SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0169—2010 代替SN0169—1992,SN0333—1994和SN/T1059.2—2002 进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群 和大肠杆菌检测方法 Determination of coliform,fecal coliform and Escherichia coli in food for import and export 行业标准信息服务平台 2010-11-01发布 2011-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T0169—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN0169—1992《出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》SN0333- 群、大肠杆菌计数滤膜/MUG法》。 本标准与SN0169—1992、SN0333—1994和SN/T1059.2—2002相比，主要技术变化如下： 将原标准名称《出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》、《出口食品中大肠杆 菌（葡萄糖苷酶荧光）检验方法》和《进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数滤膜/MUG法》整 合修订为《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》； SN0169—1992标准的范围不变，但SN0333—1994和SN/T1059.2—2002标准的范围有 限，因此，本标准将范围进行整合修订； 增加了规范性引用文件； 一增加了术语和定义； 一对液体样品MPN法的检测修订为： 液体样品接种量1mL以上者，用双料月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤；接种量1mL及1mL以下 者，则用单料月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤； 平板计数法中删去了计算公式； -MPN值表增加了“95%置信区间”。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：付宝莲、刘中学、侯丽萍、高飞， 准信息服务平台 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN 0169—1992; SN0333—1994; SN/T1059.2—2002。 I SN/T 0169—2010 进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群 和大肠杆菌检测方法 1范围 本标准规定了进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法。 于进出口食品中大肠菌群的检验；β葡萄糖酶荧光法适用于进出口食品（不包括贝类）中大肠杆菌的 检验；滤膜/MUG法适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、饮料、牛奶（需用蛋白酶处理）、单晶糖和 椒粒中大肠菌群和大肠杆菌的检验。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 大肠菌群coliform 需氧及兼性厌氧，能在37℃48h分解乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌。 3. 2 粪大肠菌群fecalcoliform 需氧及兼性厌氧，能在44.5℃士0.5℃，24h发酵乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌，该 菌又可称耐热大肠菌群（thermotolerantcoliformorganisms）。 3. 3 大肠杆菌Escherichiacoli 需氧及兼性厌氧，能在44.5℃士0.5℃48h分解乳糖产酸产气，生化特征"IMViC"为"+十一一或 一十一二”的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌又可称大肠埃希氏菌。 4检验方法 4.1原理 4.1.1最可能近似值（mostprobablenumber，MPN）法 MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其未 生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出大肠菌群、粪大肠菌群或大肠杆菌在 1 SN/T 0169—2010 待测样品中的最大可能数。 4.1.2平板计数法 大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带 有沉淀环的菌落。 4.1.3β-葡萄糖苷酶荧光法 大肠杆菌中的β-葡萄糖苷酶可降解培养基中4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖苷酸（MUG）.并释放4-甲 基伞形酮荧光物质（4-MU），该物质在紫外灯（波长366nm）下会显现蓝色荧光特点。 4.1.4滤膜/MUG法 待测样品通过滤膜过滤时，样品中的天肠菌群和天肠杆菌被截留于滤膜表面。将滤膜贴附于LMG 或BMA琼脂上培养后，大肠菌群在LMG琼脂上会形成蓝色菌落；而BMA琼脂上的大肠杆菌由于葡 萄糖苷降解4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖苷酸（MUG）并释放4-甲基伞形酮，形成紫外光（366nm）下为蓝 白色荧光的菌落。 4.2培养基与试剂 4.2.1生理盐水：见附录A.1。 4.2.2 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液：见附录A.2。 4.2.3J 月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤（LST）：见附录A.3。 4.2.4 煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)：见附录A.4。 4.2.5大肠杆菌肉汤（EC)：见附录第A.5。 4.2.6 伊红美蓝琼脂（EMB）：见附录A.6。 4.2.7 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：见附录A.7。 4.2.8 月桂基硫酸盐胰蛋白陈MUG肉汤（LST-MUG）：见附录A.8。 4.2. 9 Columbia-MUG：见附录A.9。 4.2. 10 蛋白陈-吐温80稀释液（PT）：见附录A.10。 4.2. 11 乳糖莫能菌素葡萄糖酸琼脂(LMG):见附录 A.11。 信息服务平台 4.2. 12 缓冲MUG琼脂（BMA）：见附录A.12。 4.2.13 三（羟甲基）胺甲烷（Tris)缓冲剂：见附录A.13。 4.2.14 营养琼脂斜面：见附录A.14。 4.2. 15 色氨酸肉汤：见附录A.15。 4.2. 16 MR-VP培养基：见附录A.16。 4.2. 17 Korser氏枸橡酸盐肉汤：见附录A.17。 4.2. 18 Kovacs氏靛基质试剂：见附录A.18。 4.2. 19 甲基红指示剂：见附录A.19。 4. 2. 20 VP试剂(VP)：见附录A.20。 4. 2. 21 革兰氏染色液：见附录A.21。 4.2.22 胰蛋白酶贮存液：见附录A.22。 4.3设备与材料 4.3.1培养箱：36℃±1℃,44.5℃±0.5℃。 4.3.2水浴箱:36℃±1℃44.5℃±0.5℃。 2