SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2651—2010 肉及肉制品中常见致病菌检测方法 基因芯片法 Determination of pathogenic bacteria in meat and meat products- Gene chip method 行业标准信息服务平台 2010-11-01发布 2011-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2651—2010 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、博奥生物有限公司暨生物芯片北京国家 工程研究中心。 本标准主要起草人：肖进文、李应国、刘生峰、王昱、聂福平、谭志、周庆、张亮、臧庆伟。 行业标准信息服务平台 SN/T2651—2010 肉及肉制品中常见致病菌检测方法 基因芯片法 1范围 本标准规定了肉及肉制品中沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲杆菌 和大肠杆菌O157：H7的基因芯片检测方法。 本标准适用于肉及肉制品中沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲杆菌 和大肠杆菌O157：H17的基因芯片检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检验 SN0170 出口食品中沙门氏菌（包括亚利桑那菌）检验方法 SN 0172 出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法 SN0175 出口食品中弯曲杆菌检验方法 SN/T0184.1出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法 SN/T0973 进出口肉、肉制品以及其他食品中肠出血性大肠杆菌O157：H7检验方法 业标准信息 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 基因芯片DNAchip 服务平台 核酸检测探针按照有序的行列格式点制在固相支持物上，通过特定温度下与相应样品进行杂交而 用于样品中核酸种类定性分析的一种高通量技术。 4生物安全要求 4.1环境要求 实验室的安全防护按照GB19489中的有关规定执行。 4.2废弃物处理和防止污染措施 检测过程中的废弃物需经121℃高压灭菌处理至少30min后再弃置。检测过程中防止交叉污染 的措施按照标准GB/T27403的规定执行。 1 SN/T 2651—2010 5方法概述 重PCR扩增。扩增产物与固定有5种目标致病菌特异性探针的基因芯片进行杂交，用芯片扫描仪对杂 交芯片进行扫描并判定结果。阳性结果用传统方法确证。 6设备和材料 6.1高压灭菌锅。 6.2恒温培养箱。 6.3 微需氧培养装置。 6.4高速离心机（20000g以上）。 6.5水浴锅37℃、42℃、70℃)。 6.6 PCR超净工作台。 6.7 PCR仪。 6.8 水平式电泳仪。 6.9 凝胶成像分析系统。 6. 10 水浴摇床 6. 11 基因芯片扫描仪。 6. 12 基因芯片清洗仪（可选）。 6.13 芯片杂交盒。 6. 14 微量可调移液器和灭菌吸头：2L、10μL、100μL、200μL、1000μL。 行业标准信息服务平台 6. 15 灭菌PCR反应管。 7培养基和试剂 7.1缓冲陈水增菌液(BP)(见附录A.1)。 7.2四硫磺酸盐煌绿增菌液（TTB)（见附录A.2） 7.3改良缓冲蛋白陈水(MBP)(见附录A.3)。 7.4增菌培养液（EB)（见附录A.4)。 7.510%氯化钠胰蛋白陈大豆肉汤（见附录A.5）。 7. 6 弯曲杆菌增菌肉汤（见附录A.6）。 7.7 改良E.C新生霉素增菌肉汤[m（EC)n]（见附录A.7）。 7.8电泳级琼脂糖 7.9晶芯食源性致病微生物检测芯片试剂盒1 7.9. 1 PCR引物序列（参见附录B)。 7.9.2芯片探针序列（参见附录B）。 7.9.3 缓冲液GA:25mmol/LEDTA和5%SDS,pH8.0。 7.9.4 缓冲液GB:5mmol/L盐酸胍。 1）该试剂盒是博奥生物有限公司提供的产品的商品名，是适合的市售产品的实例，给出这一信息是方便本标准的 使用者，并不表示对这一产品的认可。如果其他等效产品具有相同功效，则可使用这些等效产品。 2