SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1197—2016 代替SN/T1197—2003 油菜中转基因成分检测 普通PCR和实时荧光PCR方法 Detection of genetically modified ingredients in oilseed rape- Conventional and real-time PCR methods 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1197—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准替代SN/T1197—2003《油菜籽中转基因成分定性PCR检测方法》。 本标准与SN/T1197—2003相比，主要技术性差异如下： 修改了标准的中文名称和英文名称； 一增加了实时荧光PCR检测方法； 增加了品系特异性检测方法。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准主要起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：潘良文、李想、吕蓉、杨捷琳、刘月明、高琴。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -SN/T1197—2003。 行业标准信息服务平台 1 SN/T1197—2016 油菜中转基因成分检测 普通PCR和实时荧光PCR方法 1范围 本标准规定了油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性普通PCR和实时荧 光PCR检测方法。 本标准适用于油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性定性检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 转基因 transgene 将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过生物工程技术，使其在该物种中进 行表达，以便使该物种获得新的品种特征。 3.1.2 实时荧光PCRreal-timepolymerasechainreaction 实时荧光聚合酶链式反应。是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时 监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。 3.1.3 内源基因endogenous gene 在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于判定物种特异性。 3.1.4 外源基因 exogenousgene 利用生物工程技术转入的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。 3.1.5 Ct 值 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。 1 SN/T 1197—2016 3.2缩略语 BAR：草丁（铵）膦乙酰转移酶基因（phosphinothricinacetyltransferasegene） BARNASE：ribonucleasegenefromBacillusamyloliquefaciens，来源于解淀粉芽孢杆菌的核糖核 酸酶基因 BARSTAR：specificinhibitorofthebarnasegenefromBacillusamyloliquefaciens，来源于解淀粉 芽孢杆菌的BARNASE基因的特异抑制基因 bp:basepair，碱基对 BXN：nitrilaseenzymegenefromKlebsiellapneumoniaesubsp.Ozaenae，来源于肺炎克雷伯杆菌 臭鼻亚种的睛水解酶基因 CP4-EPSPS:5-enolpyruvylshikimate-3-phosphatesynthasegene，5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因 CruA：CruciferinAgene，油菜种子储藏蛋白基因 CTAB：cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基漠化铵 dATP：deoxyadenosinetriphosphate，脱氧腺苷三磷酸 dCTP：deoxycytidinetriphosphate，脱氧胞苷三磷酸 dGTP：deoxyguanosinetriphosphate，脱氧鸟苷三磷酸 DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸 dNTP：deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷三磷酸 dUTP：deoxyuridinetriphosphate，脱氧尿苷三磷酸 EDTA：ethylenediaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸 GOX：glyphosateoxidoreductasegene，草甘膦氧化还原酶基因 HMGI/Y：Highmobilitygroupproteingene，高移动性蛋白家族基因 PAT：phosphinothricinacetyltransferasegenefromBacillusamyloliquefaciens，来源于解淀粉芽 孢杆菌的草丁麟乙酰转移酶基因 PCR：polymerasechainreaction，聚合酶链式反应 PEP:phosphoenolpyruvatecarboxylasegene，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因 SDS:sodiumdodecylsulfate.十二烷基磺酸钠 pCaMV35S:35Spromoterfromcauliflowermosaicvirus，花椰菜花叶病毒35S启动子 pFMV35S:35Spromoterfromamodifiedfigwortmosaicvirus，玄参花叶病毒35S启动子 pNOS:promoter of nopaline synthase gcne from Agrobacterium tumefaciens来源于农杆菌的胭脂 碱合成酶基因启动子 pTA29:developmentally regulated promoter from -specific TA29 gene from Nicotiana tabacum，来源于烟草的花蕊特异性TA29基因的发育调节启动子 Taq:Taq DNA polymerase,DNA聚合酶 TE:Tris-HCI、EDTA缓冲液 tNOS：terminatorofnopalinesynthasegenefromAgrobacteriumtumefaciens，来源于农杆菌的胭 脂碱合成酶基因终止子 Tris：tris（hydroxymethyl)aminomethane，三（羟甲基）氨基甲烷 UDG：uracilDNAglycosylase，尿嘧啶DNA-糖基酶 UNG酶：uracil-N-glycosylase，尿嘧啶-N-糖基化酶 2