SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T25342010 进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含 量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 与高效液相色谱法 Determination of patulin in fruit and vegetable products for import and export- LC-MS/MS and HPLC method 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2534—2010 前言 本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国河南出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：杨冀州、祝伟霞、袁萍、刘亚风、郭俊峰、魏蔚。 行业标准信息服务平台 I SN/T 2534—2010 进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含 量检测方法液相色谱-质谱/质谱法 与高效液相色谱法 1范围 本标准规定了水果和蔬菜制品中展青霉素的高效液相色谱检测方法和液相色谱-质谱/质谱检测和 确证方法。 本标准适用于苹果清汁、苹果浊汁、番茄酱、山楂片中展青霉素的高效液相色谱检测方法和液相色 谱-质谱/质谱检测和确证方法。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所 有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面 研究使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3试样的制备与保存 3.1苹果清汁 从所取样品中取出有代表性样品约500g，摇匀后装入洁净容器，密封并标明标记，将试样置于 0℃~4℃条件下避光保存。 3.2苹果浊汁、番茄酱 从所取样品中取出有代表性样品约500g，用玻璃棒搅拌均匀，装人洁净容器作为试样，密封标明标 记，将试样置于0℃～4℃条件下避光保存。 3.3山楂片 并标明标记。将试样置于0℃~4℃条件下避光保存。 在制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 第一法液相色谱-质谱/质谱法 4方法提要 苹果清汁用乙腈稀释后直接固相萃取净化；苹果浊汁、番茄酱、山楂片样品先用果胶酶水解，再以乙 酸乙酯提取，吹干浓缩后固相萃取净化，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。 5试剂和材料 除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1乙睛：高效液相色谱级。 5.2冰乙酸：高效液相色谱级。 5.3乙酸乙酯。 SN/T 2534—2010 5.4 果胶酶溶液（endogalacturonase）：活度为1400U/g。 5.5pH4.0水溶液：量取700mL~800mL水，用冰乙酸调节pH4.0，加水定容至1000mL。 5.6 1%乙酸溶液：量取10mL冰乙酸与990mL水混合。 5.7展青霉素标准品（patulin）：C,H.O4，CAS编号149-29-1，纯度大于等于99.5%。 5.8标准储备溶液：准确称取展青霉素标准品10mg（5.7），用乙酸乙酯溶解并定容至100mL，浓度相 当于100g/mL，储备液贮存于一18℃以下，稳定6个月。 5.9标准中间溶液：准确量取1.0mL标准贮备溶液（5.8），用氮气吹干后溶于pH4.0水（5.5）中，定容 至100mL，浓度相当于1.0μg/mL，储备液贮存于0℃～4℃，稳定3个月。 5.10标准工作溶液：根据需要用空白基质溶液将标准中间溶液（5.9）稀释成适当浓度的标准工作溶 液，标准工作溶液应在使用前配制。 5.11MycoSep228净化柱或相当者"。 5.120.45um微孔滤膜，水系。 6仪器和设备 6.1液相色谱串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)。 6.2分析天平：感量0.1mg，0.01g。 6.3涡旋混匀器。 6.4离心机:4000r/min。 6.5氮气吹干仪。 6.6pH计：测量精度土0.02。 6.7粉碎机。 7测定步骤 7.1样品提取 7.1.1清汁 准确称取2g试样（精确到0.01g）于一具塞试管中，加人6.0mL乙睛，涡旋混匀2min，于 4000r/min离心5min转移全部上清液于试管中待净化。 7.1.2浊汁、番茄酱、山楂片 准确称取5g均匀试样（精确到0.01g）于一具塞试管中，加入20mL水与150μL果胶酶溶液 （5.4）混匀，室温下避光放置过夜，酶解后的溶液加入20mL乙酸乙酯，涡旋提取3min，于4000r/min 离心5min，转移上层乙酸乙酯提取液，再用20mL乙酸乙酯重复提取一次。合并两次乙酸乙酯提取 液，混匀后量取16mL乙酸乙酯于40℃水浴中氮吹浓缩至干，用2.0mL1%乙酸（5.6）溶液溶解残渣， 加入6.0mL乙睛混匀，转移溶液于试管中待净化。 7.2净化 将MycoSep228净化柱（5.11）放于试管正上方，用手缓慢向下推柱体到试管底部，使样液以 1.0mL/min的速度通过柱体（具体操作可参见附录A）。准确量取4.0ml净化液于40℃水浴中氮吹 浓缩至干，用1.0mLpH4.0水溶液（5.5）溶解残渣，经0.45μm滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱 测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 7.3.1.1色谱柱：AtlantisdCis，150mm×2.1mm（内径）3μm或相当者 1) 是由Romerlabs公司提供的展青霉素多功能净化柱的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。