SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3263—2012 代替SN/T0339—1995.SN/T0637—1997、SN/T1101—2002 出口食品中黄曲霉毒素残留量的测定 Determination of aflatoxins residues in foods for export 行业标准信息服务平台 2012-10-23发布 2013-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3263—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN0339—1995《出口茶叶中黄曲霉毒素B检验方法》、SN0637—1997《出口油籽、坚 果及坚果制品中黄曲霉毒素的检验方法液相色谱法》和SN1101一2002《进出口油籽及粮谷中黄曲霉 毒素的检验方法》。 本标准与SN0339—1995、SN0637-1997和SN1101—2002相比，除编辑性修改外，主要技术变 化如下： 修改了标准的中文名称，标准名称改为《出口食品中黄曲霉毒素残留量的测定》，标准的英文名 称作了相应的修改； 将测定基质扩展为玉米、茶叶、花生果、花生米和苦杏仁； 一删除了SN0339一1995中净化方法和柱前衍生方法； 第一法高效液相色谱法中增加了免疫亲和层析净化法，液相色谱测定柱后衍生增加了光化 学衍生和电化学衍生两种方式； 删除了SN1101一2002中第二法薄层色谱法。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 局、中华人民共和国江西出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：段文仲、郭春海、吕红英、陈瑞春、王凤池、鲍蕾、占春瑞、任世国、郝冬生、 白玉良。 行业标准信息服务平台 I SN/T3263—2012 出口食品中黄曲霉毒素残留量的测定 1范围 本标准规定了出口食品中黄曲霉毒素残留量的高效液相色谱法和荧光光度测定方法。 本标准中高效液相色谱法适用于玉米、茶叶、花生果、花生米和苦杏仁中黄曲霉毒素BI、B2、GI、G2 的测定；荧光光度法适用于玉米、花生果、花生米和苦否仁中黄曲霉毒素总量的测定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 第一法高效液相色谱法 3测定方法 3.1方法提要 试样中的黄曲霉毒素Bi、B2、G1、G2用三氯甲烷提取，提取液经弗罗里硅土柱净化、浓缩，定容[或 用甲醇-水（7十3）提取，提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，以甲醇洗脱」。最后用柱后衍生-液 相色谱荧光检测器法测定，外标法定量。 3.2试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 信息服务平台 3.2.1三氯甲烷。 3.2.2苯：高效液相色谱纯。 3.2.3 乙睛：高效液相色谱纯 3.2.4 甲醇：高效液相色谱纯。 3.2.5丙酮。 3.2. 6 无水硫酸钠：600℃灼烧4h，贮于干燥器中备用。 3.2.7 硅藻土：Celit545。 3.2.8 弗罗里硅土：60～100目，600℃灼烧4h，贮于干燥器中备用，使用前130℃活化4h。 3.2.9 过溴化漠化吡啶（pyridiniumbromideperbromide）。 3. 2. 10 氯化钠。 3.2.11甲醇。 3.2. 12 甲醇-水（7十3，体积比）：量取700mL甲醇（3.2.11)与300mL水混合。 3.2. 13 乙睛-水溶液（1十1，体积比）：量取100mL乙睛（3.2.4）与100mL水混合。 3.2.14 苯-乙睛溶液（98十2，体积比）：量取980mL苯（3.2.2）与20mL乙睛（3.2.3）混合。 3.2.15 三氯甲烷-甲醇溶液（9十1，体积比）：量取900mL三氯甲烷（3.2.1）与100mL甲醇（3.2.11） 1 SN/T 3263—2012 混合。 3.2.16丙酮-水溶液（99十+1，体积比）：量取990mL丙酮（3.2.7）与10mL水混合。 3.2.17柱后衍生液（0.05mg/mL过溴化溴化吡啶水溶液）：称取0.05g过溴化溴化吡啶，溶解于 1000mL水中，以0.45μm的滤膜过滤。 3.2.19黄曲霉毒素B,（CAS编号1162-65-8）、Bz（CAS编号7220-81-7）G,（CAS编号1165-39-5）、G2 （CAS编号7241-98-7）标准物质：纯度大于等于99%。 （3.2.19），用苯-乙睛溶液（3.2.14）配成0.1mg/mL的标准储备液。该溶液于4℃避光保存。 3.2.211Ag/mL的黄曲霉毒素B、Bz、Gl、G2混合标准中间溶液：分别吸取1mL标准储备溶液 （3.2.20）移至100mL容量瓶中，用乙睛（3.2.3）定容至刻度。该溶液在4℃避光保存。 3.2.22黄曲霉毒素B、Bz、G1、G2混合标准工作溶液：根据需要适当移取黄曲霉毒素B、B2、G1、G2、 混合标准中间溶液，用甲醇稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液现用现配。 3.3仪器和设备 3.3.1高效液相色谱仪配有荧光检测器和柱后衍生装置。 3.3.2高速均质器。 3.3.3玻璃纤维滤纸。 3.3.4玻璃注射器：10mL、20mL。 3.3.5空气压力泵。 3.3.6旋涡振荡器。 3. 3. 7 平板摇床。 3.3.8真空泵。 行业标准信息 3. 3. 9 旋转蒸发器。 3.3.10心形瓶。 3.3.11 柱后衍生泵。 3.3. 12 光化学衍生装置。 3.3.13电化学衍生装置。 3.3.14 0.45um滤膜。 3.3. 15 5氮气。 3. 3. 16 3. 3. 17 弗罗里硅土净化柱：玻璃柱，30cm×20cm（内径），用三氯甲烷湿法依次装人1g无水硫酸钠， 0.7g弗罗里硅土（3.2.10）,5g无水硫酸钠， 3. 4测定步骤 3.4.1提取净化（可根据实验条件选用以下任何一种方法） 3.4.1.1免疫亲和层析净化 称取试样25g（精确到0.01g）于250mL具塞锥形瓶中，加入5g氯化钠及125mL甲醇-水 （3.2.12），以均质器高速搅拌提取2min。过滤，移取15.0mL滤液至250mL具塞锥形瓶中，并加入 30.0mL水稀释混勾，以玻璃纤维滤纸过滤几次，直至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化操作。将免 疫亲和柱连接于20mL玻璃针筒下，准确移取15.0mL（相当于1g试样）上述澄清滤液，注入玻璃针筒 中，将空气压力泵与针筒连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速全部过免疫亲和柱，再使2mL～ 2