酸铵于100mL容量瓶中，加 入50mL水溶液，再用甲醇定容至刻度线。 4.11三氯甲烷-甲醇（9+1，体积比）：准确量取50mL甲醇于500mL容量瓶中，再用三氯甲烷定容至 刻度线。 4.12雪卡毒素（P-CTX-1）标准品：纯度≥90%。 4.13标准储备溶液：1mg/L。准确称取适量的雪卡毒素标准物质，用甲醇配制成浓度为1mg/L的标 准储备溶液，一18℃以下避光可保存6个月。 4.14标准中间溶液：0.01mg/L。吸取适量标准储备溶液（4.13），用甲醇稀释成0.01mg/L的混合标 1 SN/T 3869—2014 准工作溶液，一18℃以下避光可保存3个月。 4.15 5基体匹配标准工作溶液：吸取适量的标准中间溶液（4.14），用空白样品提取液配成浓度为0.0μg/L、 0.1μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L的基质匹配标准工作溶液。现配现用。 4.16C18固相萃取柱：200mg，3mL。使用前依次用6mL甲醇和6mL水活化，保持柱体湿润。 4.17硅胶固相萃取柱：200mg，3mL。使用前用6mL三氯甲烷活化，保持柱体湿润。 4.18微孔滤膜：0.22μm，有机相型。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。 5.2分析天平：感量为0.1mg和0.01g。 5.3均质器。 5.4涡旋振荡器。 5.5 超声波振荡装置。 5.6 氮吹浓缩仪。 5.7 高速离心机：转速不低于5000r/min。 5.8 移液器：量程为10μ~100μL和100μ~1000μL。 6 试样制备与保存 6.1注意事项 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生目标分析物含量的变化。 6.2鱼肉 取代表性样品约500g，切成小块，经冻干后用粉碎机充分粉碎，混匀。试样均分为两份，装入洁净 容器，密封并标明标记。于-18℃以下冷冻存放。 6.3鱼内脏 取代表性样品约100g，切碎后，用捣碎机将样品加工成浆状，混匀。试样均分为两份，装人洁净容 器，密封并标明标记。于一18℃以下冷冻存放。 信息服务 7测定步骤 7.1提取 称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加人10mL甲醇与5mL正已烷，均质提 取1min，加入2g中性氧化铝和2g无水硫酸钠，涡旋混匀后超声波振荡提取15min，于5000r/min 离心3min，弃去上层正已烷，将甲醇转移至试管中。残渣再用5mL甲醇重复提取一次，合并提取液， 45℃下用氮气吹至5mL左右，加入5mL水，混匀后待净化。 7.2净化 将提取液（7.1)转入处理过的C18固相萃取柱中，以约1滴/s的流速使样液全部通过固相萃取柱，再 2