SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2552.6—2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第6部分：柠檬酸杆菌检验 Microbiological examination for milk and milk products hygiene- Part 6 :Detection of Citrobacter spp. 行业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2552.6—2010 前言 SN/T2552《乳及乳制品卫生微生物学检验方法》分为十三个部分： 第1部分：取样指南； 第2部分：检验样品的制备与稀释； 第3部分：酵母、霉菌菌落计数； - 第4部分：嗜冷菌微生物菌落计数； 第5部分：沙门氏菌检验； 第6部分：柠檬酸杆菌检验； 第7部分：阴沟肠杆菌检验； 第8部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验； 第9部分：克雷伯氏菌检验； 第10部分：阪崎肠杆菌检验免疫荧光法； 第11部分：蜡样芽孢杆菌的分离与计数； 第12部分：单核细胞增生李斯特氏菌检测与计数； 第13部分：假单孢菌属的分离与计数。 本部分是SN/T2552的第6部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山西出入境检验检疫局、北京农业生 物技术研究中心。 本部分主要起草人：李卫华、张建军、王永勤、罗秀珍、王旭、张敏爱、赵贵明。 业标准信息服务平台 I SN/T 2552.6—2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第6部分：柠檬酸杆菌检验 1范围 SN/T2552的本部分规定了乳粉中柠檬酸杆菌的最可能数计数方法。 本部分适用于乳粉中柠檬酸杆菌（属或种）的最可能数检验。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南 SN/T2552.1乳及乳制品卫生微生物学检验方法第1部分：取样指南 3术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1柠檬酸杆菌属Citrobacterspp. 柠檬酸杆菌拉丁学名CitrobacterWerkman和Gillen，1932），革兰氏阴性兼性厌氧菌。直杆菌、直 径约1.0μm，长2.0μm～6.0μm。有呼吸和发酵两种代谢类型。氧化酶阴性。动力试验、ONPG试验 阳性，能利用柠檬酸盐，能够液化明胶，DNA酶试验和V-P试验阴性。根据《伯杰氏细菌学分类手册》， 柠檬酸杆菌属分为弗氏柠檬酸杆菌（C.freundii）、科氏柠檬酸杆菌（C.diversus）和无丙二酸盐柠檬酸杆 息服务平台 菌（C.amalonaticus）三个种。 4仪器、器具及标准菌株 4.1水浴箱：45℃±1℃ 4.2培养箱：35℃~37℃。 4.3吸管:1mL，5mL和10mL。 4.4接种环：直径3mm。 4.5天平：感量0.1g。 4.6样品稀释瓶：100mL，250mL和2000mL三角瓶或其他适宜稀释瓶。 4.7培养皿：直径90mm。 4.8柠檬酸杆菌标准菌株：弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864，科氏柠檬酸杆菌ATCC27156，无丙二酸盐 柠檬酸杆菌ATCC25407（或其他能溯源到上述菌株的标准菌株）。 1 SN/T2552.6—2010 4.9API20E生化鉴定试剂盒1或类似产品。 4.10VITEK生化鉴定系统1或类似设备。 5试剂和培养基 5.1 四硫磺酸盐煌绿增菌肉汤（TTB）：见附录A第A，1章。 5.2 沙门氏菌志贺氏菌分离琼脂（SS）：见附录A第A，2章。 5.3 亚硫酸铋琼脂（BS）：见附录A第A.3章。 5.4 营养琼脂（NA）：见附录A第A.4章。 5.5 氧化酶试验试剂：见附录A第A.5章。 5.6半固体琼脂：见附录A第A.6章。 5.7 ONPG试验培养基：见附录A第A.7章。 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A第A.8章。 5.91 DNA酶甲基绿琼脂：见附录A第A.9章。 5.10 营养明胶：见附录A第A.10章。 5.11 V-P试验培养基及试剂：见附录A第A.11章。 5.12 水杨酸发酵培养基：见附录A第A.12章。 5.13D-戊糖醇发酵培养基：见附录A第A.13章。 5.14 三糖铁琼脂：见附录A第A.14章。 5.15 鸟氨酸培养基：见附录A第A.15章。 5.16 蛋白陈水（靛基质试验用）：见附录A第A.16章。 5.17 丙二酸钠培养基：见附录A第A.17章。 6取样 按SN/T2552.1执行。本部分采用“三管”增菌法定量检测样品中的柠檬酸杆菌，该方法能检测样 7检测步骤 7.1增菌 无菌称取样品100g，10g和1g各三份分别加人2000mL、250mL和100mL样品稀释瓶中，加人 9倍预热到45℃的灭菌蒸馏水（1：10稀释），或者将样品直接称量到装有9倍预热到45C的灭菌蒸馏 水的样品稀释瓶中，振摇使样品充分混匀，36℃土1℃培养18h～24h。 分别移取培养18h～24h的悬液各10mL加入90mL四硫磺酸盐煌绿增菌肉汤（TTC)中.36℃士 1℃培养18h~24h。 7.2分离培养 轻轻混匀增菌液，每份增菌液用接种环接种沙门氏菌志贺氏菌分离琼脂（SS）平板、亚硫酸铋琼脂 （BS）平板。采用三区法或四区法划线，以获得单个菌落。将平板倒置于36℃土1℃，SS琼脂平板培养 1）API20E和VITEK生化鉴定系统是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便 本部分的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2