SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0944—2016 代替SN/T0944—2000 出口虾及虾干中吲哚含量的测定 Determination of indole in shrimp and dried shrimp for export 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T0944—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T0944—2000《出口冻虾及虾制品中吲哚检验方法 比色法》。 本标准与SN/T0944—2000相比，主要技术变化如下： 修改了标准名称（见标题）。 删除前言“本标准同时制定了抽样和制样方法”（2000年版的前言）； 将测定范围改为“虾和虾干”（见第1章，2000年版的第1章）； 一修改了规范性引用文件，（见第2章，2000年版的第2章）； 删除了定义、抽样和制样（2000年版的第3章、第4章）； 增加第二法高效液相色谱法。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：浙江省检验检疫科学技术研究院。 本标准主要起草人：侯建波、谢文、吕春华、陆顺、史颖珠、李杰、祝泽龙。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T0944—2000。 行业标准信息服务平台 1 SN/T0944—2016 出口虾及虾干中哚含量的测定 1范围 本标准规定了虾和虾干中吲哚含量的分光光度法和高效液相色谱检测方法。 本标准适用于虾和虾干中吲哚含量的测定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 第一法分光光度法 3原理 样品中的哚随水蒸气蒸馏蒸出，用三氯甲烷萃取，加显色剂振摇，分离出酸层，以乙酸定容，用分 光光度计测定，标准曲线法定量。 4试剂和材料 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 行业标准信。 4.1无水乙醇。 磷酸(H:PO,)。 4.3 浓盐酸（HCI)。 4.4 消泡剂：聚醚。 饱和硫酸钠。 4.6 三氯甲烷（CHCl）。 4.7 显色剂：对二甲氨基苯甲醛，纯度大于或等于98.0%。 显色剂的配制：溶解0.4g对二甲氨基苯甲醛于5mL乙酸中，加92mL磷酸和3mL盐酸混匀 由于对二甲氨基苯甲醛的纯度影响试剂空白的强度，如果试剂是黄色的，则按下述方法提纯。 溶解100g对二甲氨基苯甲醛于600mL盐酸（1十6）中，加300mL水，边用力搅拌边缓慢地加入 10%氢氧化钠溶液沉淀对二甲氨基苯甲醛，一出现白色沉淀，停止加氢氧化钠溶液，过滤，弃去沉淀。继 续中和至对二甲氨基苯甲醛大部分沉淀。弃去4g～5g有颜色的对二甲氨基苯甲醛沉淀。剩余白色 沉淀进行过滤，并用水洗涤沉淀至洗液不再呈酸性。将对二甲氨基苯甲醛干燥，应为白色，置于干燥器 中保存。 4.8乙酸（CH,COOH）：若该试剂与显色剂反应后变为桃红色，则按以下方法提纯：将500mL乙酸、 25g高锰酸钾和20mL硫酸，依次加到1000mL圆底锥形烧瓶中，在全玻璃蒸馏器中蒸馏，收集馏出 液应不大于400mL。 1 SN/T 0944—2016 4.9稀盐酸：浓盐酸-水（5+95）。 4.10吲哚标准品：CAS号：120-72-9，纯度大于或等于99.0%，详细标准物质信息见附录A。 4.11吲哚标准液：精确称取20mg吲哚（4.10），加乙醇溶解，定容至200mL，其浓度为0.10mg/mL。 贮存在冰箱内。 5仪器和设备 5.1分光光度计。 5.2蒸馏装置：使用单独的蒸汽发生器。蒸汽发生器可由1000mL锥形瓶制成。用最短的胶皮管与 全玻璃蒸汽蒸留瓶连接，蒸留瓶容量应在500mL以上，用500mL锥形瓶作接收器（没有保护层的天然 或合成橡胶连接器和塞，会产生不同的蒸馏空白）。 5.3电子天平：感量为0.01g和0.1mg。 5.4分液漏斗：125mL和500mL。 5.5 5均质器。 5.6容量瓶：50mL。 6试样制备与保存 7测定步骤 7.1提取 称取试样25g~50g（取决于所预计的吲哚量）（虾干称取试样12.5g～25g，并加入等量水浸润 2h），移至均质器中，加80mL乙醇，均质（3000r/min，5min）。转人蒸馏瓶中，用少量乙醇冲洗均质 器，加5滴消泡剂（4.4）。 将蒸馏瓶与蒸汽发生器连接，缓慢地供应蒸汽至开始蒸馏（注意通入蒸汽不可太猛以免产生过多泡 沫）。给蒸汽发生器提供足够的热量，使蒸留瓶保持80mL～90mL的体积，在约45min内收集 450mL蒸馏液，用少量乙醇洗涤蒸馏瓶，并人接收瓶中。 将馏出液移至500mL分液漏斗中，加入5mL稀盐酸和5mL饱和硫酸钠溶液，依次用25mL、 20mL和15mL三氯甲烷提取，每次用力振摇1min，放气静置分层。先将25mL和20mL三氯甲烷 提取液合并到另一500mL分液漏斗中，依次加人400mL水、5mL饱和硫酸钠溶液和5mL稀盐酸洗 15mL三氯甲烷提取液，将三氯甲烷合并人同一125mL分液漏斗中。 7.2测定 加10mL显色剂于合并的三氯甲烷提取液中，用力振摇2min，放气静置，使酸层尽可能地分层。 取8.0mL酸层移至50mL容量瓶中，用乙酸稀释定容，混匀，移取该溶液于分光光度计比色池中，在 560nm处测定吸光度A。将8.0mL显色剂用乙酸稀释定容至50mL，混匀，测定空白。 通过蒸汽蒸留一组新制备的吲哚标准工作液，分别移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL按7.1和 7.2制备标准曲线，不加吲哚标准工作液，按同样方法测定蒸馏空白。 2