SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0535—2016 代替SN0535-1996 进出口饲料中棉酚的测定 Determination of gossypol in feed for import and export 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T0535—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规划起草。 本标准代替SN0535—1996《出口饲料中棉酚检验方法液相色谱法》。与SN0535—1996相比，除 编辑性修改外主要技术变化如下： 增加了确证方法； 一技术指标满足多种基质和限量要求。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局检验检疫技术中心，中华人民共和国上海 出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：张文华、黄超群、邹学权、陈玲玲、于卓然、童赞恺、陈丽、汤杭燕。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN0535—1996。 行业标准信息服务平台 1 SN/T0535—2016 进出口饲料中棉酚的测定 1范围 本标准规定了饲料中棉酚的两种测定方法，高效液相色谱法（HPLC法）和液相色谱-质谱/质谱法 (LC-MS/MS 法）。 本标准适用于棉籽饼（粕）、猪饲料和鸡饲料中棉酚的定量测定；液相色谱-质谱/质谱法的定量 确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3第一法高效液相色谱法（HPLC法） 3.1原理 试样用丙酮水溶液提取，过滤膜，用高效液相色谱测定，外标法定量。 3.2 2试剂和材料 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.2.1丙酮：色谱纯。 3.2.2 甲醇：色谱纯。 3.2.3 磷酸。 3.2.4 丙酮-水溶液（70+30，体积比）：准确量取70mL丙酮（3.2.1)和30mL水，混匀后备用。 3.2.50.1%磷酸溶液：1mL磷酸溶解水中，并定容至1L，混匀过滤（0.45μm)后备用 3.2.6棉酚标准品：CAS:303-45-7，纯度为90.5% 3.2.7 （3.2.1)溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备溶液，于4℃避光保存。 服务平台 3.2.8 微孔滤膜：0.22μm，有机系。 3.3 仪器和设备 3.3.1 高效液相色谱（HPLC)仪：配有紫外检测器。 3.3.2 电子天平：感量为0.01g和0.0001g。 3.3.3 离心机：转速不低于4000r/min。 3.3.4振摇仪：转速不低于300r/min。 3.3.5 涡旋混匀器。 3.3.6 塑料离心管：50mL。 3.3.7 研钵。 1 SN/T 0535—2016 3.4试样处理 称取5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加人10mL水浸泡1h，加入丙酮（3.2.1）至 30mL，振摇20min。离心5min后，将上清液转移至50mL棕色容量瓶中，用10mL丙酮-水溶液 （3.2.4）重复提取两次，用丙酮-水溶液（3.2.4）定容至50mL。静置5min，取上清液过微孔滤膜 (3.2.8),供HPLC测定。 3.5高效液相色谱测定 3.5.1HPLC参考条件 HPLC参考条件如下： a) 色谱柱：Cis柱，250mm×4.6mm（内径），粒径5.0um，或功能相当者。 b) 流动相：甲醇（3.2.2）-磷酸溶液（3.2.5）（88+12，体积比），混匀。 c) 流速：1.5mL/min。 波长：238nm。 e) 柱温：25℃。 f) 进样量：10μL。 3.5.2标准曲线绘制 用丙酮（3.2.1)将棉酚标准储备液逐级稀释得到的浓度为1μg/mL、2μg/mL、4ug/mL、6μg/mL、 10μg/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。棉酚 的标准品色谱图参见附录A中图A.1。 3.5.3定量测定 待测样液中棉酚的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。 3.5.4空白试验 除不称取试样外，均按上述测定条件和步骤进行。 3.5.5结果计算 试样中棉酚的含量由色谱数据处理软件或按式（1)计算获得： CXVX1 000 (1) mX1 000 式中 X 试样中棉酚的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准工作曲线得到的棉酚溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； C 分平台 V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m - 最终样液代表的试样量，单位为克（g）。 注：计算结果需扣除空白。 3.6 6方法测定低限 本方法的测定低限为10mg/kg。 3.7回收率和精密度 饲料基质中不同添加浓度水平下的回收率范围见表1。 2