ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T31799—2015 银毛龙葵检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofSolanumelaeagnifoliumCav. 2015-07-03发布 2015-11-27实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局、山东大学、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人:邵秀玲、张伟、林超、范晓虹、厉艳、宋涛、尼秀媚、甘琴华。 ⅠGB/T31799—2015 银毛龙葵检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了银毛龙葵(SolanumelaeagnifoliumCav.)的检疫鉴定方法。 本标准适用于所有植物原粮、种子及其他产品中混杂的银毛龙葵以及杂草监测工作中银毛龙葵的 检疫鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 星状毛 stellatehair 茄属植物鉴定的重要特征,指从着生点分裂,散生出多个分枝而呈放射状的毛。 2.2 互生 altenate 茎上每个节上着生一个叶片。 2.3 花药 anther 雄蕊顶端产生花粉的膨大部位。 2.4 浆果 berry 由单个雌蕊发育成的肉质果实,具有几个或多个种子,有时也泛指通体多汁或肉质的果实。 2.5 近缘种 relativespecies 一群亲缘关系相近的物种。 2.6 外类群 outgroup 研究者为正确推断内群的系统发育关系,在其研究对象之外选取的与内群有密切联系的分类单元。 外类群是推断系统关系的“参照系”,用于比较的目的,通常参与判断一对或一系列同源性状的相对 极向。 2.7 DNA条形码 DNAbarcoding 通过一段或几段DNA片段而建立起来的物种准确快速识别的分子方法。 2.8 单系 monophyly 包括最近共同祖先及其全部后裔种在内的一个类群。在这个类群内,物种相互之间比类群外的任 何物种有更近的亲缘关系。 2.9 散点图 scatterdiagram 不同的自变量(x,y)在坐标系中形成的二维图称散点图。从散点图中可以直观地看出变量间是否 1GB/T31799—2015 存在相关关系。 2.10 条形码间隔 barcodinggap 对于一段或几段DNA片段,若种间的遗传差异大于种内的遗传差异,两者之间形成了一个明显的 间断称为条形码间隔。 2.11 Levin的茄亚属系统 Levin’sSolanumsubgenusLeptostemonumsystem LevinR.A.等人2006年使用GBSSI、ITS和trnS-trnGDNA区段构建的茄亚属分子分类系统。 该系统对茄属植物中茎和叶通常具刺的400多个物种进行了分类界定,认定该类植物的范围包括Old WorldClade、ElaeagnifoliumClade和CarolinenseClade等十大支系,讨论了各支系间的亲缘关系,其 中银毛龙葵属于ElaeagnifoliumClade支系,这为了解银毛龙葵的所在系统位置及其近缘种,制定其分 子鉴定的取样策略提供了科学依据。详见参考文献。 3 仪器和用具 3.1 仪器设备 3.1.1 体视显微镜(10×~40×;具测微尺)。 3.1.2 PCR仪、高速冷冻离心机、微型涡旋混合仪、微波炉、低温冰箱。 3.2 实验用具 3.2.1 电子秤(精确到0.01kg)、放大镜、白瓷盘、样品袋、套筛、直尺、镊子、小毛笔、培养皿、指形管、标 签、记录纸、标本瓶、标本盒。 3.2.2 微量移液器、PCR薄皮管、离心管、枪头。 4 现场检疫 在现场检疫时,根据银毛龙葵鉴定特征,如发现可疑植物,应拍摄照片并采集植物样本送实验室检 验。植物样本应尽量保持完整,形态学特征完好。 5 实验室检验和鉴定 5.1 植株样本的检验 用肉眼、放大镜或体视显微镜观察,按照6.2、6.3进行鉴定。 5.2 原粮和种子样品的检验 5.2.1 样品制备 视样品多少,取平均样品的1/2~3/4作为检验样品;种子等样品可根据种类、数量等实际情况决 定,样品不足1.0kg的全检。称取并记录检验样品的质量(精确到0.01kg),剩余平均样品加贴标签作 为保存样品保存。发现可疑植株残体的参照8进行植株种类鉴定。 5.2.2 过筛检验 根据检验样品个体的大小确定套筛的规格,人工筛检套筛孔径至少应包括4mm、2.5mm,按照孔 2GB/T31799—2015 径从大到小依次套上套筛并加上筛底,将检验样品倒入最上层的套筛内,盖上筛盖,以回旋法过筛,或用 电动筛振荡,使样品充分分离。把过筛的筛上物和筛下物分别倒入白瓷盘内进行人工挑选,种子鉴定用 样品,要求发育成熟、外形完整。 5.3 镜检鉴定 观察浆果外部形态特征,符合6.2.5、6.3鉴定特征者对种子进一步鉴定;剥开浆果或直接将种子放 在体视显微镜下观察,按照6.2.6、6.3进行鉴定。 5.4 分子鉴定 符合6.2鉴定特征的种子或疑似银毛龙葵的植物体,可种植后根据植株的形态特征进行鉴定或通 过分子鉴定方法进行鉴定,银毛龙葵的分子鉴定方法见附录B。 6 形态特征 6.1 茄属(SolanumL.)主要形态特征 草本或灌木,有时攀援状,有些种类有刺,常被星状毛;叶互生,单叶或复叶;花组成顶生或侧生的各 种聚伞花序或总状花序,很少单生,两性,全部能孕或仅生花序下部的为能孕花,上部的雌蕊退化而趋于 雄性;萼4~5(10),常在果期增大,但不包被果实,齿裂;花冠辐状或浅钟状,白色、黄色、蓝色或紫色,开 放前常折叠,(4)~5裂或几不裂;雄蕊5,稀4,着生于花冠筒喉部,花丝短,间有一枚较长,花药靠合成 一圆锥体,顶孔开裂;子房2室,有胚珠多数;果为浆果。 6.2 银毛龙葵的形态特征 6.2.1 植株 直立多年生灌木状草本,高30cm~80cm,茎、叶处常具橘红色刺,被星状毛(参见附录C中 图C.1)。 6.2.2 叶 单叶,互生,长椭圆形,银白色,长可达15cm,宽0.5cm~2.5cm,边缘常呈波状,叶脉上常具刺(参 见图C.2)。 6.2.3 茎 茎直立,分枝,表面有稠密的银白色绒毛,覆盖着许多细长的橘色刺,幼嫩的茎刺相对较少,成熟的 茎刺会更多、更密集(参见图C.3)。 6.2.4 花序 花蓝色至蓝紫色,稀白色,通常直径在2.5cm~3.5cm左右,但也可到4.0cm,花瓣5,合生;花药 5,黄色,靠合,长5cm~9cm(参见图C.4)。 6.2.5 果实 果实为浆果,光滑,球状,直径1.0cm~1.5cm,绿色带暗条纹,成熟时呈黄色带橘色斑点(参见 图C.5)。 3GB/T31799—2015 6.2.6 种子 种子轻且圆,两侧压扁,平滑,暗棕色,直径在2.5mm~4mm之间(参见图C.6)。 6.3 银毛龙葵近似种的形态特征 6.3.1 S.ellipticumR.Br. 近似种S.ellipticumR.Br.叶片宽椭圆形,嫩叶呈紫色,花药长约2.5cm(参见附录D中D.1.1)。 6.3.2 S.esurialeLindl. 近似种S.esurialeLindl.常与银毛龙葵相混淆,前者具椭圆形叶片;浆果浅黄色或淡黄褐色,直径 1.0cm~1.5cm;花药粗短,长约4cm~5cm;种子2mm~3mm,浅黄褐色(参见D.1.2)。 6.3.3 北美刺龙葵(S.carolinenseL.) 银毛龙葵与检疫性杂草北美刺龙葵植株差异较大,后者叶片常具叶裂,叶片疏被星状毛,具刺;浆果 黄色,直径约1.2cm~1.8cm;花冠白色至紫色;种子2mm~3mm,倒卵形,扁平,有光泽,表面颗粒状, 黄色至淡黄色,而银毛龙葵种子较大,颜色略深(参见D.1.3)。 7 结果判定 符合6.2鉴定特征的植株可判定为银毛龙葵;符合6.2鉴定特征的浆果、种子且分子鉴定结果为阳 性的可判定为银毛龙葵;否则判定所鉴定样本非银毛龙葵。 8 样品保存 8.1 对已鉴定的银毛龙葵植物,应压制标本,连同植株照片一起登记保存。 8.2 对已鉴定的银毛龙葵种子,装入标本瓶登记保存在干燥、防鼠、防虫处。 8.3 登记保存时应至少标明样品的中文名称、学名、科别、产地、日期、鉴定人等。样品至少保存6个 月,有特殊需求保存期可适当延长。保存期满,经灭活后妥善处理。 4GB/T31799—2015 附 录 A (资料性附录) 银毛龙葵相关信息 A.1 背景资料 A.1.1 银毛龙葵基本信息 中文名:银毛龙葵 学名:SolanumelaeagnifoliumCav. 俗名:silverleafnightshade,bull-nettle,prairie-berry,silverleafbitter-apple,silverleaf-nettle, tomato-weed,whitehorse-nettle,satansbos,arrebenta-cavalo等 分类地位:被子植物门(Angiospermae),双子叶植物纲(Dicotyledoneae),合瓣花亚纲 (Sympetalae),管花目(Tubiflorae),茄亚目(Solanineae),茄科(Solanaceae),茄属(SolanumL.)。 传播途径:短距离靠营养体传播,远距离靠种子传播。种子可由风、水、机械、鸟类、动物(或内部或 外部)携带传播。 A.1.2 方法原理 通过观察被检对象中发现的疑似银毛龙葵的植株、果实或种子,根据银